全 文 ：收稿日期:2015-12-02
基金项目:云南省中青年学术技术带头人后备人才项目(2015HB058);国家自然科学基金(81260677);云南省教育厅科学研究基金
(2014Z135)
作者简介:方海兰(1991-)，女，在读硕士研究生，专业方向:中药资源与品质评价;E-mail:1546784909@ qq. com。
* 通讯作者:段宝忠，Tel:0872-2257411，E-mail:bzduan@ 126. com。
云南民间常用青叶胆类药材中环烯醚萜苷类成分的含量测定
方海兰1，尚飞能1，杨贤英1，夏从龙1，段宝忠1，2*
(1. 大理大学药学院，云南 大理 671000;2. 中国中医科学院中药研究所，北京 100700)
摘要 目的:比较云南民间常用青叶胆类药材中环烯醚萜苷类成分的含量，为青叶胆基原植物药用合理性及
资源利用提供依据。方法:采用 HPLC法测定青叶胆类药材中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷的含量。结果:9 种
共 30 批青叶胆类药材成分差异显著。结论:几种药材化学成分因种类和产地不同而差异较大，不宜作为替代药物
使用，将獐牙菜苦苷和獐牙菜苷作为质量控制指标，是鉴别和控制青叶胆类药材质量的有效手段。
关键词 青叶胆类药材;环烯醚萜苷;獐牙菜属
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2016)06-1337-04
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2016. 06. 033
HPLC Analyzed the Iridoid Glycosides of Qingyedan Commonly Used in Folk Medicine in Yunnan
FANG Hai-lan1，SHANG Fei-neng1，YANG Xian-ying1，XIA Cong-long1，DUAN Bao-zhong1，2
(1. College of Pharmaceutical Science，Dali University，Dali 671000，China;2. Institute of Chinese Materia Medica China Academy of
Chinese Medical Sciences，Beijing 100700，China)
Abstract Objective:To compare the contents of iridoid glycosides in Qingyedan medicinal materials，and to provide the scientific
basis for using resources of Qingyedan and rationality of original plant medicinal. Methods:The contens of three iridoid glycosides，inclu-
ding swertiamarin，gentiopicroside and sweroside in Qingyedan medicinal materials were determined by HPLC. Ｒesults:The constituents
of 30 samples in nine species were significant difference. And the contents of iridoid glycosides in Swertia bimaculata，Swertia tenuis and
Swertia pubescens were reported for the first time. Conclusion:The results show that the contents of iridoid glycosides in Qingyedan me-
dicinal materials have a significant difference due to the different species and producing areas. Therefore，these medicinal plants should
not be used as alternative medicines for clinical application. Swertiamarin and sweroside can be selected as quality control components，
this method is an effective method to identify and control the quality of Qingyedan materials.
Key words Folk medicine;Qingyedan;Iridoid glycosides;Swertia;HPLC
