全 文 ：七叶一枝花的外种皮和种子、华重楼的叶片中薯蓣皂苷含量较
高，七叶一枝花的果皮、外种皮和种子、华重楼的叶片中含有较高
的薯蓣皂苷元，这些结果表明，重楼作为多年生的植物，其丢弃的
地上部分具有潜在的药源开发价值。
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收稿日期:2015-07-28; 修订日期:2015-12-20
基金项目:广东省中山市科技计划项目(No． 2014A2FC245);
广东省中山市科技计划项目(No． 20132A162)
作者简介:苏 丹(1977-)，男(汉族)，广西贵港人，电子科技大学中山学
院化学与生物工程学院讲师，博士学位，主要从事中药开发与研究工作．
* 通讯作者简介:高玉桥(1977-)，女(汉族)，广东中山人，广州中医药大
学附属中山医院主任中药师，硕士学位，主要从事中药药理研究工作．
山芝麻药材中 6 个三萜类成分及总三萜的含量测定
苏 丹1，高玉桥2* ，梅全喜2
(1．电子科技大学中山学院化学与生物工程学院，广东 中山 528402;
2．广州中医药大学附属中山医院，广东 中山 528401)
摘要:目的 为更好地评价山芝麻药材的质量，建立 ＲP － HPLC 同时测定山芝麻药材的 6 个主要三萜类成分(山芝麻宁
酸甲酯、山芝麻酸甲酯、山芝麻宁酸、山芝麻酸、白桦酯酸、齐墩果酸)含量的方法，建立紫外可见分光光度法测定山芝麻
药材中总三萜含量的方法。方法 ①采用 Waters Symmetry C18(4． 6 mm × 250 mm，5 μm)色谱柱，以乙腈 － (0． 2%)磷酸
水溶液为流动相，采用二元梯度洗脱;流速:1． 2ml /min;检测波长:230nm;柱温:35℃;②以齐墩果酸为对照，采用香草醛
－高氯酸显色法在 552nm测定山芝麻药材中总三萜的含量。结果 ＲP － HPLC方法中山芝麻药材的 6 个三萜类成分的回
归方程具有良好的线性关系(相关系数为:r = 0． 9991 ～ 0． 9996)，紫外可见分光光度法测定山芝麻药材中总三萜含量的回
归方程同样具有良好的线性关系(相关系数为:r = 0． 9998);不同产地的山芝麻药材各三萜类成分及总三萜的含量有一
定的差异。结论 所建立的含量测定方法稳定性、精密度、重复性良好，适用于山芝麻药材及含山芝麻制剂的质量控制。
关键词:山芝麻; 三萜; 含量测定
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2016． 05． 006
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2016)05-1038-03
山芝麻为梧桐科植物山芝麻 Helicteres angustifolia L．的根，是
华南地区常用草药，因其果实形似芝麻的果实而得名。本品自清
代即为广东凉茶(原王老吉凉茶)的主要药料，也是部分中药制
剂的原料。其味苦、性寒，归肺、大肠经，可解表清热，解毒消肿，
用于感冒发热、痄腮、乳娥、麻疹、咳嗽、泄泻痢疾、痈肿［1，2］。现
有的药理学与植物化学的研究表明，其主要的有效部位为三萜类
成分，其中如山芝麻酸(helicteric acid)及其甲酯(methyl helicter-
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ate)、山芝麻宁酸(helicterilic acid)及其甲酯(methyl helicterilate)
(见图 1)等具有明显的生物作用和药理活性［3 ～ 5］。目前，对于山
芝麻药材的质量控制主要以鉴别反应为主，缺少对其有效部位、
有效成分或指标成分的含量测定研究。因此，本工作通过建立检
测山芝麻中 6 种三萜类成分的 HPLC 方法和其总三萜含量的分
光光度法，可以为合理评价山芝麻药材的质量，保证临床用药的
有效性、安全性提供科学依据。
1 材料和仪器
1． 1 仪器 LC － 20 型高效液相色谱仪(日本岛津)，UV －2450 型
