全 文 ：表 4　水龙骨对大鼠足肿胀的影响( x±s , n=10)
Tab 4　Effect of Po lypodiodes niponica on car rageenan inducing r at voix pedis sw ell( x±s , n=10)
组别 剂量 足肿胀度
1 h 2 h 3 h 4 h 5 h 6 h
空白对照组 10 mL·kg -1 0.28+0.05 0.59+0.09 0.62+0.08 0.55+0.05 0.48+0.06 0.40+0.04
阿司匹林组 5 mg·kg -1 0.11+0.07a 0.28+0.09a 0.16+0.07a 0.11+0.07a 0.05+0.06a 0.03+0.04a
总提物组 4.66 g·kg -1 0.16+0.11a 0.54+0.17 0.63+0.15 0.56+0.17 0.54+0.15 0.49+0.15
A部分组 3.67 g·kg -1 0.19+0.07a 0.49+0.08a 0.48+0.09a 0.32+0.09a 0.28+0.09a 0.18+0.06a
B部分组 0.32 g·kg -1 0.23+0.11 0.52+0.10 0.62+0.08 0.55+0.08 0.48+0.10 0.42+0.12
C部分组 0.18 g·kg -1 0.26+0.08 0.63+0.11 0.65+0.13 0.57+0.10 0.55+0.11 0.51+0.12
D部分组 0.48 g·kg -1 0.29+0.09 0.68+0.15 0.67+0.12 0.60+0.05 0.54+0.09 0.49+0.06
注:同一时间内与空白对照组比较 , aP<0.05
3　讨论
水龙骨被广泛地应用于各种炎症和疼痛性疾
病 ,具有明显的抗炎镇痛作用 。因此本实验以抗炎
镇痛效果为指标 ,筛选水龙骨的有效部位。通过观
察水龙骨各部分对化学性疼痛(醋酸)和物理性疼痛
(热板)的抑制 ,及对小鼠耳肿胀和大鼠足肿胀 2 种
炎症模型的影响 ,综合实验结果表明:水龙骨的25%
乙醇洗脱部分在抗炎和镇痛两方面均有明显的作
用 ,应为水龙骨的抗炎镇痛的有效部位 ,其有效成分
及作用机制有待于进一步研究。
参考文献:
[ 1] 　姚振生 ,葛菲 ,龚旭.《植物名实图考》中的水龙骨科植物考证
[ J] .中药材 , 1994 , 17(10):41.
[ 2] 　中国植物志编委会.中国植物志[ M ] .第 6 卷 2分册.北京:科
技出版社 , 2000:10 , 255.
[ 3] 　姚振生 ,熊耀康 ,俞冰 ,等.浙江省水龙骨科药用植物资源[ J] .
中药材 , 2004 , 27(10):718-721.
[ 4] 　徐叔云 ,陈修 ,卞如廉.药理实验方法学[ M] .4版.北京:人民
卫生出版社 , 2002:700.
