全 文 ：收稿日期:2007-12-18;　修订日期:2008-02-16
基金项目:广西自然科学基金项目(No.0542021);
广西大型仪器协作共用专项资金资助项目(No.292-2005-85)
作者简介:林　霄(1981-),男(壮族),广西南宁人 ,现任广西中医药研究
院研究实习员 ,学士学位 ,主要从事天然产物化学分析工作.
高效液相色谱法测定岗松中槲皮素的含量
林　霄 ,刘布鸣 ,陈明生
(广西中医药研究院 ,广西 南宁 530022)
摘要:目的 对岗松进行分析研究 , 测定岗松中槲皮素含量 ,为岗松的质量标准制定提供方法和依据。方法 采用高效液
相色谱法(HPLC)测定岗松中槲皮素含量。色谱柱为 LichrospherC18(4.6 mm×250 mm, 5 μm), 流动相为甲醇 -水 -磷
酸 -三乙胺(50:50:0.45:0.2),检测波长 370 nm, 柱温室温 ,流速 1 ml/min。结果 槲皮素在 0.08 ～ 0.48μg范围内呈良
好线性关系(r=0.999 4), 平均回收率为 100.64%, RSD为 1.65%(n=9)。结论 该法简便可行 , 重复性好 ,可作为岗松
中槲皮素的含量测定方法。
关键词:岗松;　槲皮素;　高效液相色谱
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)01-0102-01
TheDeterminationofQuercetininBaeckeafrutescensL.byHPLC
LINXiao,LIUBu-ming, CHENMing-sheng
(GuangxiInstituteofTraditionalMedicalandPharmaceuticalSciences, Nanning530022, China)
Abstract:ObjectiveTodevelopamethodfordeterminingthecontentofquercetininthenaturalherbofBaeckeafrutescensL..
MethodsAnHPLCmethodwassetuptodeterminethecontentofquercetininBaeckeafrutescensL., usinglichrospherC
18
(4.6
mm×250 mm, 5μm)column, andmethanol-water-phosphoricacid-triethylamine(50:50:0.45:0.2)asthemobilephase,
theUVdetectionwavelengthwas370nm, withaflowrateof1.0ml/minatroomtemperature.ResultsAgoodlinearwasobtained
intherangeof0.08 ～ 0.48μgandtheaveragerecoverywas100.64%, RSDwas1.65%(n=9).ConclusionThemethodis
simple, andwithgoodreproducibilityforthedeterminationofquercetininBaeckeafrutescensL.
Keywords:BaeckeafrutescensL.;　Quercetin;　HPLC
　　岗松为桃金娘科岗松属植物岗松 BaeckeafrutescensL., 主
要分布于广西 、广东 、江西 、福建等地 , 具有化淤止痛 、清热解
毒 、利尿通淋 、杀虫止痒之功效 , 用于跌打淤肿 、肝硬化 、热泻 、
热淋 、小便不利 、阴痒 、脚气 、皮肤瘙痒 、疥癣 、水火烫伤 、虫蛇咬
伤 。目前对岗松生药的研究除了其挥发油成分外 [ 1] , 还从岗松
中提取分离得到了黄酮类化合物槲皮素。关于岗松中黄酮类
化合物的含量测定未见文献报道。本研究采用高效液相色谱
法 ,对其中的黄酮类化合物槲皮素进行含量测定 , 以期为药材
的进一步开发利用提供基础化学数据 , 为岗松药材的质量标准
研究奠定基础 。
1 　仪器与试药
美国 Waters公司液相色谱仪 , 515泵 , UV2487可变波长检测
器;威玛龙色谱工作站。
槲皮素对照品(供含量测定用 , 批号 0081-9904)由中国药
品生物制品检定所提供 , 经面积归一化法测定 , 纯度大于 98%;