紫外可见分光光度计(日本岛津)，XSE205 型十万分之一分析天
平(瑞士 METTLEＲ TOLEDO)。
1． 2 试剂 齐墩果酸(批号:110709 － 200505)购自中国药品与生
物制品检定所;白桦脂酸(产品号:855057)购自 sigma － aldrich公
司，经 HPLC面积归一化法测定纯度为 91． 4%;山芝麻酸、山芝麻
酸甲酯、山芝麻宁酸、山芝麻宁酸甲酯(为本研究小组自广东中
山产山芝麻药材中分离制备，经 HPLC面积归一化法测定纯度均
大于 95． 0%);HPLC 流动相中乙腈、甲醇为色谱纯，购自美国
TEDIA公司，水为 Millipore制备的超纯水;甲醇、氯仿、磷酸、乙酸
乙酯、冰醋酸、香草醛、高氯酸均为分析纯。
1． helicteric acid［3 － acetoxy － 27 －
benzoyloxylup － 20(29)－ en － 28 － oic acid］
2． methyl helicterate 3． helicterilic acid
4． methyl helicterilate
图 1 山芝麻中的主要特征性三萜类成分
1． 3 药材 6 个产地的山芝麻药材分别产自广东中山(样品
S1)、广东湛江(S2)、广东汕头(S3)、广西玉林(S4)、福建厦门
(S5)、云南昆明(S6)，经中山市中医院曾聪彦主任中药师鉴定为
梧桐科植物山芝麻 H． angustifolia的干燥根。
2 方法与结果
2． 1 HPLC法测定山芝麻药材中 6 个三萜类成分的含量
2． 1． 1 色谱条件 色谱柱:Waters Symmetry － C18柱(250mm × 4． 6
mm，5μm);流动相 A:磷酸(0． 2%)水溶液，流动相 B:乙腈;梯度
洗脱方式:0 ～ 60min，80%(B)，60 ～ 75min，80% ～ 100%(B) ;流
速:1． 2ml /min;检测波长:230nm;柱温:35℃。
2． 1． 2 混合对照品溶液的制备 精密称取山芝麻酸 3． 0mg、山芝
麻酸甲酯 4． 0mg、山芝麻宁酸 5． 0mg、山芝麻宁酸甲酯 4． 0mg，白
桦脂酸与齐墩果酸各 4． 4mg，加乙腈溶解并定容至 10mL 容量瓶
中，作为对照品储备液。在 2． 1 项色谱条件下，各对照品均得到
较好的分离。见图 2。
2． 1． 3 样品溶液的制备 精密称定山芝麻药材(粉碎后，80℃真
空干燥，过 40 目筛)约 2． 5g，置具塞锥形瓶中，精密加入 25ml 甲
醇，超声提取 30min，提取两次，回收甲醇，用少许超纯水混悬干
物质，精密加入 25ml 乙酸乙酯，称定重量，超声 5min，用乙酸乙
酯补重，静置分液，用 0． 22μm滤膜滤取上清液，精确量取续滤液
10mL，水浴挥干，用乙腈定容至 50mL 容量瓶中，作为供试品溶
液。
2． 1． 4 线性关系的考察 精密吸取混合对照品溶液适量，用乙腈
逐级稀释配制成 6 个不同的浓度，以峰面积为纵坐标，对照品溶
液的浓度为横坐标，得到 6 个组分的回归方程和相关系数，见表
1。由表 1 可知，6 个三萜成分在相应的浓度范围内线性关系良
好。
1 为山芝麻宁酸甲酯;2 为山芝麻酸甲酯;3 为山芝麻宁酸;
4 为山芝麻酸;5 为白桦脂酸;6 为齐墩果酸
图 2 山芝麻 6 个三萜类成分混合对照品的 HPLC色谱图
表 1 山芝麻药材中 6 个三萜类成分的回归方程、线性范围和相关系数
组分 回归方程
线性范围
/μg·ml －1
相关系数
(r)
山芝麻宁酸甲酯 Y = 31321． 4X + 32． 1 5． 0 ～ 200． 0 0． 9994
山芝麻酸甲酯 Y = 28765． 6X + 24． 6 5． 0 ～ 200． 0 0． 9994
山芝麻宁酸 Y = 24596． 1X － 41． 5 4． 8 ～ 192． 0 0． 9996
山芝麻酸 Y = 23876． 9X + 12． 8 4． 9 ～ 196． 0 0． 9995
白桦脂酸 Y = 7563． 2X － 9． 6 1． 1 ～ 110． 0 0． 9991