[收稿日期] 2007-11-01
[ 作者简介] 徐敏 ,女 ,硕士研究生 ,药师 ,电话:13898457320 , E-mai l:minmin 2000 2000@163.com
青叶胆高效液相色谱特征图谱研究及指标性成分的含量测定
徐敏 ,张振秋　(辽宁中医药大学 , 辽宁 大连 116600)
[ 摘要] 　目的:建立青叶胆高效液相特征图谱的测定方法 , 并对其中獐牙菜苦苷 、龙胆苦苷 、獐牙菜苷 3 种指标性成分进行含
量测定。方法:采用 Phenom sil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm , 5 μm),流动相为甲醇-乙腈-0.02%磷酸 , 梯度洗脱 , 流速1.0 mL
·min -1 , 柱温 35 ℃,检测波长 254 nm ,记录时间 70 min , 对 10 批青叶胆药材的特征图谱进行研究及含量测定。结果:初步建
立了青叶胆药材的高效液相特征图谱 ,标定了 14 个共有特征峰。实验中各共有峰相对保留时间的 RSD小于 5%,相对峰面
积的相似度在 80%左右。待测的 3 种成分均达到基线分离 ,獐牙菜苦苷 、龙胆苦苷 、獐牙菜苷的线性范围分别为0.33 ～ 1.98
μg(r=0.999 7)、0.16 ～ 0.96 μg(r=0.999 7)、0.20～ 1.20μg(r=0.999 9),回收率分别为99.9%, 98.2%, 100.7%。结论:此
方法稳定 、准确 、有效 ,可以全面的反映青叶胆药材的质量 ,可作为控制青叶胆药材质量的依据。
[ 关键词] 　青叶胆;特征图谱;含量测定;高效液相色谱法
[中图分类号] R282.7 , R927.2　　[ 文献标识码] A　　[文章编号] 1001-5213(2008)20-1751-05
Study on the specific chrometogram of Swer tiamileensis and determination of target components
by HPLC
XU Min ,ZHANG Zheng-qiu(Liaoning Univ ersity of T raditional Chinese Medicine , L iaoning Dalian 116600 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To e stablish specific chr omatog ram o f sw ertia mileensis by using H PLC fo r quality ev alution and to
determina te the contents o f therr iridoids , sw er tiamarin , gentiopicr oside , and swe roside in sw ertia mileensis.METHODS　The
analysis w as perfo rmed on a Phenomsil C18 column(4.6 mm×250 mm , 5 μm)with me thanol- ace tonitrile- wa te r(0.02% phos-
phoric acid)as mobile phase in a g radient mode at a flow rate of 1.0 mL·min-1 , and at a column tempe rature of 35 ℃.The de-
tection wavelength w as at 254 nm.RESULTS　The specific chromatog ram of S weitia mileensis was established and 14 common
peaks were indicated.Through reference substances , 3 common peak we re identified.The rela tive standard dev iations fo r rela-