岗松植物采自广西南宁 ,经广西中医药研究院中药研究室赖茂祥
副研究员鉴定为桃金娘科岗松属植物岗松 B.frutescensL.。甲
醇为色谱纯 , 水为超纯水 ,磷酸 、三乙胺及其它试剂均为分析纯。
2 　方法与结果
2.1　 色谱条件 色谱柱为 LichrospherC18(4.6 mm×250 mm, 5μm);流动相为甲醇 -水 -磷酸 -三乙胺(50∶50∶0.45∶0.2);
检测波长 370 nm;柱温室温;进样量 20 μl;理论塔板数按槲皮素
计算大于 3 500。
2.2　提取条件的选择 对回流时间进行了比较 ,结果加热回流 1
h的提取率显著高于 0.5 h, 而与回流 2 h的提取率相当(见图
1),表明回流 1 h基本可以将样品中的槲皮素提取完全 , 为缩短
分析时间 ,选择回流时间为 1 h。
图 1　不同提取时间提取率的比较
2.3　对照品溶液及供试品溶液的制备
2.3.1　对照品溶液的制备 精密称取槲皮素对照品适量 , 加甲
醇制成 12.5μg/ml的对照品溶液 ,色谱图见图 2。
图 2　槲皮素对照品色谱图
2.3.2　 供试品溶液的制备 取岗松药材粉末 0.3 g, 精密称定 ,
置烧瓶中 ,精密加入 50%甲醇 -盐酸(95:5)混合溶液 25 ml, 密
塞 , 称定重量 ,加热回流 1 h, 放冷 , 用 50%甲醇补足减失的重量 ,
摇匀 , 用微孔滤膜(0.45 mm)滤过 , 取续滤液 , 即得 。色谱图见
图 3。
2.4 　线性关系的考察 精密称取槲皮素对照品约 10 mg, 置 10
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 1期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.1　
ml量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀 , 得 1 mg/ml标准品
溶液 , 精密吸取 2.5ml标准品溶液至 50 ml量瓶中 , 用流动相稀
释并定容至刻度 , 得 50 μg/ml的溶液 , 摇匀 , 备用。分别精密吸
取 50μg/ml的对照品溶液 0.8ml, 1.6ml, 2.4ml, 3.2 ml, 4.0ml,
4.8 ml至 10 ml量瓶 ,加流动相稀释至刻度 ,摇匀 ,按上述色谱条
件 , 进行测定。以对照品进样量为横坐标 , 峰面积积分值为纵坐
标进行线性回归 , 得回归方程为 Y=8.249 1×106 X-2.960 5 ×
104 , r=0.999 4。结果表明 , 对照品在 0.08 ～ 0.48 μg范围呈良
好线性关系。
图 3　供试品色谱图
2.5　精密度实验 取同一供试品溶液 , 连续重复进样 6次 , 结果
槲皮素峰面积平均值为 1 944 301, RSD=1.69%。
2.6　稳定性实验 取同一供试品 ,每隔 2 h进样 , 进行了 12 h考
察 , 结果槲皮素含量的 RSD=1.83%。
2.7 　重复性实验 精密称取同一批次岗松药材样品各 6份 , 按
上述供试品溶液制备方法和色谱条件测定峰面积并计算 ,结果槲
皮素的平均含量为 1.063 9 mg/g, RSD=2.30%。
2.8 　加样回收率试验 称取已测知含量的药材样品(槲皮素平
均含量为 1.0639 mg/g)0.15 g, 共 9份 , 精密称定。按高 、中 、低
3个浓度分别精密加入 1.0 mg/ml的槲皮素对照品溶液 0.10,
0.16, 0.22 ml,按上述供试品溶液制备方法和色谱条件测定峰面
积并计算 , 结果槲皮素的加样平均回收率为 100.64%, RSD=
1.65%。
2.9　样品含量测定 收集不同产地的岗松药材 , 按上述供试品
溶液制备方法和色谱条件依法测定槲皮素含量。结果见表 1。
表 1　岗松样品中槲皮素含量测定结果 mg· g-1
产地 含量
广西灵山 1.35
南宁沙井 1.06
广西玉林 0.89
　　n=3
3　结论
本实验建立了分析岗松药材中槲皮素含量的 HPLC法 ,以前
对岗松药材的研究多局限于其中的挥发油成分 , 通过本次研究 ,
完善了岗松药材的质量标准 ,为药材的进一步开发利用提供了更
多的化学数据。
参考文献:
[ 1 ] 　刘布鸣 ,赖茂祥 ,梁凯妮 ,等.岗松油的质量分析研究 [ J] .中国中药
杂志 , 2004, 29(6):539.