青叶胆为彝族、白族、藏族、纳西族等多个民族
常用品种，为《卫生部药品标准》、《云南省药品标
准》1974 年版、《云南省中药材标准》2005 年版(彝
药卷)、《新修晶珠本草》等收载，为龙胆科紫红獐牙
菜 Swertia punicea Hemsl. 的干燥全草，临床用于黄
疸尿赤、热淋涩痛等症〔1〕。而在民间实际应用中，
因同物异名及植物分类知识缺乏等原因，各地使用
的青叶胆基原植物种类极为复杂。据文献记载和笔
者实际调查，在云南彝族、白族等民间应用中青叶胆
是治疗肝胆疾病的一类药材的总称，常将龙胆科植
物中叶色青、味苦如胆的中草药称为青叶胆，包括龙
胆科獐牙菜属的多种植物〔2，3〕。鉴于此，笔者收集
了云南民间作为青叶胆使用的 9 种基原植物共 30
批药材，采用 HPLC 法对其中的 3 种环烯醚萜苷类
成分含量进行了测定，以期为青叶胆类民族药使用
的合理性、有效性评价以及基原物种资源的开发利
用提供依据。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 美国 Agilent 1200 高效液相色谱系仪
(四元梯度泵、自动进样器、柱温箱、VWD 检测器、
Chemstation工作站);GH-252 电子分析天平(日本
AND)。
1. 2 材料 獐牙菜苦苷(批号:MUST-11012401)、
獐牙菜苷(批号:MUST-11020802)、龙胆苦苷(批号:
MUST-12081505)对照品购自成都曼思特生物科技
有限公司。甲醇(Fisher Scientific，批号:085884，色
谱级);乙腈(Merck，批号:1566730046，色谱级);水
为超纯水(重蒸水，自制);其他试剂均为分析纯。9
种基原共 30 批青叶胆类药材样品经笔者段宝忠副
教授鉴定，样品信息与鉴定结果见表 1，标本存放于
大理大学中药标本馆。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱:Agilent Zorbax-SB C18柱
(250 mm ×4. 6 mm，5 μm);流动相:甲醇(A)-水(B)，
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表 1 30 批青叶胆类药材样品信息与鉴定结果
样品编号 基原植物 采集地点 收集时间
S1 大籽獐牙菜 Swertia macrosperma(C. B. Clarke)C. B. Clarke 云南大理银桥镇 2014 年 10 月
S2 大籽獐牙菜 云南大理下关镇 2014 年 5 月
S3 大籽獐牙菜 云南大理三月街药材市场 2014 年 5 月
S4 大籽獐牙菜 云南漾濞县平坡镇 2013 年 11 月
S5 大籽獐牙菜 云南漾濞县苍山西镇 2013 年 11 月
S6 大籽獐牙菜 云南漾濞县苍山西镇 2014 年 11 月
S7 大籽獐牙菜 云南漾濞县苍山西镇 2013 年 10 月
S8 大籽獐牙菜 云南漾濞县苍山西镇 2013 年 11 月
S9 大籽獐牙菜 云南漾濞县苍山西镇 2013 年 10 月
S10 紫红獐牙菜 Swertia punicea Hemsl. 云南大理大理镇 2013 年 10 月
S11 紫红獐牙菜 云南云龙县关坪乡 2013 年 11 月
S12 紫红獐牙菜 云南洱源县三营药材市场 2013 年 12 月
S13 紫红獐牙菜 云南洱源县三营药材市场 2014 年 11 月
S14 紫红獐牙菜 云南洱源县三营药材市场 2014 年 12 月
S15 紫红獐牙菜 云南洱源县三营药材市场 2012 年 11 月
S16 紫红獐牙菜 云南云龙县旧州镇 2014 年 11 月
S17 紫红獐牙菜 云南玉龙县石鼓镇 2013 年 10 月
S18 西南獐牙菜 Swertia cincta Burk. 云南大理喜州镇 2013 年 11 月
S19 西南獐牙菜 云南漾濞县漾江镇 2013 年 10 月
S20 西南獐牙菜 云南大理大理镇 2014 年 10 月
S21 西南獐牙菜 云南永平县龙门乡 2013 年 10 月
S22 西南獐牙菜 云南漾濞县苍山西镇 2013 年 10 月
S23 显脉獐牙菜 Swertia nervosa(G. Don)Wall. ex C. B. Clarke 云南大理大理镇 2013 年 11 月
S24 显脉獐牙菜 云南永平县龙门乡 2013 年 11 月
S25 毛獐牙菜 Swertia pubescens Franch. 云南大理喜州镇 2013 年 9 月
S26 观赏獐牙菜 Swertia decora Franch. 云南大理三月街药材市场 2014 年 5 月
S27 观赏獐牙菜 云南洱源县邓川镇 2014 年 6 月
S28 獐牙菜 Swertia bimaculata(Sieb． et Zucc．)Hook． f． et
Thoms． ex C． B． Clarke
云南云龙县团结乡 2014 年 5 月
S29 细瘦獐牙菜 Swertia tenuis T. N. Ho et S. W. Liu 云南漾濞县苍山西镇 2013 年 10 月
