全 文 ：[ 基金项目] 国家自然科学基金(编号:30570184 , 30772761 , 30870249)湖北省自然科学基金(编号:2004ABA216)　[作者简介] 李淼 ,男 , 2006
级本科生　[ 通讯作者] 楼一层,男 ,博士 ,教授 ,电话:027-62790602 , E-mail:l ouyiceng@163.com
红蓼花 、叶茎醋酸乙酯部位的高效液相色谱特征图谱
李淼 ,楼一层 ,林鑫 ,宋青 ,杨翰 ,胡佳兴　(武汉理工大学化学工程学院 ,湖北 武汉 430070)
[ 摘要] 　目的:采用高效液相色谱法建立红蓼花 、叶茎的特征图谱。方法:用 KromasilTM C18柱(4.6 mm×250 mm , 5 μm),流
动相甲醇-0.2%磷酸水溶液梯度洗脱 , 流速为1.0 m L·min-1 , 检测波长为 310 nm。结果:9 个不同产地药材的特征图谱具有
较好的相似度 ,样品特征图谱相似度均在 97%以上。结论:采用高效液相色谱特征图谱检测技术可有效控制红蓼花 、叶茎药
材的质量。
[ 关键词] 　红蓼;槲皮素;特征图谱
[中图分类号] R927.2　　[ 文献标识码] A　　[文章编号] 1001-5213(2009)01-0004-04
HPLC specific chromatogram of active component in flower and stem of Polygoni Orientalis
LI Miao , LOU Yi-ceng , LIN Xin , SONG Qin , YANG Hao , HU Jia-xing(Schoo l of Chemistry and Engineering ,
Wuhan Unive rsity of Techno lo gy , Wuhan 430070 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To study and e stablish the specific chr omatog ram o f the flow er and stem o f Polygoni Orientalis by
HPLC.METHODS　The chromatog raphic condition w as K romasilTM C18 co lumn(4.6 mm×250 mm , 5μm), mobile phase w as
me thanol and 0.2% H3PO 4 , and flow ra te w as 1.0 mL·min-1 , detection w aveleng th was 310 nm.RESULTS　The chroma-
to g rms the materials from o f 9 diffe rent place we re simila r.CONCLUSION　Quality o f the flowe r and stem of Polygoni Orien-
talis can be contr olled effectiv ely by H PLC specific chroma to g ram.
KEY WORDS:po ly goni orientalis;quercetin;specific chromato gr am
　　红蓼为蓼科植物 ,性味凉辛有毒 ,具有祛风除
湿 ,清热解毒 ,活血之功效 。主治风湿痹痛 、痢疾 、腹
泻 、吐泻 、水肿 、脚气 、痈疮疔疖 、蛇虫咬伤 、小儿疳积
疝气 、跌打损伤 、疟疾 。研究表明 ,红蓼主要有效部
位为黄酮类化合物 ,其花 、叶茎中都含有丰富的黄酮
类化合物 ,槲皮素是其中的主要成分 ,具有抗炎 、抗
抑郁及抗自由基等药理作用[ 1-2] 。本实验采用高效
液相色谱法对其有效部位进行了特征图谱研究 ,从
而为红蓼药材的资源品质评价提供一定的科学依
据。
1　材料
Agilent 1100 Series高效液相色谱仪(美国A g-
ilent 科技公司 , Tcc-100 柱温箱 , UVD-170U 紫
外检测器);Mett ler Toledo AT20型分析天平(十
万分之一);槲皮素(quercetin)对照品(中国药品生
物制品检定所 ,批号 200614);红蓼花(flow er of Po-
lygonum orientale L.),红蓼叶茎(stem of Polygo-
num orientale L .)来自 9 个不同产地 ,样品都在红
蓼开花旺盛时期进行整株采集 ,经湖北中医学院张
秀桥副教授鉴定),见表 1;甲醇为色谱纯;其他试剂
为分析纯;水为注射用水 。
表 1　红蓼花 、红蓼叶茎来源
Tab 1　Origin o f Polygoni Orientalis
样品号 产地 样品号 产地
1 江苏南京 6 河南郑州
2 江苏苏州 7 河南新乡
3 湖北武汉 8 安徽合肥
4 山东济南 9 安徽亳州
