全 文 ：4 讨论
本研究选取了脾脏作为制取淋巴细胞的器官，
脾脏中含 T细胞及 B细胞，此外还含有一定量的巨
噬细胞，它们共同在机体防御和清除异物中发挥重
要的作用。ConA和 LPS 诱导小鼠脾淋巴细胞增殖
反应分别是检测机体 T 和 B 淋巴细胞功能的体外
实验，是反映特异性免疫能力的重要指标。研究表
明免疫调和 1 号方 0. 3、0. 6、1. 2 g /kg 可显著促进
ConA活化的脾淋巴细胞增殖。NK细胞在机体防御
及肿瘤监视中起重要作用，本研究发现，免疫调和 1
号方 0. 6、1. 2 g /kg 均能提高小鼠 NK 细胞活性，提
示免疫调和 1 号方可能具有一定的抗肿瘤作用，且
与激活 NK细胞有密切关系。从小鼠血清溶血素水
平、迟发型变态反应(DTH)及脾细胞抗体生成几个
方面也可以看出，免疫调和 1 号方对小鼠免疫功能
的改善具有一定作用，且免疫调和 1 号方的含量越
大，改善能力越强，当免疫调和 1 号方的量达到 1. 2
g /kg时，改善免疫功能的效果与破壁灵芝孢子粉组
相当，甚至略优于破壁灵芝孢子粉组。
机体免疫功能下降会导致机体防御、识别及排
除外来病原微生物和自身产生的抗原性异物的能力
下降，从而难以维持机体内环境生理平衡，导致疾病
产生。本研究结果表明，免疫调和 1 号方显著增加
免疫低下小鼠胸腺指数，显著刺激巨噬细胞分泌
TNF-α，使其吞噬能力增强。IFN-γ 是单核巨噬细胞
的强激活剂，是体内细胞因子网络的重要组成部
分〔1〕，在免疫调节方面起重要作用，其活性水平可
以反映出整个机体免疫功能的状态。本研究发现试
验组的血清 IFN-γ 与模型组比较显著增强，提示免
疫调和 1 号方能显著改善免疫低下症状。
综上所述，免疫调和 1 号方能有效提高小鼠的
脾淋巴细胞增殖能力，对血清溶血素水平、NK 细胞
活性、迟发型变态反应(DTH)及脾细胞抗体生成有
显著增强，而且对巨噬细胞吞噬能力也得到了很好
的提高，表明其能有效增强细胞免疫和体液免疫水
平，与同等剂量的破壁灵芝孢子粉效果相当，通过本
研究证明已得到合理的、显效的调节免疫组合方，可
望进一步开发使在抗肿瘤、抗病毒及免疫调节等方
面发挥重要作用。
参 考 文 献
［1］唐庆九，张劲松，潘迎捷，等 . 灵芝孢子粉碱提多糖对小
鼠巨噬细胞的免疫调节作用［J］. 细胞与分子免疫学杂
志，2004，20(2):142-144.