tive re tention values and relative peak areas we re le ss than 5% in the pr ecision and repeated test.Base line resolution w as a-
chieved.The linear r anges of swer tiamarin 、gentiopicro side and sw ero side we re 0.33-1.98 μg(r= 0.999 7), 0.16-0.96 μg(r
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=0.999 7), 0.20-1.20 μg (r=0.999 9), re spectively.The average recoverie s w ere 99.9% , 98.2%, 100.7%, respectively.
CONCLUSION　The me thod is accurate、feasible and reliable , and can be used fo r the quality o f S wertia mi leensis.
KEY WORDS:S wertia mileensis;fing erprint;determination ;H PLC;
　　青叶胆为龙胆科獐牙菜属植物(Swertia
mi leensis TN Ho et WL.Shih)的干燥全草。味苦 ,
微寒 ,归肝胆经 ,具有清肝利胆 ,清热利湿的功效 。
用于黄疸尿赤 ,热淋涩痛[ 1] 。在云南哈尼族 、彝族及
周边地区常用于治疗急性病毒性肝炎 ,黄疸性肝炎 。
青叶胆中含有环烯醚萜苷 、黄酮 、内酯 、齐墩果酸等
类成分 ,具有具有退黄快 、降谷丙转氮酶明显及缩小
肝肿大等多种药理作用。本实验以獐牙菜苦苷为参
照物 ,在选定的色谱条件下 ,标定出 14个共有指纹
峰 ,首次建立了云南地区 10批青叶胆药材的 HPLC
特征图谱 ,并且在分离度达到要求的情况下对 14个
共有峰中的獐牙菜苦苷(S 峰),獐牙菜苷(1号峰)、
龙胆苦苷(2号峰)3个已知有效成分进行了含量测
定。在对青叶胆药材进行模糊 、整体的鉴别基础上 ,
结合指标性成分的含量测定 ,更能全面 、有效的控制
青叶胆药材的质量。
1　材料
Agilent1100高效液相色谱仪系列(安捷伦公司
生产);獐牙菜苦苷(批号 110785-200203)、龙胆苦
苷(批号 110770-200510)均购于中国药品生物制品
检定所;獐牙菜苷(广东中山康之源医药科技有限公
司 ,批号 2006021);采集 10批云南等不同产地和商
品地青叶胆样品 ,经辽宁中医药大学李峰教授鉴定
为青叶胆(Swert ia m i leensis T N Ho et W L Shih)
的干燥全草。药材来源见表 1。甲醇 、乙腈为色谱
纯;水为注射用水;其他试剂均为分析纯 。
表 1　青叶胆药材来源
Tab 1　Orig ins of swe rtia mileensis samples
样品 产地或商品地 采集时间 样品 产地 采集时间
1 云南禄丰 200512 6 云南罗平 200606
2 河北(商品地) 200512 7 云南禄丰 200610
3 云南蒙自 200604 8 云南禄劝 200610
4 云南曲靖 200606 9 湖北(商品地) 200610
5 云南禄丰 200606 10 云南禄劝 200704
2　方法与结果
2.1 　色谱条件 　Phenomsil C18 (250 mm ×4 .6
mm , 5 μm)色谱柱;流动相:甲醇-0.02 %磷酸水溶
液-乙腈 ,梯度洗脱程序 0 ～ 25 min ,甲醇体积分数由
13%线性增至 35%, 25 ～ 30 min ,由 35%线性增至
45%,30 ～ 40 min ,由 45%线性增至 50%, 40 ～ 52
min ,由 50%线性增至 67%, 52 ～ 65 min ,由 67%线
性增至 97%,乙腈体积分数始终为 3%;流速:1 .0
mL·min-1 ;柱温:35 ℃;检测波长:254 nm;进样量:
10 μL 。
2.2　对照品溶液的制备　分别精密称取獐牙菜苦
苷对照品3.30 mg 、龙胆苦苷对照品1.62 mg 、獐牙
菜苷对照品2 .02 mg ,置同一 25 mL 量瓶中 ,加甲醇