5 山东潍坊
2　方法和结果
2.1　色谱条件　色谱柱KromasilTM C18(4.6 mm×
250 mm ,5 μm)(天津市特纳科学仪器有限公司),
流动相 A 为甲醇 ,B 为0.2%磷酸水溶液 ,按表 2进
行梯度洗脱;流速:1.0 mL·min-1 ;检测波长:310
nm;柱温:30 ℃;样品进样量均为 10 μL 。
表 2　红蓼花 、叶茎的流动相梯度
Tab 2　Gradient of eluention Polygoni Orientalis
红蓼花的流动相梯度 红蓼叶茎的流动相梯度
时间
/min
流动相 A
/ %
流动相 B
/ %
时间
/min
流动相 A
/ %
流动相 B
/ %
0 20 80 0 30 70
10 20 80 10 35 65
20 40 60 30 50 50
50 40 60 40 60 40
60 80 20 80 80 20
2.2　供试品溶液的制备　药材均取3.0 g ,精密称
·4· 中国医院药学杂志 2009年第 29卷第 1期 Chin H osp Pharm J , 2009 Jan , Vol 29 , No.01
量 ,加石油醚(60 ～ 90 ℃)50 mL 索氏提取至无色 ,
挥干溶剂 ,再加醋酸乙酯 50 mL 回流提取 2次 ,每
次 1 h ,过滤 ,滤液挥干 ,残渣用甲醇定容至 5 mL ,摇
匀 ,用0.45 μm 微孔滤膜滤过 ,取续滤液作供试品溶
液。花 、叶茎的醋酸乙酯部位的各共有峰的图谱见
图 1 ,2。
图 1　红蓼花的标准特征图谱
1 ～ 12-共有峰;7-槲皮素
Fig 1　Standard HPLC specif ic chromatogram of the f lower of Po ly-
goni Orientali s
1 ～ 12-comm on peaks;7-qu ercet in
图 2　红蓼叶茎的标准特征图谱
1 ～ 15-共有峰 2-槲皮素
Fig 2　Standard H PLC specif ic ch romatogram of the stem of Po ly-
goni Orientali s
1 ～ 15-comm on peaks;2-qu ercet in
2.3　对照品溶液的制备　精密称取槲皮素对照品
适量 ,置 2 mL 量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,
制成含槲皮素0.5 g·L-1的对照品溶液。
2.4　精密度试验　取 4号红蓼花 、叶茎样品 ,按供
试品溶液的制备方法制备 ,按上述色谱条件测定 6
次 ,记录相对保留时间和相对峰面积的比值 , RSD
分别为0.2%～ 2.8%,0.7%～ 3.6%。
2.5　重复性试验　取 3号红蓼花 、叶茎样品 6份 ,
每份3.0 g ,精密称量 ,按上述供试品溶液的制备方
法制备。结果表明 ,各色谱峰的相对保留时间和相
对峰面积比值基本一致 , RSD 分别为 0.2% ～
3.2%,0.5%～ 4.1%。
2.6　稳定性试验　取 4号红蓼花 、叶茎样品 ,按供
试品溶液的制备方法制备 ,分别在 0 ,2 ,4 ,8 , 10 ,和
15 h 检测特征图谱。结果表明 ,各色谱峰的相对保
留时间和相对峰面积比值基本一致 , RSD 分别为
0.07%～ 1.4%,0.8%～ 3.1%。
2.7　特征图谱及技术参数
2.7.1　主要色谱峰的鉴别　在相同色谱条件下 ,测
定槲皮素对照品 ,并与样品特征图谱中相应图谱峰
进行比较 ,红蓼花的特征图谱中 7 号峰的保留时间
及紫外吸收色谱图 ,与槲皮素信号峰吻合;红蓼茎叶
的特征图谱中 2 号峰的保留时间及紫外吸收色谱
图 ,与槲皮素信号峰吻合 ,故 7 号 、2号峰分别鉴定
为槲皮素 。见图 3 ,4 。
图 3　红蓼花的对照图
Fig 3　Referen ce chromatog ram of the f lower of Polygoni Orienta li s
图 4　红蓼叶茎的对照图
Fig 4　Reference ch romatogram of th s tem of Polygoni Or iental is
2.7.2　不同产地药材特征图谱比较　取不同产地
样品粉末 ,按供试品溶液的制备方法制备。根据测
试结果 ,比较其色谱图 ,以相对保留时间标定红蓼的
花 、叶茎分别有 12 , 15 个共有峰 ,参照峰分别为 10
号 、11号(S),测定各共有峰相对保留时间和相对峰
面积比值 ,结果表明 RSD均小于5.0%,见表 3 ～ 6。
样品 1 ～ 9图谱叠加效果见图 5 ,6。
表 3　红蓼花共有峰的相对保留时间(h)
Tab 3　Relative retention time of common peaks of flowe r of Polygoni Orientalis(h)
共有峰
峰号
样品编号
1 2 3 4 5 6 7 8 9