齐墩果酸 Y = 8732． 4X + 10． 3 1． 0 ～ 150． 0 0． 9993
2． 1． 5 精密度试验取混合对照品溶液，连续进样 6 次，6 个三
萜类成分的 ＲSD 分别是 0． 55%、0． 44%、0． 73%、0． 42%、
0． 27%、0． 61%，表明仪器的精密度良好。
2． 1． 6 重复性试验 取广东中山产山芝麻药材(S1)，平行制备 6
份样品溶液，6 个三萜类成分的 ＲSD 分别为 2． 22%，2． 75%，
2． 30%，2． 83%，2． 39%，2． 58%。
2． 1． 7 稳定性试验 取广东中山产山芝麻药材(S1)，平行制备 6
份样品溶液，分别在 0、2、4、8、12、24h 进行测定、6 个三萜类成分
的 ＲDS分别为 1． 34%，1． 89%，2． 76%，2． 67%，2． 35%，2． 39%，
表明在 24h内样品显色稳定。
2． 1． 8 加样回收率试验 取广东中山产山芝麻药材(S1)6 份，分
别加入与供试品等量的的山芝麻 6 个三萜对照品，制备成 6 份样
品溶液，按照标准曲线计算其加样回收率为(96． 0 ± 1． 8)%(ＲSD
= 1． 82%)，(96． 5 ± 2． 0)%(ＲSD = 2． 12%) ，(96． 2 ± 1． 6)%
(ＲSD = 1． 65%) ，(96． 3 ± 1． 3)% (ＲSD = 1． 38%) ，(97． 6 ±
1． 5)%(ＲSD = 1． 49%) ，(96． 8 ± 1． 5)%(ＲSD = 1． 55%)。
2． 1． 9 供试品溶液含量的测定 取 6 个不同产地的山芝麻药材
分别制备供试品溶液，每个产地 3 份样品，根据回归方程计算得
各个产地山芝麻 6 个三萜类成分的含量，结果见表 2。在选定的
色谱条件下，6 个三萜类成分可以达到较好的色谱分离，见图 3。
表 1 山芝麻中 6 个三萜类分成分的含量 μg·g － 1
样品
山芝麻宁
酸甲酯
山芝麻
酯甲酯
山芝麻
宁酸
山芝
麻酸
白桦
酯酸
齐墩
果酸
S1 836． 7 ±9． 5 634． 2 ±7． 8 610． 4 ±6． 3 302． 6 ±2． 3 160． 3 ±2． 8 255． 8 ±4． 7
S2 1054． 8 ±11． 2 788． 6 ±8． 7 848． 2 ±9． 6 507． 7 ±8． 1 155． 3 ±2． 1 127． 4 ±1． 9
S3 735． 1 ±8． 9 601． 5 ±7． 1 352． 7 ±5． 5 341． 7 ±4． 7 108． 8 ±1． 6 114． 2 ±2． 5
S4 1345． 8 ±15． 6 1084． 4 ±11． 7 705． 8 ±8． 3 813． 6 ±10． 5 131． 3 ±2． 7 201． 8 ±3． 1
S5 638． 7 ±9． 1 604． 8 ±5． 9 413． 7 ±4． 9 198． 3 ±2． 2 99． 8 ±1． 5 107． 5 ±1． 2
S6 549． 5 ±8． 4 486． 9 ±5． 4 389． 5 ±6． 1 222． 5 ±2． 4 55． 1 ±0． 7 101． 8 ±1． 3
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2． 2 紫外可见分光光度法测定山芝麻总三萜内酯类(香草醛 －
高氯酸显色法［6］)的含量
2． 2． 1 对照品溶液的制备 精密称取齐墩果酸对照品 5． 0mg，加
甲醇溶解并定容，配制成浓度为 0． 1mg /ml的对照品储备液。
图 3 山芝麻药材中 6 个三萜类成分的 HPLC色谱图
2． 2． 2 样品溶液的制备 精密称定山芝麻药材(粉碎后，80℃真
空干燥，过 40 目筛)约 10g，置具塞锥形瓶中，加入 50ml 甲醇，超
声提取 30min，提取两次，回收甲醇，用少许超纯水混悬干物质，
精密加入 25ml 乙酸乙酯，称定重量，超声 5min，用乙酸乙酯补
