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花曲柳组织培养初步试验



全 文 :花曲柳组织培养初步试验
刘 坤 吴宇昕
(黑龙江省第一森林调查规划设计院) (黑龙江省第三森林调查规划设计院)
摘 要 本试验以花曲柳 (Fraxinus chinensis Roxb. var. rhynohophylla (Hance)Hemsl)半木质
化茎段做为外植体,探讨 MS和 WPM基础培养基、不同激素水平及谷氨酸对花曲柳组织培养的
接种效果影响,在此基础上进一步试验,确定了最佳培养基组合为 WPM + G 6mg / L + BA 3mg /
L + NAA 0. 3mg / L,消毒方法为次氯酸钠浸泡 5min。
关键词 花曲柳 组织培养
Test on Fraxinus chinensis Tissue Culture
Liu Kun
(First aurhor's address:The First Forest Inventory and Planning Academy of Heilong province,
Mudanjiang,157009,Heilongjiang,China)
Abstract In this paper,bud and one year stem of Fraxinus chinensis are used as explants to do tissue culture. The result
shows us that the best culture base is WPM + G6mg /L + BA3mg /L + NAA0. 3mg /L.
Keywords Fraxinus Chinensis Roxb;Tissue Culture
花曲柳 (Fraxinus chinensis Roxb. var. rhyno-
hophylla (Hance)Hemsl)系木犀科白腊属一重要树
种,又名大叶白蜡树、大叶梣,是白蜡树属的落叶
大乔木,高 12 - 15m,树皮灰褐色,光滑。花期 4
- 5 月,果期 9 - 10 月。产于东北和黄河流域各
省。生山坡、河岸、路旁,海拔 1500m 以下,俄
罗斯、朝鲜也有分布。花曲柳对气候、土壤要求不
严,木材质地坚韧,纹理美丽而略粗,各地常引种
栽培,作行道树和庭园树;树皮供药用,是我国东
北东部山地的重要经济硬阔树种。近年来,花曲柳
已越来越受到人们的重视。构造与材质近似水曲
柳,材色较浅,心边材无区别,为黄白色,但木纹
更加美丽,故得花曲柳之称。用花曲柳刨制的切片
多用于高级家具的贴面。花曲柳木材及各种制品在
国际及国内市场上供不应求,且价格昂贵,是水曲
柳的 3 ~ 4 倍,其经济效益十分可观。
在东北地区,一直以来受到木材供应紧张和经
济利益的驱使,人们把对硬阔叶树种研究的重点主
要放在水曲柳、胡桃楸和黄菠萝所谓的三大珍贵硬
阔叶树种上,对其他硬阔叶树种的研究利用很少。
花曲柳因自身的生物学特点和生态学特性决定,分
布范围小,更新速度慢,生长缓慢,资源已逐年迅
速减少,面临灭种危险,且关于花曲柳的研究少,
花曲柳组织培养目前尚属空白。为了保护、利用花
曲柳这一重要硬阔叶树种,丰富造林树种选择,维
护森林生态系统生物多样性,本研究在对花曲柳组
织培养进行试验。
1 试验材料
本试验采用花曲柳一年生半木质化茎段作为外
植体,半木质化茎段于生长季采集,半木质化枝条
收集后剪为 1cm 左右茎段,茎段中部为复叶柄着
生点。
2 试验方法
外植体消毒分为 0. 1%升汞和次氯酸钠两种方
法。培养基分为 MS、SH、WPF 三种基本培养基。
在基本培养基上加入不同种激素,蔗糖浓度为
3%,琼脂浓度为 0. 6%,pH 值调到 5. 8 ~ 6. 0,
并经 120℃、0. 15MPa 灭菌 20min。配置各种培养
基如下表 (单位 mg / L) :
表 1 培养基配方表
培养基编号 培养基配方 培养基编号 培养基配方
1 MS + BA0. 2 + NAA0. 02 2 MS + BA1 + NAA 0. 1
3 WPM + BA0. 2 + NAA0. 02 4 WPM + BA1 + NAA 0. 1
5 WPM + G5 + BA1 + NAA 0. 1 6 WPM + G5 + NAA 1
7 WPM + BA2 + NAA 0. 2 8 WPM + G5 + BA2 + NAA 0. 2
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2012 年第 1 期 (总 161 期) 林业勘查设计