平均值 RSD/ %
1 0.091 0.088 0.089 0.089 0.092 0.089 0.086 0.086 0.087 0.089 0.023
2 0.301 0.278 0.291 0.295 0.295 0.291 0.282 0.283 0.283 0.289 0.026
3 0.351 0.332 0.333 0.344 0.350 0.342 0.329 0.330 0.331 0.338 0.026
4 0.482 0.462 0.467 0.472 0.483 0.472 0.452 0.452 0.453 0.466 0.026
5 0.505 0.483 0.490 0.496 0.507 0.495 0.474 0.474 0.476 0.489 0.026
6 0.563 0.538 0.546 0.552 0.564 0.551 0.527 0.527 0.529 0.544 0.027
7 0.616 0.585 0.595 0.603 0.616 0.600 0.574 0.574 0.576 0.593 0.028
8 0.743 0.720 0.732 0.724 0.755 0.737 0.708 0.707 0.708 0.726 0.024
9 0.766 0.744 0.756 0.766 0.779 0.761 0.732 0.731 0.732 0.752 0.024
10 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 0
11 1.219 1.168 1.170 1.192 1.220 1.188 1.143 1.141 1.147 1.176 0.026
12 1.234 1.187 1.198 1.219 1.249 1.217 1.169 1.168 1.174 1.202 0.026
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表 4　红蓼花共有峰的相对峰面积
Tab 4　Relative a rea of common peaks o f flower of Polygoni Orientalis
共有峰
峰号
样品编号
1 2 3 4 5 6 7 8 9
平均值
1 0.035 0.034 0.038 0.035 0.036 0.039 0.036 0.036 0.039 0.036
2 0.086 0.081 0.083 0.087 0.088 0.085 0.085 0.087 0.086 0.085
3 0.046 0.046 0.042 0.049 0.044 0.043 0.047 0.047 0.046 0.046
4 0.124 0.122 0.122 0.125 0.128 0.120 0.122 0.124 0.126 0.124
5 0.059 0.051 0.058 0.057 0.058 0.058 0.059 0.056 0.054 0.057
6 0.060 0.064 0.069 0.069 0.065 0.063 0.063 0.063 0.067 0.065
7 0.034 0.038 0.035 0.038 0.038 0.036 0.034 0.034 0.036 0.036
8 0.346 0.335 0.340 0.322 0.337 0.338 0.344 0.371 0.346 0.342
9 0.495 0.468 0.469 0.433 0.471 0.448 0.490 0.440 0.441 0.462
10 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000
11 0.074 0.082 0.073 0.069 0.076 0.075 0.070 0.074 0.076 0.074
12 0.017 0.016 0.020 0.018 0.019 0.021 0.019 0.021 0.022 0.019
表 5　红蓼叶茎共有峰的相对保留时间(h)
Tab 5　Relative retention time of common peaks of stem of Polygoni Orientalis(h)
共有峰
峰号
样品编号
1 2 3 4 5 6 7 8 9
平均值 RSD/ %
1 0.265 0.265 0.265 0.267 0.265 0.265 0.267 0.268 0.268 0.266 0.005
2 0.518 0.528 0.514 0.518 0.519 0.519 0.516 0.516 0.517 0.518 0.008
3 0.561 0.560 0.560 0.564 0.565 0.562 0.561 0.561 0.563 0.562 0.003
4 0.638 0.637 0.637 0.641 0.643 0.639 0.638 0.638 0.640 0.639 0.003
