全 文 ：［收稿日期］ 20120904(003)
［第一作者］ 陈艳伟，硕士，主管药师，从事临床药学及制剂质
量控制研究，E-mail:chenyanweile@ 163. com
［通讯作者］ * 梁卉，硕士，主任药师，从事中药制剂质量控制
研究，E-mail:dyyyly@ yeah． net
HPLC同时测定猴耳环消炎胶囊中没食子酸与槲皮素的含量
陈艳伟1，张欢2，杨世磊1，王春富1，梁卉1*
( 1. 大连医科大学附属第一医院临床药学，辽宁 大连 116011;
2. 大连医科大学药学院 辽宁 大连 116044)
［摘要］ 目的:建立高效液相色谱法同时测定猴耳环消炎胶囊中没食子酸与槲皮素的含量。方法:伊利特 Hypersil BDS-
C18(4. 6 mm × 150 mm，5 μm)色谱柱进行色谱分离，以甲醇-磷酸溶液梯度洗脱，流速 1 mL·min
－1，检测波长 254 nm，柱温 30
℃，进样体积 10 μL。结果:没食子酸和槲皮素分别在 15. 0 ～ 180(r = 0. 999 6) ，1. 25 ～ 15. 0 mg·L －1(r = 0. 999 7)线性关系良
好;平均回收率分别为 98. 2%和 99. 2%，RSD分别为 0. 7%和 0. 5%。结论:方法操作简便，精密度高，结果准确，可同时测定猴
耳环胶囊中没食子酸与槲皮素的含量，可用于猴耳环胶囊的质量控制。
［关键词］ 高效液相色谱;猴耳环消炎胶囊;没食子酸;槲皮素
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)09-0126-03
［doi］ 10． 11653 /syfj2013090126
Determination of Gallic Acid and Quercetin
in Pithecellobium Clypearia Antiphlogistic Capsule by HPLC
CHEN Yan-wei1，ZHANG Huan2，YANG Shi-lei1，WANG Chun-fu1，LIANG Hui1*
(1. Department of Pharmacy，First Affiliated Hospital of Dalian Medical University，Dalian 116011，China;
2. College of Pharmacy，Dalian Medical University，Dalian 116044，China)
［Abstract］ Objective:To establish a HPLC method for determination of gallic acid and quercetin in
Houerhuan Xiaoyan Jiaonang． Method:The analytical column was Hypersil BDS-C18 (4. 6 mm × 150 mm，
5 μm) ，and the mobile phase was methanol-phosphate solution with the gradient elution． The flow rate was 1. 0
mL·min －1 and the detection wavelength was 254 nm． The column temperature was kept at 30 ℃，and the sample
volumn was 10 μL． Result:A good linearity was obtained in the range of 15. 0-180. 0 mg·L －1 (r = 0. 999 6)and
1. 25-15. 0 mg·L －1 (r = 0. 999 7)for gallic acid and quercetin respectively，and the average recovery was 98. 2%
(RSD 0. 7%)and 99. 2% (RSD 0. 5%)respectively． Conclusion:The method is convenient，accurate，precise