S30 狭叶獐牙菜 Swertia angustifolia Buch. -Ham. ex D. Don 云南大理三月街药材市场 2014 年 5月
梯度洗脱(0 ～ 10 min，20% ～ 30% A;10 ～ 17 min，
30% ～ 35% A;17 ～ 25 min，35% A;25 ～ 35 min，
35% ～50% A;35 ～ 45 min，50% ～ 60% A;45 ～ 55
min，60% ～70% A;55 ～ 60 min，70% ～ 80% A);流
速:1. 0 mL /min;柱温:25 ℃;检测波长:238 nm;进
样量:10 μL。HPLC图谱见图 1。
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取对照品獐牙苦
菜苷 2. 22 mg、龙胆苦苷 6. 01 mg、獐牙菜苷 1. 16
mg，用甲醇溶解并定容至 1 mL，得混合对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备 取供试品粉末 0. 5 g，精
密称定，置于 50 mL 锥形瓶中，加 50%甲醇 20 mL，
混匀，60 ℃超声(400 W，100 kHz)提取 60 min，补足
减失重量，过滤，取上清液用 0. 45 μm 微孔滤膜过
滤，作为供试品溶液。
2. 4 线性关系考察 取“2. 2”项下混合对照品溶
液，采用逐级稀释法分别制备獐牙菜苦苷、龙胆苦
苷、獐牙菜苷的系列浓度的混合对照品溶液，按
“2. 1”项下色谱条件平行测定 3 次，以峰面积(Y)对
浓度(X)进行线性回归，得到獐牙菜苦苷、龙胆苦
苷、獐牙菜苷的线性方程分别为:Y1 = 17. 097X1 －
94. 772(r1 = 0. 9999)，Y2 = 9. 0298X2 + 70. 619(r2 =
0. 9999)，Y3 = 10. 551X3 + 43. 689(r3 = 0. 9999)，结
果表明獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷分别在
9. 78 ～ 2 220 μg /mL、26. 46 ～ 6 010 μg /mL、5. 11 ～
1 160 μg /mL浓度范围内与峰面积的线性关系良
好。
2. 5 精密度试验 取同一供试品溶液，重复进样 6
次，计算 3 个成分含量的 ＲSD 均小于 1. 62%，表明
仪器精密度良好。
2. 6 稳定性试验 取同一供试品，按“2. 3”项下方
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图 1 混合对照品(A)及紫红獐牙菜供试品(B)HPLC图谱
1. 獐牙菜苦苷 2. 龙胆苦苷 3. 獐牙菜苷
法制备供试品溶液，于 0、4、8、12、18、24、48 h 分别
进样测定，结果 3 个成分含量的 ＲSD 均小于
1. 56%，表明供试品溶液在 48 h内稳定性良好。
2. 7 重复性试验 取同一样品，按“2. 3”项下方法
制备 6 份供试品溶液，测定 3 个成分含量的 ＲSD 均
小于 2. 21%，表明方法重复性较好。
2. 8 加样回收率试验 取已知含量的同一份紫红
獐牙菜细粉，精密称定 6 份，分别加入一定量的对照
品，按“2. 3”项下方法制备供试品溶液，进样测定，
计算獐牙菜苦苷、龙胆苦胆和獐牙菜苷的平均加样
回收率分别为 104. 34%、100. 14%、98. 15%，ＲSD
分别为 1. 80%、2. 37%、1. 85%。
2. 9 样品分析 将 9 个基原共 30 批青叶胆类药材
样品按“2. 3”项下方法制备样品溶液，平行操作 3
次，按外标法计算獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷
3 个环烯醚萜苷类成分的含量，结果见表 2。
3 结果与讨论
本实验考察了甲醇、氯仿和 H2O 3 种提取溶剂，
发现甲醇的提取效率最高，在此基础上，考察了超声
和回流提取两种方法，二者提取效率相当，但是超声
提取简便易操作，浸提过程中无化学反应，对物质的
量没有影响，因此选择超声提取法。此外还考察了
提取时间、提取溶剂、提取温度和提取液用量，最终
确定提取方法为 60 ℃，50%甲醇 20 mL 超声提取
60 min。实验同时还比较了 Agilent Zorbax SB-C18
(150 mm × 4. 6 mm，5 μm)、Agilent Zorbax-SB-Aq
C18(250 mm × 4. 6 mm，5 μm)、Eclipse XDB-C18
(150 mm ×4. 6
表 2 9 种基原 30 批青叶胆类药材中 3 种环烯
醚萜苷类成分含量测定结果(%，n =3)
样品编号
A獐牙菜
苦苷
B龙胆
苦苷
C獐牙
菜苷
总含量
S1 0. 02 － 0. 51 0. 53
S2 0. 02 － － 0. 02