银叶树树叶提取物抗氧化活性研究
张艳军，彭重威，郑韵英，钟秋平，欧闰庄，全小红
(钦州学院，广西 钦州 535000)
摘要 目的:研究银叶树树叶提取物抗氧化活性。方法:将红树林植物银叶树树叶 75%乙醇提取物用溶剂萃取
法分成 4个不同的组分;采用对 DPPH·、对羟自由基(OH·)、超氧自由基(O－2·)的清除作用测定 4 个组分的抗氧化
能力;并对这 4个组分中总黄酮、总酚的含量进行了测定。结果:乙酸乙酯萃取相表现出较强的抗氧化活性和还原能
力;对应萃取相中总黄酮和总酚的含量也较其他相高，乙酸乙酯萃取相中总酚含量为 24. 90%，黄酮含量为 7. 14%。
结论:银叶树树叶提取物具有良好的的抗氧化活性，其中乙酸乙酯萃取相和正丁醇萃取相的抗氧化活性较其他相强。
关键词:银叶树树叶;抗氧化性;总黄酮;总酚
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2013)10-1674-05
收稿日期:2012-01-08
基金项目:广西教育厅项目资助(200911LX437)
作者简介:张艳军(1980-)，女，硕士，讲师，主要从事天然产物活性物质的提取、分离研究;Tel:18377779712，E-mail:zhangyanjun0773@
163. com。
银叶树(Heritiera littoralis Dryand)，也称大白叶
仔，为梧桐科银叶树属真红树植物。银叶树自然分
布在非洲东部海岸、亚洲东南部和澳洲东北部，在东
太平洋的夏威夷和汤加群岛也有引种的种群〔1〕。
我国银叶树在广东、海南、广西、香港和台湾等省
(地区)有少量零星分布〔2-4〕。研究表明〔5，6〕:银叶树
具有抗菌、抗炎等药效。目前，对银叶树树叶提取物
的抗氧化活性研究未见文献报道。
本实验以 75%乙醇提取银叶树树叶中的活性
物质，以 L-抗坏血酸试剂作为阳性对照，通过测定
不同溶剂分级萃取银叶树树叶 75%乙醇提取物还
原能力、对 DPPH·、对羟自由基(OH·)、超氧自由
·4761· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 10 期 2013 年 10 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2013.10.040
基(O－·2 )的清除作用，评价银叶树树叶醇提物及各
萃取物的抗氧化活性，并测定各萃取中总黄酮和总
酚的含量;旨在为广西银叶树资源的开发提供参考。
1 材料与仪器
1. 1 实验药物 银叶树树叶于 2011 年 10 月采自
广西防城，由笔者钟秋平副教授鉴定为梧桐科银叶
树属银叶树(Heritiera littoralis Dryand)的树叶。将
叶子洗净、晾干、粉碎备用。
1. 2 试剂 DPPH·(二苯代苦味酰肼，分析纯，
sigama公司)，没食子酸(色谱纯，Aladdin 公司)，三
羟甲基氨基甲烷、邻苯三酚、芦丁、三氯乙酸、乙醇、
石油醚(60 ～ 90 ℃)、乙酸乙酯、正丁醇、L-抗坏血酸
(VC)、无水乙醇、95%乙醇、硫酸亚铁、30%过氧化
氢、水杨酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、铁氰化钾、氯
化铁、浓盐酸、亚硝酸钠、氢氧化钠、硝酸铝、福林-酚
试液、碳酸钠等，均为国产分析纯。
1. 3 主要仪器 ＲE-2000A 旋转蒸发仪(上海亚荣
生化仪器厂);SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵(郑州长城
科工贸有限公司);BL610型电子天平(上海上天精密
仪器有限公司);T6-新世纪紫外可见分光光度计(北
京普析通用仪器设备有限责任公司);H-1650Ｒ 型高
速台式冷冻离心机(湘仪离心机仪器有限公司);HH-
4数显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司);BPZ-