稀释至刻度 ,摇匀 。制成每 1 mL 分别含獐牙菜苦
苷 0.132 mg , 龙胆苦苷 0.064 0 mg , 獐牙菜苷
0.081 0 mg 的对照品溶液 。
2.3　供试品溶液制备　取青叶胆全草细粉0.5 g ,
精密称定 , 加甲醇 10 mL ,超声提取 2 次 , 每次 20
min ,滤过 ,合并滤液置 25 mL 量瓶中 ,加甲醇至刻
度 ,摇匀 。过0.45 μm 微孔滤膜 ,备用。
2.4　方法学考察
2.4.1　线性关系考察　精密吸取混合对照品2.5 ,
5.0 ,7.5 ,10.0 ,12 .5 ,15.0 μL ,进样。按上述色谱条
件测定峰面积 ,以对照品进样量(X)为横坐标 、峰面
积值(Y)为纵坐标 ,绘制标准曲线 。獐牙菜苦苷的
回归方程为 Y =535 186.23 X -15.69 , r =
0.999 7;龙胆苦苷的回归方程为 Y =1 701 446.12
X -41.25 , r =0.999 7;獐牙菜苷的回归方程为Y =
1 695 971 .51X -20.29 , r =0.999 9 。结果表明 ,獐
牙菜苦苷在0 .33 ～ 1.98 μg ,龙胆苦苷在0.16 ～ 0.96
μg ,獐牙菜苷在0.20 ～ 1 .20 μg 范围内 ,具有良好的
线性关系 。
2.4.2　精密度试验　精密吸取 10号样品制备的供
试品溶液 10 μL ,连续进样 5次 ,考察各主要色谱峰
的相对保留时间和峰面积的比值 ,结果相对保留时
间的 RSD 均小于 1.0%,相对峰面积 RSD均小于
5.0 %。且 S 、1 , 2 号共有峰峰面积的 RSD 分别为
1.5 %,1 .6%,1.5 %。表明仪器精密度良好 ,符合特
征图谱及含量测定的要求。
2.4.3　稳定性试验　精密吸取 10号样品制备的供
试品溶液 10 μL ,分别于 0 ,2 ,6 ,10 ,18 ,24 h检测高效
液相色谱图谱。并对图谱中各峰进行考察 , 相对保
留时间的RSD均小于1.5%,相对峰面积 RSD均小于
5.0%。且 S 、1 , 2 号共有峰峰面积的 RSD 分别为
1.2%,1.3%,1.5%,符合特征图谱及含量测定的要
求 ,表明青叶胆供试品溶液在常温下 24 h内稳定。
2.4.4　重复性试验　取 10号样品 5份 ,每份0.5 g ,
精密称定 ,按供试品溶液制备方法制备 , 检测高效
液相色谱图谱。结果各色谱峰的相对保留时间的
RSD均小于1.0%,相对峰面积 RSD均小于5.0%。
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表 2　獐牙菜苦苷 、龙胆苦苷 、獐牙菜苷回收率试验结果
Tab 2　Recoveries re sult o f swer tiamarin、 gentiopicro side and sw ero siderecoveris
试验号 称样量/g 含量/mg·g-1 测定总量/mg 回收量/mg 回收率/ %獐牙菜苦苷 龙胆苦苷 獐牙菜苷 獐牙菜苦苷 龙胆苦苷 獐牙菜苷 獐牙菜苦苷 龙胆苦苷 獐牙菜苷 獐牙菜苦苷 龙胆苦苷 獐牙菜苷
1 0.242 8 1.566 1 0.233 1 0.395 8 2.686 5 0.548 7 1.014 0 1.120 4 0.315 6 0.618 2 100.9 　98.5 103.4
2 0.256 3 1.653 1 0.246 0 0.417 8 2.782 5 0.562 4 1.015 3 1.129 4 0.316 4 0.597 5 101.7 　98.7 　99.9
3 0.243 5 1.570 6 0.233 8 0.396 9 2.673 1 0.543 6 1.003 9 1.102 5 0.309 8 0.607 0 　99.3 　96.7 101.5
4 0.247 9 1.599 0 0.238 0 0.404 0 2.721 9 0.558 6 0.998 7 1.122 9 0.320 6 0.594 7 101.2 100.0 　99.5
5 0.253 1 1.632 5 0.243 0 0.412 5 2.699 5 0.554 4 1.005 7 1.067 0 0.311 4 0.593 2 　96.1 　97.2 　99.2