and can be used in the content determination of gallic acid and quercetin in Pithecellobium clypearia antiphlogistic
capsule at the same time，and can be used for the quality control of this capsule．
［Key words］ HPLC;Pithecellobium clypearia antiphlogistic capsule;gallic acid;quercetin
猴耳环，豆科、猴耳环属，属多年生乔木围廷树，
性味苦涩寒，功效清热解毒、收湿敛疮，是治疗多种
热毒症候独特的南方药材［1-2］。猴耳环消炎胶囊具
有清热解毒、消炎止肿、止泻之功效，适用于上呼吸
道感染、急性咽喉炎、急性扁桃体炎、急性肠炎、亦可
用于细菌性痢疾［3］。猴耳环主要含黄酮类、儿茶
酚、鞣质等化合物［4-5］，其中，槲皮素对肠胃道有止
泻、消炎镇痛的作用，没食子酸有极好的抗炎、抗病
毒作用［6-7］，与猴耳环消炎胶囊的药理作用相同，是
其主要有效成分［8］。目前尚没有对猴耳环消炎胶
囊中没食子酸与槲皮素二者同时进行测定研究的文
献。为了有效地控制产品质量，笔者参考相关报
道［3，9-13］，建立了同时测定猴耳环消炎胶囊中没食子
酸与槲皮素含量的高效液相色谱法。
·621·
第 19 卷第 9 期
2013 年 5 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 9
May，2013
1 仪器与试药
日本岛津 LC-2010C HT 型高效液相色谱仪，伊
利特 Hypersil BDS-C18色谱柱(4. 6 mm × 150 mm，5
μm) ，UV Detector 检测器，LC Solution 工作站;赛多
利斯仪器(北京)有限公司 1 /万分析天平，DelTA320
pH计，SK-1 快速型混匀器，超声器，津腾溶液过
滤器。
没食子酸对照品，中国药品生物制品检定所，批
号 110831-200803;槲皮素对照品，中国药品生物制
品检定所，批号 100081-200907;猴耳环消炎胶囊，广
州市花城制药厂，批号 Z44020132;蒸馏水，自制蒸
馏水，经 0. 22 μm 微孔滤膜滤过;磷酸，石家庄市黄
磷厂，批号 38056;盐酸，分析纯，批号 20061017;甲
醇，美国 Tidea公司，批号 1010910。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 伊利特 Hypersil BDS-C18色谱 柱
(4. 6 mm × 150 mm，5 μm) ，流动相甲醇-磷酸溶液
梯度洗脱，见表 1，流速 1 mL·min －1，检测波长 254
nm，柱温 30 ℃，进样体积 10 μL。
表 1 HPLC梯度洗脱条件
t /min 甲醇 /% 磷酸 /%
0 ～ 1 10 90
1 ～ 2. 5 10 ～ 50 90 ～ 50
2. 5 ～ 8. 5 50 50
8. 5 ～ 9. 5 50 ～ 10 10 ～ 90
9. 5 ～ 18 10 90
2. 2 溶液的配制
2. 2. 1 对照品溶液的配制 精密称取没食子酸对
照品和槲皮素对照品适量，用甲醇-0. 2%磷酸溶液
(4∶ 1)溶解并稀释成没食子酸和槲皮素质量浓度分
别为 60，5 mg·L －1的对照品溶液。
2. 2. 2 供试品溶液的制备 精密称取剥去外壳的
胶囊粉末 100 mg 置于 50 mL 量瓶中，加甲醇-36%
盐酸(4∶ 1)40 mL，超声 40 min，放置室温，以甲醇定
容，充分摇匀，用微孔滤膜(0. 45 μm)滤过，取续滤
液，即得供试品溶液。
2. 3 干扰试验 按 2. 1 项下的色谱条件，分别取
空白溶液、对照品溶液及供试品溶液适量进样，记
录色谱图，见图 1。各峰之间分离度良好，结构表
明空白基质对没食子酸与槲皮素测定无干扰。
2. 4 线性关系考察 精密称取没食子酸对照品 10
mg与槲皮素对照品 10 mg，分别置于 10 mL 量瓶
中，得没食子酸和槲皮素质量浓度均为 1 g·L －1的储
备液;精密量取没食子酸和槲皮素储备液，以甲醇-
A．空白;B．混合对照品;C．供试品;I. 没食子酸;II. 槲皮素
图 1 猴耳环消炎胶囊 HPLC