6090LC真空干燥箱(上海一恒科技有限公司)。
2 方法
2. 1 样品的制备 取 100. 0 g 银叶树树叶粉末，用
75%乙醇提取，抽提 3 次，合并提取液;真空浓缩除
去乙醇，得浸膏 21. 8 g，用去离子水溶解，依次用石
油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取;萃取液真空浓缩，干
燥，得石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取相和水相。
2. 2 各萃取组分对 DPPH·自由基清除能力的测
定 将各萃取物以 75%的乙醇为溶剂配制成浓度
为 50、100、150、200 mg /L的溶液。取不同浓度的试
样 2 mL，分别加入 2 mL 1. 0 × 10 －4mol /L DPPH·溶
液，摇匀后室温放置，30 min后，于 517 nm测定光密
度 D(λ)值。每份样品平行测定 3 次，取平均值。L-
抗坏血酸做阳性对照。样品对 DPPH·的清除率 K
可用下式计算:
清除率(K)=
D(λ)0 －［D(λ)i － D(λ)j］
D(λ)0
× 100%
式中:D(λ)i 为 2 mL DPPH·溶液和 2 mL 待测溶液的
光密度;D(λ)j 为 2 mL 待测溶液和 2 mL 溶剂的光密度;D
(λ)0 为 2 mL DPPH·溶液和 2 mL溶剂的光密度。
2. 3 羟基自由基清除率的测定 参照 Fenton 反应
方法建立反应体系，在 10 mL 比色管中依次入 6
mmol /L的 FeSO4 溶液 2 mL，分别加入不同浓度的样
品液 2 mL，6 mmol /L 的 H2O2 溶液 2 mL 摇匀，静置
10 min，再加入 6 mmol /L 的水杨酸-乙醇溶液 2 mL，
摇匀，在 37 ℃下静置 20 min 后，510 nm 处测其光密
度值 D(λ)i。以等体积的水代替水杨酸，测定其光密
度值 D(λ)j，以扣除样品本身颜色的干扰。以等体积
的水代替样品，测定其光密度值 D(λ)0。每份样品平
行测定 3次，取平均值。L-抗坏血酸做阳性对照。样
品对羟基自由基的清除率 K可用下式计算:
清除率(K)=
D(λ)0 －［D(λ)i － D(λ)j］
D(λ)0
× 100%
2. 4 超氧阴离子抑制作用的测定 通过邻苯三酚
反应体系〔7〕，预先在各比色管中加入 5. 7 mL 50
mmol /L pH为 8. 20 的 Tris-HCl 缓冲液，再加入 0. 2
mL不同浓度的样品试液，于 25 ℃保温 10 min，然后
加入 25 ℃预热的 6 mmol /L邻苯三酚 0. 1 mL，迅速
摇匀，在 25 ℃水浴反应 5 min后，加 1 mL 10 mmol /
L的 HCl溶液终止反应，于 320 nm处测定光密度 D
(λ)i。以等体积的 10 mmol /L 的 HCl 溶液代替邻
苯三酚，测定其光密度值 D(λ)j，以扣除样品本身颜
色的干扰。以等体积的水代替样品，测定其光密度
值 D(λ)0。每份样品平行测定 3 次，取平均值。L-
抗坏血酸做阳性对照。样品对超氧阴离子自由基的
清除率 K可用下式计算:
清除率(K)=
D(λ)0 －［D(λ)i － D(λ)j］
D(λ)0
× 100%
2. 5 还原能力的测定 还原能力的测定参考 Oyai-
zu的方法〔8〕并稍作修改。取 5 支 10 mL 比色管，将
各萃取物配制成 50、100、150、200 mg /L的溶液。取
1 mL 上述溶液，加入 2. 5 mL 磷酸盐缓冲液(0. 2
mol /L，pH = 6. 6)和 2. 5 mL 1% K3Fe(CN)6 溶液，
并用蒸馏水定容至刻度。混匀后再 50 ℃水浴中保
温 20 min，急速冷却，加入 2. 5 mL 10%的三氯乙酸
溶液，以 5 000 r /min 的转速离心 10 min，取上清液