且 S 、1 ,2号共有峰在 5份样品中含量的 RSD 分别
为2.1%, 1.8%,1.3 %,符合特征图谱的要求及含量
测定的要求 ,表明本法重复性较好 。
2.4.5　加样回收率试验　取已知含量的 10号样品
5份(含獐牙菜苦苷6.45 mg·g -1 ,龙胆苦苷0.96 mg
·g-1 ,獐牙菜苷1 .63 mg·g-1)各约0.25 g ,精密称
定 ,每份分别精密加入獐牙菜苦苷对照品溶液 5 mL
(0.220 2 g ·L -1)、龙胆苦苷对照品溶液 1 mL
(0.320 5 g ·L-1)、獐牙菜苷对照品溶液 1.5 mL
(0.398 5 g·L -1),照供试品溶液制备方法制备 ,求
得獐牙菜苦苷平均回收率为99.8%, RSD为2.3%;
龙胆苦苷平均回收率为98.2%, RSD为1.3%;獐牙
菜苷平均回收率为100.7 %, RSD为1.7 %。
2.5　青叶胆高效液相特征图谱的建立及评价
2.5.1　参照峰的选择及共有峰的标定　根据 10批
供试品 HPLC图谱(见图 1),选择了代表性样品 2
号作为对照特征图谱(见图 2)。根据 10批供试高
效液相色谱图谱 ,所给出的相关参数 ,青叶胆所有成
分的色谱峰在 70 min 之内全部出现 。獐牙菜苦苷
为主要的有效成分 ,从特征图谱中可以看出獐牙菜
苦苷色谱峰(RT ≌12 %, A %≌10%)积分百分比
大 ,达到基线分离 ,且稳定出现在每批样品里 ,因此
选择獐牙菜苦苷为参照峰(S)。
　　标定共有峰时采用的是相对保留时间。将各色
谱峰保留时间与同一图谱中参照峰的保留时间比
较 ,其比值为各色谱峰的相对保留时间 ,计算10批
图 1　10批青叶胆药材特征图谱共有模式
Fig 1　Comm on pat tern of ten batches Swert ia m ileensi s samples
图 2　青叶胆药材特征图谱
Fig 2　Reference ch romatogram of Swer t ia mi leensis
药材特征图谱中各色谱峰的相对保留时间 ,其中 14
个色谱峰为各样品所共有 ,故标定它们为共有特征
峰。且 14个共有峰的峰面积在每批药材中均达到
总峰峰面积的 80%以上。
2.5.2　共有峰的相对保留时间 、相对峰面积及相似
度的计算 10批共有峰的相对保留时间及 RSD结果
见表 3。
采用 Excel软件进行相似度计算[ 2] ,以夹角余
弦和相关系数来评价 10批样品色谱峰的相对峰面
积的相似度。以 10 批样品的平均相对峰面积作对
照。结果见表 4。
表 3　10批青叶胆药材共有特征峰的相对保留时间
Tab 3　Relative retention time of common peaks of ten ba tches S wertia mileensis
峰号 批 1 批 2 批 3 批 4 批 5 批 6 批 7 批 8 批 9 批 10 RSD/ %
峰 S 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0
峰 1 1.22 1.22 1.22 1.21 1.22 1.22 1.22 1.22 1.21 1.21 0.4
峰 2 1.3 1.3 1.3 1.29 1.3 1.3 1.31 1.3 1.29 1.3 0.4
峰 3 1.56 1.57 1.56 1.55 1.56 1.54 1.58 1.57 1.55 1.52 1.1
峰 4 1.96 1.98 1.98 1.98 2 1.98 2.02 2 1.98 1.95 1.0
峰 5 2.05 2.08 2.06 2.06 2.08 2.06 2.09 2.08 2.01 2.03 1.2
峰 6 2.1 2.11 2.11 2.12 2.13 2.11 2.15 2.13 2.11 2.08 0.9
峰 7 2.58 2.41 2.57 2.4 2.53 2.59 2.62 2.61 2.42 2.58 3.5
峰 8 2.83 2.88 2.82 2.85 2.89 2.85 2.88 2.86 2.85 2.83 0.8
峰 9 3.78 3.77 3.78 3.69 3.85 3.84 3.79 3.79 3.83 3.78 1.2