重，静置分层，精确量取上清液的续滤液 10mL，水浴挥干，用甲醇
定容至 50ml容量瓶中，作为供试品溶液。
2． 2． 3 检测波长的选择 取对照品溶液和供试品溶液各 2ml，于
100℃水浴挥干，各加 5%香草醛 －冰醋酸溶液 0． 4ml，高氯酸1． 8
ml，摇匀，置 70℃水浴中加热 15min，取出，4℃冷却 5min，加冰醋
酸 5ml，摇匀，使之反应，10min后置比色皿中，以冰醋酸为空白溶
液，在 190 ～ 700nm扫描，结果在 552nm 处对照品与供试品的吸
收均较大，故选用 552nm作为检测波长。
2． 2． 4 线性关系的考察 精密吸取齐墩果酸对照品适量，用甲醇
溶解定量稀释配制成浓度为 140． 0，160． 0，180． 0，200． 0，220． 0，
240． 0mg /L的标准溶液，在 552nm下测定吸光度。以吸光度为纵
坐标，浓度为横坐标，得齐墩果酸的回归方程为 Y = 20． 792C +
0． 1233，r = 0． 9998。
2． 2． 5 精密度试验 取齐墩果酸对照品溶液，按“2． 4”项下操
作，连续重复测定 6 次，计算得 ＲSD 为 0． 11%(n = 6)，表明仪器
的精密度良好。
2． 2． 6 稳定性试验 取制备好的取广东中山产山芝麻药材(S1)
供试品溶液，在 0，15，20，30，45，60，90，120min 分别测定吸光度，
考察 100min内显色的稳定性。结果在 60min 时 ＲSD 为 2． 33%
(n = 6)，120min时 ＲSD为 5． 01%(n = 8) ，则表明在 0 ～ 60min内
样品显色稳定。
2． 2． 7 重复性试验:取广东中山产山芝麻药材(S1)，平行制备
6 份供试品溶液，在 552nm下测定吸光度，计算得 ＲSD = 2． 08%
(n = 6)。
2． 2． 8 加样回收率试验 取广东中山产山芝麻药材(S1)6 份，分
别加入与供试品等量的的齐墩果酸对照品，制备样品溶液，在
552nm下测定样品的吸光度，计算其加样回收率为(99． 3 ±
1． 9)%(ＲSD = 1． 97%)。
2． 2． 9 供试品溶液含量的测定 取 6 个不同产地的山芝麻药材
分别制备供试品溶液，每个产地 4 份样品，在 552nm 下测定吸光
度，根据回归方程计算得各个产地山芝麻总三萜的含量，S1 ～ S6
含量分别为 41． 3，47． 8，30． 5，63． 2，28． 1，27． 3mg /g。结果见图 4。
3 讨论
根据药理与植物化学的研究，山芝麻的主要有效成分为三萜
类化合物。萜类化合物也称为“苦味素”，是许多清热解毒类中
药的药效物质基础。山芝麻药材中的山芝麻宁酸及其甲酯、山芝
麻酸及其甲酯等五环三萜类成分具有化学结构的独特性(其在 C
－ 27 位上有苯甲酰基基团)，且含量较高，是山芝麻的特征性化
学成分。另外，上述三萜类成分还具有明确的药理活性，可以作
为山芝麻药材的指标成分，用于山芝麻药材及其制剂的质量控
制。
图 4 不同产地山芝麻药材中的总三萜含量
本实验使用 HPLC法测定 6 个不同产地山芝麻药材中 6 种
三萜类成分的含量，使用紫外可见分光光度法测定山芝麻药材的
总三萜含量，结果表明不同产地的山芝麻药材中总三萜的含量和
各成分的含量有一定的差异，广东和广西产药材中的三萜类成分
含量较高，福建和云南产药材的含量较低。
本实验分别用甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等溶剂对山芝麻药
材进行提取，结果表明用甲醇提取，HPLC 测定的峰面积最大，这
与文献报道相一致［7］。但甲醇提取液在 HPLC 色谱图上有较多
的杂峰，影响了指标性成分的测定，使用乙酸乙酯进行超声萃取
后，可以较好地减少杂质的干扰，各峰的分离较好。故本实验首
先用甲醇做为提取溶剂，再使用乙酸乙酯进行超声萃取，既可以
保证三萜类成分的提取效率，又可以达到较好的色谱分离。
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