2. 5 mL，加入 2. 5 mL双蒸水和 1 mL 0. 1%的 FeCl3，
充分混匀，静置 10 min 后于 700 nm处测定光密度。
光密度越大，还原能力越强。
2. 6 各萃取组分总黄酮、总多酚含量的测定
2. 6. 1 总黄酮含量的测定:精确称取干燥至恒重
的芦丁标准品 4. 5 mg 置于 100 mL 容量瓶中，加入
乙醇溶解并定容配成浓度为 45. 0 mg /L的芦丁标准
溶液。分别吸取上述芦丁标准液 0. 0、1. 0、2. 0、
4. 0、6. 0、8. 0、16. 0 mL 于 25 mL 容量瓶中。加入
0. 7 mL 5% NaNO2 溶液，摇匀，放置 5 min 后加入
0. 7 mL 10% Al(NO3)3，摇匀，静置 6 min 后加入 5
·5761·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 10 期 2013 年 10 月
mL 1 mol /L的 NaOH，摇匀，并用 30%乙醇溶液定容
至刻度后，摇匀，静置 10 min 后于波长 510 nm处比
色测定光密度，试剂空白为参比液。用 Excel 软件
处理得回归方程:y = 0. 0126x + 0. 0010，Ｒ2 =
0. 9999，浓度在 0 ～ 28. 8 mg /L范围内与光密度呈良
好线性关系。见图 1。将各萃取物配制成 100 mg /L
溶液，按上述方法测定其总黄酮含量。
图 1 芦丁标准曲线
2. 6. 2 总酚含量的测定:准确称取没食子酸标准
品 50. 0 mg，用水溶解并定容至 100 mL。以此溶液
配成浓度为 10. 00、20. 00、40. 00、60. 00、80. 00 mg /L
的溶液。分别取上述不同浓度溶液 1 mL 加到 10
mL比色管中，然后依次加入 1 mL 去离子水，0. 5
mL福林-酚试液，1. 5 mL 20% Na2CO3 溶液，最后用
水定容至 10 mL，在 50 ℃水浴下保持 10 min，冷却，
在 760 nm下测定其光密度。由所取标准液的浓度
和光密度数据经数据分析，回归方程为:y = 0. 0995x
－0. 004，Ｒ2 = 0. 999。浓度在 0 ～ 8. 00 mg /L范围内
与光密度呈良好线性关系。见图 2。将各萃取物配
制成 100 mg /L溶液，按上述方法测定其总酚含量。
图 2 没食子酸的标准曲线
3 结果
3. 1 各萃取组分对 DPPH·自由基的清除作用
DPPH·在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其结构
中含有 3 个苯环，1 个氮原子上有 1 个孤对电子呈
紫色，在 517 nm 有强吸收。有自由基清除剂存在
时，DPPH·的单电子被配对而使其颜色变浅，在最
大吸收波长处的光密度变小，而且这种颜色变浅的
程度与配对电子数是成化学剂量关系的，因此可用
于检测自由基的清除情况，从而评价实验样品的抗
氧化能力强弱〔9〕。各萃取物清除 DPPH·自由基能
力的比较如图 3 所示，各萃取物对 DPPH·均有一
定的清除作用，且随浓度的增加清除能力增强。乙
酸乙酯萃取相对 DPPH·具有最高的清除率，达
88. 18%。清除 DPPH·的能力大小为:乙酸乙酯萃
取相→正丁醇萃取相→水相→石油醚萃取相。除对
DPPH·清除率最低的石油醚萃取相外各部位随浓
度的变化清除能力增强。
图 3 银叶树树叶醇提物各萃取相及 VC
对 DPPH·自由基的清除能力
3. 2 各萃取组分对羟基自由基的清除作用 根据
Fenton方法产生 OH·的模型，H2O2 与根据 Fenton
方法产生 OH·的模型，H2O2 与亚铁离子反应生成
OH·，该反应为:H2O2 + Fe
2 + →OH － + OH· +
Fe3 +，自由基一般存活时间比较短而且具有较高活
性的特点，而水杨酸能有效地捕捉羟基自由基且产