5 0.666 0.664 0.666 0.684 0.686 0.667 0.666 0.666 0.668 0.670 0.013
6 0.682 0.680 0.680 0.693 0.694 0.683 0.681 0.682 0.683 0.684 0.008
7 0.773 0.771 0.771 0.775 0.777 0.773 0.773 0.773 0.777 0.774 0.003
8 0.802 0.800 0.799 0.804 0.805 0.802 0.802 0.802 0.803 0.802 0.002
9 0.954 0.954 0.953 0.953 0.953 0.958 0.954 0.953 0.952 0.954 0.002
10 0.977 0.976 0.976 0.977 0.977 0.977 0.977 0.977 0.977 0.977 0.001
11 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 0
12 1.081 1.079 1.080 1.080 1.082 1.081 1.079 1.081 1.081 1.080 0.001
13 1.120 1.122 1.123 1.121 1.124 1.120 1.128 1.120 1.121 1.122 0.002
14 1.133 1.132 1.133 1.133 1.136 1.133 1.157 1.133 1.134 1.136 0.007
15 1.202 1.199 1.201 1.204 1.209 1.203 1.200 1.201 1.204 1.203 0.003
表 6　红蓼叶茎共有峰的相对峰面积
Tab 6　Relative a rea of common peaks o f stem o f Poly goni Orientalis
共有峰
峰号
样品编号
1 2 3 4 5 6 7 8 9
平均值
1 0.254 0.244 0.253 0.258 0.235 0.235 0.237 0.238 0.248 0.245
2 0.038 0.038 0.039 0.042 0.039 0.033 0.033 0.041 0.032 0.037
3 0.141 0.152 0.140 0.139 0.145 0.144 0.144 0.149 0.141 0.144
4 0.048 0.054 0.065 0.058 0.050 0.061 0.060 0.049 0.060 0.056
5 0.108 0.103 0.098 0.117 0.106 0.107 0.106 0.106 0.104 0.106
6 0.076 0.069 0.081 0.070 0.074 0.073 0.071 0.072 0.073 0.073
7 0.159 0.166 0.169 0.180 0.167 0.163 0.181 0.170 0.169 0.169
8 0.262 0.270 0.259 0.280 0.269 0.281 0.271 0.259 0.265 0.268
9 0.212 0.221 0.239 0.226 0.230 0.219 0.224 0.230 0.234 0.226
10 0.232 0.256 0.235 0.239 0.245 0.239 0.239 0.246 0.238 0.241
11 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000
12 0.132 0.134 0.148 0.144 0.140 0.139 0.150 0.151 0.139 0.142
13 0.745 0.721 0.762 0.725 0.736 0.744 0.750 0.723 0.735 0.738
14 0.321 0.299 0.286 0.287 0.301 0.305 0.285 0.280 0.319 0.298
15 0.298 0.268 0.297 0.279 0.281 0.277 0.275 0.291 0.266 0.281
图 5　9批红蓼花的高效液相色谱图谱
Fig 5　HPLC ch romatogram of 9 batches of the flow er of Po lyg on i
Or ien tal is
图 6　9批红蓼叶茎的高效液相色谱图谱
Fig 6　HPLC ch romatogram of 9 batches of th e stem of Poly goni
Orienta li s
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2.7.3　非共有峰峰面积的比值　9 批药材非共有
峰总面积占总面积的比例均小于 10%,见表 7 ,8。
表 7　红蓼花非共有峰峰面积占总峰面积的比值