水(4 ∶ 1)稀释成没食子酸和槲皮素浓度分别为
15. 0 /1. 25，30 /2. 5，60 /5，120 /10，180 /15 的对照品
溶液。按 2. 1 项下色谱条件进行测定，进行回归分
析。结果表明没食子酸和槲皮素分别在 15 ～ 180，
1. 25 ～ 15 mg·L －1关系良好，回归方程分别为 Y = 20
974X －11 218(r =0. 999 7)，Y = 44 877. 7X + 2 006. 0
(r = 0. 999 7)。
2. 5 精密度试验 取 2. 2. 1 项下方法配制对照品
溶液，按 2. 1 项下色谱条件重复进样 6 次，结果没食
子酸及槲皮素 RSD 分别为 0. 15%，0. 95%，表明仪
器精密度良好。
2. 6 重复性试验 取去壳的猴耳环胶囊粉末，精密
称取 5 份，按 2. 2. 2 项下方法制备供试品溶液，并按
2. 1 项下色谱条件进行平行测定，结果没食子酸平
均含量 33. 8 mg·g －1(RSD 0. 24%) ，槲皮素平均含
量 1. 45 mg·g －1(RSD 1. 73%) ，表明此方法重复性
良好。
2. 7 回收率试验 取已知含量的猴耳环叶供试品，
分别加入 3 mL质量浓度为 1 g·L －1的没食子酸储备
液和 150 μL质量浓度为 1 g·L －1的槲皮素储备液，按
供试液制备方法，制成加样供试品溶液，平行 6 份分
·721·
陈艳伟，等:HPLC同时测定猴耳环消炎胶囊中没食子酸与槲皮素的含量
别进样10 μL，记录色谱图，计算没食子酸和槲皮素的
回收率见表 2。
表 2 回收率试验
成分
加入量
/mg
样品中量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
RSD
/%
没食子酸 30 33. 9 63. 42 98 98 0. 61
30 33. 9 63. 07 97
30 33. 9 63. 44 98
30 33. 9 63. 46 98
30 33. 9 63. 11 99
30 33. 9 63. 41 97
槲皮素 1. 5 1. 43 2. 94 101 99 1. 8
1. 5 1. 43 2. 92 99
1. 5 1. 43 2. 91 98
1. 5 1. 43 2. 90 98
1. 5 1. 43 2. 96 102
1. 5 1. 43 2. 91 98
2. 8 稳定性试验 取同一供试品溶液，在 2. 1 项下
色谱条件下，分别于 0，1，2，6，8 h 进样，记录色谱
图，结果没食子酸和槲皮素峰面积 RSD 分别为
0. 3%，1. 5%，表明供试品溶液在 8 h 内稳定。
2. 9 含量测定 按 2. 2. 2 方法配置 6 份供试品溶
液进行含量测定，样品中没食子酸平均含量 33. 87
mg·L －1，RSD 0. 22%;槲皮素平均含量 1. 43 mg·
g －1，RSD 1. 46%。
3 讨论
猴耳环主要含有黄酮类、儿茶酚胺类、鞣质等化
合物，如没食子酸和槲皮素等。有关文献［6］在做
过正交试验比较后，发现采用不同比例的甲醇-水，
甲醇-盐酸溶液提取，发现甲醇-水提取的样品只能
检测到没食子酸，而甲醇盐酸混合溶液提取的样品
能同时检测出两种成分，由于猴耳环中槲皮素多以
槲皮苷形式存在，故选择甲醇-36%盐酸(4∶ 1)进行
水解提取。
文献报道，没食子酸在 213，273 nm处有最大吸
收，槲皮素在 254，372 nm 处存在最大吸收，由于样
品中没食子酸浓度高，故选择了 254 nm检测波长。
由于没食子酸与槲皮素极性差别较大，采用甲
醇-水流动相进行梯度洗脱，流动相中加入磷酸，发
现没食子酸保留有所加强，减少脱尾使没食子酸和
槲皮素峰形对称。梯度变化的过程中，由于流动相
比例的变化，会造成基线的漂移。对流动相在使用
之前进行过滤和脱气，可减少漂移现象。
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［责任编辑 顾雪竹］
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第 19 卷第 9 期
2013 年 5 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 9
May，2013