生有色产物〔10〕，因此，若在该体系加入一定量的水
杨酸，生成的有色产物在 510 nm 处被较强地吸收。
不同萃取物对羟基自由基的清除率不同，此法则即
可用来测定实验样品对羟基自由基的清除效率。各
萃取物清除羟基自由基能力的比较如图 4 所示，各
萃取物对 OH·均有一定的清除作用，且随浓度的
增加清除能力增强。清除 OH·能力的大小为:乙
酸乙酯萃取相 ＞正丁醇萃取相 ＞水相 ＞石油醚萃取
相。
图 4 银叶树树叶醇提物不同萃取相及 VC
对羟基自由基的清除能力
·6761· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 10 期 2013 年 10 月
3. 3 各萃取组分对超氧阴离子自由基的清除作用
邻苯三酚在弱碱性介质中自氧化分解产生 O－·2 ，
利用 O－·2 清除剂能使邻苯三酚自氧化产物在 325 nm
处的吸收峰受到抑制这一特点进行测定，此法则即
可用来测定实验样品对 O－·2 清除效率〔11〕。各萃取组
分对超氧阴离子自由基的清除能力比较如图 5 所
示，各萃取相对 O－·2 均有一定的清除作用，且随浓度
的增加清除能力增强。清除 O－·2 能力的大小为:乙
酸乙酯萃取相→正丁醇萃取相→水相→石油醚萃取
相。
图 5 银叶树树叶醇提物不同萃取相及 VC
对超氧阴离子自由基的清除能力
3. 4 各萃取组分还原力的测定 还原力法的原理
为:K3Fe(CN)6 +样品→K4Fe(CN)6 +样品氧化物
K4Fe(CN)6 + Fe
3 + →Fe4［Fe(CN)6］3在波长 700
nm条件下测定光密度，光密度越大，则样品的还原
力越大。结果如图 6 所示，各萃取物的还原能力随
样品的浓度的增加而增强。正丁醇萃取相和乙酸乙
酯萃取相均表现出较强的还原能力。乙酸乙酯萃取
相还原能力最强，石油醚萃取相的还原能力最差。
图 6 银叶树树叶醇提物不同浓度萃取相及 VC 还原能力
3. 5 75%乙醇提取物与各萃取组分总黄酮、总多
酚含量的测定
3. 5. 1 75%乙醇提取物与各萃取组分总黄酮的测
定:结果如图 7 所示，银叶树树叶 75%乙醇提取物
经过不同极性溶剂逐步萃取后，其总黄酮含量主要
富集于正丁醇萃取相和乙酸乙酯萃取相中，乙酸乙
酯萃取相中黄酮含量最高达 7. 14%，其次为正丁醇
萃取相黄酮含量为 6. 27%。石油醚萃取相中黄酮
类物质含量最低。
图 7 银叶树树叶75%乙醇提取物与各萃取物总黄酮的含量
3. 5. 2 75%乙醇提取物与各萃取组分总酚的测
定:结果如图 8 所示，银叶树树叶 75%乙醇提取物
经过不同极性的溶剂依次萃取后，酚类化合物主要
富集在正丁醇萃取相和乙酸乙酯萃取相中。乙酸乙
酯萃取相中总酚的含量最高，达到了 24. 90%。最
低为石油醚萃取相。
图 8 银叶树树叶75%乙醇提取物与各萃取组分总酚的含量
4 讨论
本研究中不同溶剂分级萃取相的抗氧化性评价
结果表明:银叶树树叶各萃取相除石油醚相外均表
现出一定的抗氧化活性;其中乙酸乙酯萃取相和正
丁醇萃取相的抗氧化活性较强。乙酸乙酯萃取相中
总黄酮和总酚的含量也明显高于其他相，其总酚含
量为 24. 90%，黄酮含量为 7. 14%。该项研究表明
银叶树树叶萃取物具有一定抗氧化活性，并且主要集
中在乙酸乙酯和正丁醇萃取相。该研究为广西区内
丰富的银叶树资源进一步的开发和应用奠定了基础。
参 考 文 献
［1］简曙光，唐恬，张志红，等 . 中国银叶树种群及其受威胁
原因［J］. 中山大学学报(自然科学版)，2004，43(增
刊) :91-96.
［2］简曙光，韦强，唐恬 . 深圳盐灶银叶树种群的生物学特
性研究［J］. 华南农业大学学报，2005，26(4):84-87.
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［4］刘镜法 . 广西的银叶树林［J］. 海洋开发与管理，2002，
(6):66-68.