Tab 7　Ra tio of area o f non-common peaks to all peaks of
flow er
样品号 非共有峰峰面积 总峰面积 比例/ %
1 20.658 593.665 3.48
2 22.323 450.263 4.96
3 42.326 568.265 7.45
4 60.101 811.024 7.41
5 71.223 840.987 8.47
6 60.021 656.088 9.15
7 54.854 729.103 7.52
8 65.359 830.367 7.87
9 51.344 659.741 7.78
表 8　红蓼叶茎非共有峰峰面积占总峰面积的比值
Tab 8　Ra tio of area o f non-common peaks to all peaks of
stem
样品号 非共有峰峰面积 总峰面积 比例/ %
1 20.968 463.478 4.52
2 46.235 771.855 5.99
3 48.852 523.336 9.33
4 33.226 556.289 5.97
5 51.020 610.777 8.35
6 69.703 810.659 8.59
7 74.996 883.253 8.49
8 48.269 634.224 7.61
9 63.556 766.365 8.29
3　讨论
本实验研究了红蓼花 、叶茎醋酸乙酯部位的特
征图谱[ 3-4] 。已有对红蓼果实的研究报道 ,但对于红
蓼花 、叶茎的研究尚存在一定空白。本实验对于完
善红蓼全草的研究 ,对于建立中药红蓼药材质量控
制标准具有重要意义。
红蓼的醋酸乙酯部位有较强抗癌活性[ 1-2] ,故分
别提取 9 个不同产地红蓼花 、叶茎的醋酸乙酯部
位。分别选用甲醇-水 、乙腈-水 、甲醇-0.2%磷酸水
溶液体系进行梯度和等度洗脱 , 结果选择甲醇-
0.2%磷酸水溶液梯度洗脱 ,得到的色谱峰形较好 ,
且较稳定 。为确保下次分析时色谱峰的峰形及分离
度 ,每次运行梯度后 ,柱平衡至少需要 10 min。比
较了波长 200 ～ 400 nm 所得的高效液相图谱 ,结果
在 310 nm 波长检测时 ,其高效液相图谱中可见各
色谱峰分离度较好 ,且基线不漂移 ,没有出现倒峰 ,
故确定波长 310 nm 为检测波长。
本研究所用 9个不同产地药材的采收贮存时间
存在一定差异 ,但所得特征图谱一致性仍较好 ,样品
特征图谱相似度均在 97%以上 ,说明各地红蓼药材
的质量稳定性良好。红蓼高效液相特征图谱的建
立 ,为红蓼药材的鉴别及质量的有效控制提供了科
学依据。
参考文献:
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临床药理 , 2001 , 12(3):135.
[收稿日期] 2008-03-06
[ 基金项目] 湖北省科技攻关计划项目(编号:2006AA412C08)　[ 作者简介] 刁波 ,男 ,学士 , 电话:027-68878660 , E-m ail:dpitao@163.com 　
[ 通讯作者] 唐瑛 , 027-68878659 , E-mai l:maotou01@163.com
刺五加多糖对过氧化氢损伤海马神经元中氧自由基的影响
刁波 ,唐瑛 ,王晓昆 ,杨李 ,邹瑞 ,邓惠玲　(广州军区武汉总医院医学实验科 ,湖北 武汉 430070)
[ 摘要] 　目的:研究刺五加多糖(ASPS)对由过氧化氢(H2O 2)氧化损伤的大鼠海马神经元内氧自由基的影响。方法:运用海
马神经细胞原代培养技术 ,采用 H2O2诱导建立细胞氧化损伤模型。观察细胞形态学变化;甲基四氮唑盐(MT T)法测定细胞
活性;免疫组化法鉴定海马神经元 , 化学比色法测定丙二醛(MDA)、H2O 2 、羟自由基(ROS)含量及细胞外液中乳酸脱氢酶
(LDH)的活性。结果:形态学观察显示 ,与模型组比较 , ASPS 组细胞损伤程度明显减轻;ASPS 组细胞活性(0.46)比模型组
细胞活性(0.36)高(P<0.01);MDA 、H2O2 、ROS 的含量及细胞外液中 LDH 的活力 ASPS 组明显低于模型组。结论:ASPS
能降低海马神经元中氧自由基的含量 ,并对海马神经元氧化损伤有保护作用。
[ 关键词] 　刺五加多糖;海马神经细胞;氧自由基
[中图分类号] R285.5 　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2009)01-0007-05
Effect of Acanthopanacis senticosi polysaccharides on oxygen free radical in hippocampal neures
impaired by H2O2
·7·中国医院药学杂志 2009年第 29卷第 1期 Chin H osp Pharm J , 2009 Jan , Vol 29 , No.01