S3 0. 09 0. 61 0. 86 1. 56
S4 0. 26 － － 0. 26
S5 0. 15 － － 0. 15
S6 0. 15 － － 0. 15
S7 0. 18 － － 0. 18
S8 0. 44 － － 0. 44
S9 0. 20 0. 77 1. 40 2. 37
S10 3. 13 1. 15 2. 02 6. 30
S11 3. 00 3. 72 1. 70 8. 42
S12 2. 65 1. 30 7. 83 11. 78
S13 3. 17 1. 26 3. 25 7. 68
S14 3. 27 1. 35 3. 41 8. 03
S15 3. 80 1. 27 8. 01 13. 08
S16 4. 08 1. 40 1. 54 7. 02
S17 4. 21 － － 4. 21
S18 0. 02 － － 0. 02
S19 0. 30 1. 56 0. 11 1. 97
S20 0. 28 3. 38 0. 28 3. 94
S21 0. 82 0. 95 0. 40 2. 17
S22 0. 44 1. 81 － 2. 25
S23 0. 20 0. 06 0. 58 0. 84
S24 0. 19 0. 02 0. 25 0. 46
S25 0. 63 4. 93 0. 70 6. 26
S26 11. 88 0. 16 0. 26 12. 30
S27 13. 35 0. 31 － 13. 66
S28 0. 09 0. 77 0. 07 0. 93
S29 8. 20 0. 64 0. 26 9. 10
S30 8. 76 0. 64 0. 43 9. 83
mm，5 μm)3 种色谱柱，结果表明，Zorbax SB-C18
(250 mm ×4. 6 mm，5 μm)柱对 3 种环烯醚萜苷类
成分分离良好，同时比较了甲醇和乙腈洗脱，发现甲
醇分离较乙腈分离效果好，因此最终选择了 Zorbax
SB-C18(250 mm × 4. 6 mm，5 μm)柱和甲醇作为流
动相洗脱。
由表 2 中可看出，9 种基原青叶胆药材中均含
有獐牙菜苦苷成分，獐牙菜苷和龙胆苦苷亦分布于
多数植物中。这些成分具有保肝利胆的生物活
性〔4〕，反映出民族医药文献及临床将这些植物来源
的药材作为功效相近的青叶胆类药材使用具有一定
的物质基础依据和合理性。在 30 批药材中，3 种成
分总量大于 4. 00%的有 13 批，基原植物主要为紫
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红獐牙菜、毛獐牙菜、观赏獐牙菜、细瘦獐牙菜和狭
叶獐牙菜。其中，紫红獐牙菜所含环烯醚萜苷成分
异常丰富，所测定 8 批样品中，其总含量在 4. 21%
～13. 80%之间，紫红獐牙菜在彝族、白族中长期用
于治疗肝胆疾病，疗效显著〔5，6〕，表明紫红獐牙菜是
民间医学长期临床实践的经验积累和总结，具有科
学性。另外 4 个基原植物毛獐牙菜、观赏獐牙菜、狭
叶獐牙菜和细瘦獐牙菜其总含量虽较高，但从色谱
图来看，与紫红獐牙菜比较，其色谱峰较少，成分差
异较大，临床用药不宜盲目作为紫红獐牙菜的替代
品使用。3 种成分总量小于 4. 00%的有 17 批，基原
植物为大籽獐牙菜、西南獐牙菜、显脉獐牙菜和獐牙
菜。其中大籽獐牙菜 3 种成分总含量均较低，测定
的 9 批大籽獐牙菜中，含量为 0. 02% ～ 2. 37%。但
从色谱图可看出此物种成分异常丰富，可与其他物
种明显区分，这是否意味着具有其他活性成分，值得
进一步研究。西南獐牙菜、显脉獐牙菜和獐牙菜与
紫红獐牙菜相比，成分差异也较大，不宜盲目混用。
以上研究结果提示，对青叶胆类药材进行品种、
基原的整理，区分使用，有利于青叶胆类药材的临床
用药规范、药材及其成药制剂的质量控制。紫红獐
牙菜作为民间长期使用的青叶胆类主流品种之
一〔7〕，也是各地民间公认的青叶胆上品，其 3 种成分
含量均较高，成分特征亦与其他药材具有明显的区
别，提示无论从利于控制青叶胆类药材各品种基原，
保证用药的准确性，还是从不同基原的成分组成来
看，《云南省中药材标准》收载紫红獐牙菜较为合
理。但上述标准中鉴别和含量测定下将芒果苷作为
指标成分，芒果苷属双苯吡酮类黄酮类化合物，结合
本研究结果考虑，将獐牙菜苦苷和獐牙菜苷等环烯
醚萜苷类成分作为质量控制指标，是鉴别和控制各
品种质量的有效手段。
本研究建立了 HPLC法同时测定青叶胆类药材
中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷的含量，并对云
南民间常用的 9 种基原青叶胆类药材的 3 种环烯醚
萜苷类成分的含量进行了测定，根据 HPLC 含量测
定结果和色谱指纹图谱特征，对 9 种基原青叶胆类
药材品种作为青叶胆药材使用的合理性进行了评
价，取得了较好的结果，为青叶胆类药材的品种整
理、质量控制和资源利用提供了科学依据，同时对于
类似药用资源的利用价值评价也具有一定的参考意
义。
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