峰 10 4.07 3.92 4.05 4.08 4.19 4.08 4.13 4.14 4.07 4.12 1.8
峰 11 4.15 4.17 4.17 4.15 4.24 4.15 4.2 4.21 4.15 4.21 0.8
峰 12 4.7 4.77 4.66 4.73 4.86 4.73 4.76 4.73 4.61 4.77 1.4
峰 13 4.9 4.99 4.89 4.99 5.01 4.93 4.96 4.94 4.95 4.98 0.8
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表 4　10批青叶胆药材共有特征峰的相对峰面积及相似度
Tab 4　Relative a rea of common peaks and simila rity of ten ba tches S wertia mileensis
峰号 批 1 批 2 批 3 批 4 批 5 批 6 批 7 批 8 批 9 批 10 平均值
峰 S 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
峰 1 0.801 5.091 0.822 2.411 0.810 0.813 0.802 0.812 0.578 0.781 1.36
峰 2 1.410 2.672 1.391 11.70 1.432 1.430 1.410 1.411 1.390 1.360 2.557
峰 3 1.970 7.940 1.960 4.560 2.051 2.041 1.991 1.990 13.96 1.921 4.038
峰 4 0.395 0.641 0.460 1.170 0.454 0.462 0.461 0.461 0.481 0.410 0.539
峰 5 0.139 0.120 0.202 0.231 0.191 0.197 0.212 0.201 0.123 0.140 0.150 5
峰 6 0.050 8.380 0.090 0.220 0.082 0.085 0.093 0.095 7.240 0.054 1.637 7
峰 7 0.287 0.432 0.490 0.362 0.483 0.499 0.501 0.481 0.325 0.210 0.330 6
峰 8 1.541 1.980 1.321 2.881 1.331 1.361 1.360 1.331 2.481 1.080 1.666
峰 9 0.489 2.781 0.661 0.251 0.710 0.710 0.711 0.712 2.162 0.491 0.966 9
峰 10 0.472 0.432 0.690 1.580 0.651 0.671 0.690 0.639 1.531 0.502 0.742 2
峰 11 1.270 0.590 1.310 1.630 1.360 1.372 1.411 1.331 14.33 1.231 2.581
峰 12 0.116 0.241 0.250 0.065 0.241 0.240 0.250 0.252 0.214 0.120 0.177 4
峰 13 0.436 0.201 0.531 0.078 0.562 0.481 0.520 0.522 1.014 0.163 0.452 4
夹角余弦 0.942 0.814 0.946 0.760 0.949 0.948 0.947 0.948 0.865 0.954 1
相关系数 0.848 0.646 0.853 0.618 0.861 0.862 0.857 0.859 0.810 0.883 1
　　10批样品中 ,从相对峰面积分析结果看 ,批 1 、
批 3 、批 5 、批 6 、批 7 、批 8 、批 10相似度较高 ,可归为
一类 ,批 2 、批 4 、批 9相似度较低 ,归为一类。
2.5.3　化学模式识别之聚类分析　因为样本的产
地 ,采集时间 ,生长年限 ,生长条件等因素的差异 ,使
得各样本间的成分不尽相同 ,在色谱图中表现为色
谱峰的个数和峰位有差异 。不同的生长因素 ,又造
成了各个成分的含量也不尽相同 ,在色谱图中表现
为相同保留时间的色谱峰 ,峰面积差别较大 。根据
这一性质 ,以各样品的大多数峰的相对保留时间及