收稿日期:2007-10-24;　修订日期:2008-01-20
作者简介:阮　耀(1965-),女(汉族),福建福州人 ,现任南阳医学高等专
科学校基础医学部副教授 ,学士学位 ,主要从事中药药理研究工作.
黄芪预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用
阮　耀 , 黄川锋 , 岳兴如
(南阳医学高等专科学校 ,河南 南阳　473000)
摘要:目的 探讨黄芪(AS)对大鼠脑缺血再灌注损伤的预适应样保护作用。 方法 采用间断静脉推注 AS模拟预适应的
实验方法 , 观察大鼠双侧颈总动脉栓塞再灌血清中一氧化氮合酶(NOS)活性 、及一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量以及
脑组织 Na+-K+-ATP酶 、Ca2+-ATP酶活性的变化。结果 AS(10, 8 g/kg)预处理可明显降低血清中 MDA含量 ,同时
增加血清 NOS、NO含量及脑组织 Na+-K+-ATP酶 、Ca2+-ATP酶活性和 NO含量。结论 黄芪预处理对大鼠脑缺血再
灌注损伤具有缺血预适应样的保护作用。
关键词:黄芪;　预处理;　脑缺血;　再灌注损伤;　保护
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)01-0103-02
ProtectiveEffectofPharmacologicalPreconditioningofAstragalusagainstCerebralIs-
chemiaReperfusionInjuryinRats
RUANYao, HUANGChuan-feng, YUEXing-ru
(NanyangMedicalColege, Nanyang, Henan473000 , China)
Abstract:ObjectiveTostudytheprotectiveeffectofpharmacologicalpreconditioningofastragalus(AS)againstcerebralis-
chemicreperfusioninjuryinrats.MethodsCerebralischemiareperfusionmodelwasestablishedbyclampingbothcommoncarot-
idarteries.Theactivitiesofnitricoxidesynthetase(NOS), Na+ -k+ATPase, Ca2+ATPaseandthecontentsofnitricoxide
(NO), malonaldehyde(MDA)weremeasuredafterpharmacologicalpreconditioningofAS.ResultsThepharmacologicalpre-
conditioningofAS(10 g/kg、8g/kg)significantlyreducedthecontentsofMDAandsignificantlyincreasedtheactivitiesofNOS,
Na+-k+ATPase, Ca2+ATPaseandthecontentsofNO.ConclusionThepharmacologicalpreconditioningofAShasaprotective
actionagainstcerebralischemicreperfusioninjury.
Keywords:Astragalus;　Preconditioning;　Brainischemic;　Reperfusioninjury;　Protection
　　近代药理学研究发现黄芪中含有黄酮 、多糖 、皂苷 、生物碱 、氨基 酸及微量元素等多种活性成分 [1 , 2] ,因其清除自由基 、拮抗钙超载 、保
护内皮 、改善心功能等多种作用而被应用于心血管疾病并取得显著
疗效。已有文献报道黄芪对心 、脑缺血及再灌注损伤有一定保护作
用。也有人发现黄芪预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤有保护作
用 [ 3, 4] ,但未见黄芪预处理对脑缺血再灌注损伤影响的研究报道。本
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.1 时珍国医国药 2009年第 20卷第 1期