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［6］ Lin P. Medicinal plants of mangrove in China［J］. Chi-
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［7］李雪，张建，徐瑞红，等 . 侧柏叶乙醇提取物抗氧化性的
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生地低聚糖对慢性阻塞性肺疾病大鼠
外周气道病理变化的影响
刘 力，张 炜，徐德生* ，李魏娜
(上海中医药大学附属曙光医院，上海 200021)
摘要 目的:研究生地低聚糖及主要组成成分水苏糖、棉籽糖对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道病理变化
的影响。方法:采用熏香烟加气管内滴入大肠杆菌脂多糖建立大鼠慢性阻塞性肺疾病模型。将 SD 大鼠随机分正
常对照组、COPD模型组、药物预防组(生地低聚糖组、水苏糖组、棉籽糖组)和药物治疗组(生地低聚糖组、棉籽糖
组)。药物预防组熏香烟 35 d，在熏香烟的同时，腹腔注射给药，烟熏结束后继续给药 10 d。药物治疗组熏香烟 45
d，从烟熏的第 36 天起每天给药，治疗 21 d。计算各组动物肺系数，检测细支气管内径、外径的变化，观察支气管和
肺组织病理学变化。结果:与模型组比较，无论是预防给药还是治疗给药，药物组大鼠细支气管特征性病理改变普
遍较轻，其中呼吸性支气管管腔狭窄和闭塞明显减轻，细支气管的内径、内外径比值均明显下降。结论:生地低聚
糖能显著改善气道病理改变，减轻气流受阻，有效延缓 COPD的进行性发展，同时对已发生的 COPD 有一定的逆转
作用。
关键词 生地低聚糖;水苏糖;棉籽糖;脂多糖;慢性阻塞性肺疾病;外周气道病理变化
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2013)10-1678-04
收稿日期:2013-02-01
基金项目:上海市科技计划基金(05dz19102)
作者简介:刘力(1961-)，女，主任药师，主要从事中药研究;Tel:021-53827660，E-mail:liuli2750@ hotmail. com。
* 通讯作者:徐德生，Tel:021-53825761，E-mail:xudes1953@ 126. com。
慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstrctive Pulmona-
ry Disease，COPD)，是指以气流阻塞为特征的慢性
支气管炎和(或)肺气肿，其气流受限不完全可逆，
呈进行性发展〔1〕。小气道病理改变是 COPD发生的
基础，细支气管炎症导致的气道管腔缩小、闭塞是气
流受限的重要原因。生地低聚糖是从中药生地黄中
分离得到的低聚糖部位，由水苏糖、棉籽糖与甘露三
糖等组成，其中水苏糖、棉籽糖为其主要成分。前期
研究显示生地低聚糖对脂多糖诱导大鼠肺部炎症有
抑制作用;生地低聚糖对大鼠肺间质成纤维细胞
ColⅠ、ColⅢ表达有一定的抑制作用〔2〕。本试验模
拟人类吸烟及反复呼吸道感染可导致 COPD 的过
程，采用气管滴注脂多糖加熏香烟建立大鼠 COPD
模型〔3〕，采用腹腔给药的方法观察生地低聚糖以及
主要组成成分水苏糖、棉籽糖对 COPD 大鼠气道病
理变化的影响，研究生地低聚糖对 COPD 大鼠气流
受限的改善作用，为生地黄临床上预防及其治疗
COPD提供科学依据。
1 材料与仪器
1. 1 实验动物 清洁级 8 周龄雄性 SD 大鼠(200
± 20)g，购于中科院上海动物实验中心，许可证号:
SCXK(沪)200320003。
1. 2 药物与试剂 生地低聚糖本院自制;水苏糖、
棉籽糖对照品(美国 Sigma 公司);戊巴比妥钠(国
药集团化学试剂有限公司);脂多糖(美国 Sigma 公
司);过滤嘴香烟(北京大前门)。
·8761· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 10 期 2013 年 10 月