相对峰面积作变量进行聚类分析。对所得的 10 批
青叶胆 HPLC特征图谱数据进行标准化变换 ,采用
SPSS 软件对 10批样品进行聚类分析。选用平方欧
氏距离作为间距测度变量 ,聚类方法采用组间联结方
法 ,进行层次聚类分析来研究样本之间的归类情况 。
各批次样品相对峰面积聚类分析结果显示 ,批
6 、批 7 、批 5 、批 8 、批 3 、批 1 、批 10 、聚为一类 ,批 4 ,
批 2 ,批 9号样品 ,与其他批次样品差距较大。
各批次样品相对保留时间聚类分析结果显示 ,
批 7 、批 8 、批 10 聚为一类 ,批 1 、批 3 、批 6聚为一
类 ,批 2 、批 4 、批 9聚为一类。
10批青叶胆样品的聚类分析结果与相似度计
算结果比较接近 ,但由于分析方法不完全相同 ,在某
些结果上还有不同。
2.6　3种指标性成分含量测定　獐牙菜苦苷 、龙胆
苦苷 、獐牙菜苷含量测定结果见表 5 ,对照品谱图样
品谱图见图 2。
3　讨论
3.1　流动相及梯度洗脱程序的确定　特征图谱的
流动相采用梯度洗脱的方法以求得更多的特征指标
峰及更好的分离效果 ,实验中对流动相的组成及陡
度的变化分别进行了优化考察[ 3] 。采用了甲醇-水
表 5　10批青叶胆药材 3种指标性成分的含量测定结果
Tab 5　Determination o f thr ee ta rget components in ten bat-
ches S wertia mi leensis
成分 含量批 1 批 2 批 3 批 4 批 5 批 6 批 7 批 8 批 9 批 10
a 10.1 3.51 9.12 2.54 6.79 5.89 8.19 7.69 3.21 6.45
b 　1.53 0.35 0.97 0.45 0.91 1.03 0.86 1.23 0.52 0.96
c 　1.71 1.03 1.86 0.63 1.43 1.53 1.41 2.15 1.01 1.63
注:a为獐牙菜苦苷;b为龙胆苦甘;c为獐牙菜苷
系统 ,甲醇-乙腈-水系统以及甲醇-磷酸水-乙腈系
统 ,结果发现甲醇-0 .02%磷酸水-乙腈体系梯度洗
脱条件最好 ,色谱峰基线平稳 ,峰形尖锐 、对称并且
主要色谱峰能达到基线分离 。
3.2　紫外检测波长的选择　针对 3 种含量测定组
分的最大紫外吸收波长分别为 236 ,273 ,243 nm ,同
时比较了检测波长为 240 , 254 , 260 nm 时的色谱
图 ,结果 254 nm 色谱图基线较平稳 ,出峰数多 ,峰
形对称 ,故选择检测波长为 254 nm 。
图 3　对照品 HPLC色谱图
S.獐牙菜苦苷;1-龙胆苦苷;獐牙菜苷
Fig 3　HPLC chromatogram s of reference subs tance
S.sw ertiamarin;1-gent iopicroside;2-sw erosiderecoveri s
3.3　样品提取方法的考察　通过以甲醇为溶剂 ,比
较回流提取和超声提取 2种方法 ,结果表明 ,回流提
取 4 h和超声 30 min时 3种待测组分含量相当 ,但
回流提取其余共有特征峰较不稳定 ,干扰较大 ,且基
线漂移严重 ,故确定用甲醇超声的提取方法。对超
声提取的时间 ,提取次数 ,提取溶剂用量进行了三因
素 ,三水平的正交实验考察 ,确定最佳提取方法为超
·1754· 中国医院药学杂志 2008年第 28卷第 20期 Chin H osp Pharm J , 2008 Oct , Vol 28 , No.20
声提取 2次 ,每次 20 min ,每次加 20 倍药材量的甲
醇。
3.4　聚类分析　本实验的相似度计算只是简单采
用了 Excel表进行了样品相对保留时间与相对峰面
积的夹角余弦与相关系数的计算 ,与特征图谱相似
度计算软件相比还有许多不足 ,所以补充聚类分析
以更加精确地判断 13批青叶胆间的相似关系与分
类状况。
参考文献:
[ 1] 　中国药典.一部 [ S] .2005:485.
[ 2] 　苗爱东 ,孙殿甲.Excel在中药指纹相似度计算中的应用[ J] .药
学进展.2003 , 27(1):51.
[ 3] 　谢培山.中药色谱指纹图谱[ M] .北京:人民卫生出版社 ,
2004:54-64.