G代表谷氨酸。培养条件为光照 12h /d、光强
1200 ~ 1500Lx,温度 18 ~ 28℃。
3 试验结果与分析
3. 1 培养基和消毒法初步试验
试验以茎段为外植体对不同培养基对花曲柳组
织培养生长诱导的效果进行了试验,试验统计结果
如下表 2:
表 2 培养基初步接种实验
培养基编号
接种数 污染数 死亡数 成活率%
消毒 1 消毒 2 消毒 1 消毒 2 消毒 1 消毒 2 消毒 1 消毒 2
1 10 10 0 1 6 1 40 50
2 10 10 1 1 6 0 40 50
3 10 10 0 2 5 4 50 60
4 10 10 0 1 7 3 30 70
5 10 10 1 0 8 3 20 70
6 10 10 0 2 6 5 40 50
7 10 10 0 2 5 2 50 80
8 10 10 0 1 6 1 40 90
注:消毒 1 为 0. 1%升汞浸泡 3 分钟;消毒 2 为次氯酸钠浸泡 3 分钟。
由表 2 可知,从消毒效果来看,用次氯酸钠浸
泡 3min消毒效果比 0. 1%升汞浸泡 3min 要好,前
者污染率为 0. 63%而后者达到 6. 25%,几乎是前
者的 10 倍。相同培养基从成活率来看,用次氯酸
钠浸泡 3min 消毒法比 01. %升汞浸泡 3min 要低
10%到 70%。结合污染率来看,虽然消毒 1 消毒
效果较好,但是造成成活率低,分析原因为 0. 1%
升汞浓度过高,或者浸泡 3min 时间过长。对于次
氯酸钠来说,可以延长浸泡时间以提高消毒效果。
从成活率来分析,以 MS作为基本培养基效果
不如 WPM 好。而以 WPM 作为基本培养基的组合
中,WPM + G 5 + BA 2 + NAA 0. 2 的培养效果
最好,在次氯酸钠浸泡 3min 消毒条件下,成活率
达到 90%。其次为WPM + BA 2 + NAA 0. 2,成
活率达到 80%。从这两组培养基组成来看,谷氨
酸可以提高接种成活率。和 3、4、5 组合相比,
NAA0. 2 和 BA2 激素浓度比 NAA0. 1 和 BA1 要好,
可以逐步提高浓度以求最佳激素组合。
3. 2 最佳培养基试验
为了试验最佳培养基组合,在 3. 1 的实验基础
上,以茎段和腋芽为材料进行了试验,培养条件不
变,消毒方法为次氯酸钠浸泡 3、5、7min,试验
结果如下:
1、WPM + G 5 + BA 2 + NAA 0. 3
2、WPM + G5 + BA 2 + NAA 0. 4
3、WPM + G 6 + BA 3 + NAA 0. 3
4、WPM + G6 + BA 3 + NAA 0. 4
5、WPM + G7 + BA 4 + NAA 0. 3
6、WPM + G 7 + BA 4 + NAA 0. 4
表 3 优化培养基接种茎段成活率试验
培养基编号
接种数 死亡数 成活率%
3 5 7 3 5 7 3 5 7
1 10 10 10 2 1 3 80 90 70
2 10 10 10 3 2 3 70 70 70
3 10 10 10 1 0 2 90 100 80
4 10 10 10 2 1 3 80 90 70
5 10 10 10 4 3 5 60 70 50
6 10 10 10 5 6 6 50 40 40
由表 3 可以看出,花曲柳茎段最优培养基为
WPM + G 6 + BA 3 + NAA 0. 3,无论采用哪种
浓度的次氯酸钠消毒,接种成活率都在 80%以上。
对于次氯酸钠不消毒效果来说,浸泡 5min 消毒效
果最好,而且在不同培养基条件下表现一致。因
此,花曲柳茎段组织培养的最佳组合为培养基
WPM + G 6 + BA 3 + NAA 0. 3 和次氯酸钠浸泡
5min。
参考文献
[1] 毕君,王春荣,曹福亮. 白蜡树组织培养快繁体系的建立
[J] . 林业科技开发,2010 (4) :79 - 82.
[2] 孙立元,任先威 . 河北树木志 [M] . 北京:中国林业出版
社,1997.
[3] 孔冬梅,谭燕双,沈海龙 . 白蜡树属植物的组织培养和植株再
生 [J] . 植物生理学通讯,2003,39 (6) :677 - 680.
[4] 苏初旺,莫德赟,梁炳钊 . 温室桉树苗补光的试验研究 [J].
森林工程,2010,(9) ,25 - 27.
[5] 满文慧 . 天然长白松生物量的研究 [J] . 森林工程,2008,
(5) :10 - 12.
收稿日期:2011 - 11 - 16
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林业勘查设计 (总 161 期)2012 年第 1 期