[收稿日期] 2007-09-08
[ 作者简介] 夏泉 ,男 ,硕士 ,副主任药师 ,电话:0551-2922421 , E-m ail:xiaquan@ah163.com
pH对红霉素稳定性及抑菌作用的影响
夏泉1 ,王中新2 ,刘钢3 ,谈超1 ,孙旭群1 ,许杜娟1 　(1.安徽医科大学第一附属医院药剂科 , 安徽 合肥 230022;2.安徽医
科大学第一附属医院检验科 ,安徽 合肥 230022;3.安徽医科大学药学院 ,安徽 合肥 230032)
[ 摘要] 　目的:研究 pH 对红霉素葡萄糖滴注液稳定性及抑菌作用的影响。方法:采用高效液相色谱法 、pH 值测定法和测定
最小抑菌浓度的方法考察 pH 对红霉素稳定性及抑菌作用的影响。结果:通过加入碳酸氢钠调节红霉素葡萄糖滴注液 pH 值
后其稳定性明显提高 ,对部分菌株的抑菌活性增强。结论:加入碳酸氢钠有利于红霉素葡萄糖溶液的稳定性和抑菌活性;临
床在使用葡萄糖溶液稀释乳糖酸红霉素时应严格按照药品说明书的要求加入规定量的碳酸氢钠。
[ 关键词] 　红霉素;pH;稳定性;抑菌作用
[中图分类号] R943　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2008)20-1755-04
Effect of pH value on stability and antimicrobial actions of erythromycin
XIA Quan1 ,WANG Zhong-xin2 ,LIU Gang3 ,TAN Chao1 ,SUN Xu-qun1 ,XU Du-juan1(1.Depa rtment o f Pha r-
macy , the First A ffiliated Hospital of Anhui M edical Unive rsity , Anhui H efei 230022 , China;2.Depar tment of I nspection , the
First A ffiliated Hospital of Anhui Medical University , Anhui Hefei 230022 , China;3.Schoo l of Pha rmacy , Anhui Medical Uni-
versity , Anhui Hefei 230032 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To study the effect of pH value on stability and antimicrobia l actions o f e ry thr omycin.METHODS　
The effect o f pH value on stability and antimicrobia l actions of ery thromycin w ere determined by H PLC , pH value-detecting
me thod and minimum inhibito ry concentra tions.RESULTS　The stability w as improved obviously after NaH CO 3 had been add-
ed to adjust the pH value , and antimicrobial actions w ere improved to partia l bac te ria.CONCLUSION　Adding NaHCO3 is ad-
vantag eous to the stability and antimic robial actions of ery thromycin gluco se solution;it should be acco rding to the require-
ments of drug inst ructions to add suitable amount of NaHCO 3 clinical usage.
KEY WORDS:ery thromycin;pH value;stability;antimicr obial ac tions
　　注射用乳糖酸红霉素为大环内酯类抗生素 ,对
葡萄球菌属 、链球菌和支原体 、衣原体均具抗菌活
性 ,临床常用于治疗耐青霉素的金黄色葡萄球菌感
染和支原体衣原体肺炎的治疗[ 1] 。其滴注液的配制
方法为加入适量注射用水溶解后再用生理盐水或其
他电解质溶液稀释;如以葡萄糖的溶液稀释 ,必须每
100 mL 溶液中加入 4%碳酸氢钠 1 mL 。目前在临
床实际操作中 ,常忽视了加入碳酸氢钠作为 pH 调
节剂而以 5%葡萄糖溶液稀释后直接使用。为考察
pH 值对乳糖酸红霉素葡萄糖滴注液稳定性及抑菌
作用的影响 ,进行了相关的实验研究。
1　材料
Agilent HP1100高效液相色谱仪(美国安捷伦
公司);Micro SCAN Walkaw ay-40 全自动微生物
鉴定和药敏分析仪(美国德灵公司);红霉素对照品
(中国药品生物制品检定所 ,批号 130307-200215 ,
红霉素 A 含量 92.3%);注射用乳糖酸红霉素(0.25
g ,上海新先锋药业有限公司 ,批号 050901);葡萄糖
注射液(500 mL∶25 g ,天津大冢制药有限公司 ,批
号 3L99C);灭菌注射用水(安徽双鹤药业有限公司 ,
批号 060630);碳酸氢钠注射液(10 mL∶0.5 g ,天津
金耀氨基酸有限公司 ,批号 0609081);M-H 肉汤 、
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