全 文 ：收稿日期：２０１１－１１－１７
作者简介：陈明生（１９８２－），男，研究实习员，主要从事质量标准研究。
＊广西科学基金项目（２０１０ＧＸＮＳＦＢ０１３０８５）资助。
＊＊通讯作者：刘布鸣，男，研究员，主要从事中药和天然药化学成分与
质量标准研究。Ｅｍａｉｌ：ｌｉｕｂｕｍｉｎｇ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ。
广西科学Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　２０１２，１９（１）：７１～７３
高效液相色谱法测定互叶白千层中没食子酸的含量＊
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇａｌｉｃ　Ａｃｉｄ　ｉｎ　Ｍｅｌａｌｅｕｃａ　ａｌｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ
ｂｙ　ＨＰＬＣ
陈明生１，２，黄　艳１，２，林　霄１，２，柴　玲１，２，稂文旺１，２，李齐修１，２，刘布鸣１，２＊＊
ＣＨＥＮ　Ｍｉｎｇ－ｓｈｅｎｇ１，２，ＨＵＡＮＧ　Ｙａｎ１，２，ＬＩＮ　Ｘｉａｏ１，２，ＣＨＡＩ　Ｌｉｎｇ１，２，ＬＡＮＧ　Ｗｅｎ－
ｗａｎｇ１，２，ＬＩ　Ｑｉ－ｘｉｕ１，２，ＬＩＵ　Ｂｕ－ｍｉｎｇ１，２
（１．广西中药质量标准研究重点实验室，广西南宁　５３００２２；２．广西壮族自治区中医药研究院，广
西南宁　５３００２２）
（１．Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｑｕａｌｉｔｙ　Ｓｔａｒｄａｎｄｓ，Ｎａｎｎｉｎｇ，
Ｇｕａｎｇｘｉ，５３００２２，Ｃｈｉｎａ；２．Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｍｅｄｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉ－
ｅｎｃｅｓ，Ｎａｎｎｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｘｉ，５３００２２，Ｃｈｉｎａ）
摘要：为了建立用高效液相色谱测定互叶白千层中没食子酸含量的方法，为互叶白千层的质量标准制定提供方
法和依据，采用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）测定互叶白千层中没食子酸含量。色谱柱为Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ　Ｃ１８（４．６ｍｍ×
２５０ｍｍ，５μｍ），流动相为乙腈－０．２％磷酸（３∶９７），检测波长２７４ｎｍ，柱温为室温，流速１ｍｌ／ｍｉｎ。结果，没食子酸
在０．２０１６～１．２０９６#ｇ范围内呈良好线性关系（ｒ＝０．９９９１），平均回收率为１０１．８７％，ＲＳＤ 为１．７６％ （ｎ＝
９）。 本方法简便可行，重现性好，可以作为互叶白千层中没食子酸含量的测定方法。
关键词：没食子酸　高效液相色谱　含量测定　互叶白千层
中图法分类号：Ｏ６５７．７２　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００５－９１６４（２０１２）０１－００７１－０３
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ　ｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅ－
ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇａｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　Ｍｅｌａｌｅｕｃａａｌｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ，ｗｈｉｃｈ　ｐｒｏｖｉｄｅｄ　ｔｈｅ　ｂａｓｉｓ　ｆｏｒ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ
ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｏｆ　Ｍｅｌａｌｅｕｃａ　ａｌｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ．Ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｏｎ　Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ
Ｃ１８（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）ｃｏｌｕｍｎ　ｗｉｔｈ　ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－０．２％ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ　ａｃｉｄ（３∶９７）ａｓ　ｍｏｂｉｌｅ
ｐｈａｓｅ　ｗｉｔｈ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｏｆ　１．０ｍｌ／ｍｉｎ　ａｔ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　２７４ｎｍ．Ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍ－
ｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　ｓｅｔ　ａｔ　ｒｏｏｍ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ（ｎ＝９）ｏｆ　ｇａｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｗａｓ　１０１．
８７％ａｎｄ　ＲＳＤｗａｓ　１．７６％．Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄ，ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｒｅｌｉａｂｌｅ，ａｎｄ　ｉｓ　ｓｕｉｔａｂｌｅ
ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ｇａｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　Ｍｅｌａｌｅｕｃａａｌｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｇａｌｉｃ　ａｃｉｄ，ＨＰＬＣ，ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ，Ｍｅｌａｌｅｕｃａ　ａｌｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ（Ｍａｉｄｅｎ　ｅｔ　Ｂｅｔｅｈｅ）Ｃｈｅｅ１
　　互叶白千层系桃金娘科（Ｍｙｒｔａｃｅａｅ）白千层属
（Ｍｅｌａｌｅｕｃａ　Ｌ．） 互 叶 白 千 层 ［Ｍｅｌａｌｅｕｃａ
ａｌｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ（Ｍａｉｄｅｎ　ｅｔ　Ｂｅｔｅｈｅ）Ｃｈｅｅ１］，原产于澳大
利亚和新西兰的部分地区［１］。我国的两广、海南、福
建等地在上世纪９０年代引种并形成了一定的种植规
模，如广西的南宁、钦州等地均有种植加工基地，资源
十分丰富。互叶白干层枝叶挥发油俗称茶树油，油中
含多种生物活性成分［２，３］，对细菌、真菌和病毒具有
较强的杀灭和抑制作用，在香料、医药领域广泛应用；
此外还应用于日用卫生品、皮肤保健品、化妆品、药品
等行业［４～７］，具有较高的市场经济价值。除了挥发油
成分外，文献报道互叶白千层中含有没食子酸等有机
酸［８］，还分离得到了黄酮、甾体、长链脂肪烃、长链脂
肪酸以及三萜皂苷类等化合物［８～１０］。本研究采用高
效液相色谱法，对其中的没食子酸进行定量分析方法
研究，为药材质量的多指标控制及进一步开发利用，
提供基础化学数据，为白千层药材的质量标准研究奠
定基础和依据。
１　实验仪器与试药
　　仪器主要有威玛龙 ＵＣ－３２８２ＨＰＬＣ　Ｐｕｍｐ、ＵＣ－
１７广西科学　２０１２年２月　第１９卷第１期
DOI:10.13656/j.cnki.gxkx.2012.01.005
３２９２检测器高效液相色谱仪和威玛龙色谱工作站。
　　试药主要有没食子酸对照品、互叶白千层植物、
甲醇、乙腈、水、磷酸及其它试剂。没食子酸对照品
（供含量测定用，批号２００９２１８）由金测分析技术有限
公司提供，经 ＨＰＬＣ用面积归一化法测定，纯度大于
９８％。互叶白千层植物采自广西南宁、钦州，经广西
中医药研究院中药研究所赖茂祥研究员鉴定为桃金
娘 科 白 千 层 属 植 物 互 叶 白 千 层 （Ｍｅｌａｌｅｕｃａ
ａｌｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ（Ｍａｉｄｅｎ　ｅｔ　Ｂｅｔｅｈｅ）Ｃｈｅｅ１）。甲醇、乙腈
为色谱纯，水为超纯水，磷酸及其它试剂均为分析纯。
２　实验方法与结果
２．１　色谱条件
　　 色谱柱为 Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ（钻石）Ｃ１８（４．６ｍｍ×
２５０ｍｍ，５μｍ）。流动相为乙腈－０．２％磷酸（３∶９７）。
检测波长２７４ｎｍ，柱温为室温，进样量２０μｌ，理论塔
板数按没食子酸计算不低于４０００。
２．２　提取条件的选择
　　比较超声时间的结果显示，超声１ｈ的提取率显
著高于０．５ｈ，但是与超声１．５ｈ的提取率相当（见表
１），表明超声１ｈ基本可以将样品中的没食子酸基本
提取完全。为了缩短分析时间，本实验选择超声时间
为１ｈ。
表１　互叶白千层在不同超声处理时间的测定结果
Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍ．ａｌｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ （Ｍａｉｄｅｎ　ｅｔ　Ｂｅｔｅｈｅ）
Ｃｈｅｅ１ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｔｉｍｅ
时间Ｔｉｍｅ（ｈ） 含量Ｃｏｎｔｅｎｔｓ（μｇ／ｇ）
０．５　 ８０．５６
１．０　 ９０．８８
１．５　 ９１．２５
２．３　对照品溶液及供试品溶液的制备
　　精密称取没食子酸对照品适量，加１０％甲醇制
成３０．２３μｇ／ｍｌ的对照品溶液，色谱图如图１所示。
图１　没食子酸对照品溶液色谱
　　Ｆｉｇ．１　ＨＰＬＣ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ　ｏｆ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｓｕｂｔａｎｃｅ　ｏｆ
ｇａｌｉｃ　ａｃｉｄ
　　精密称取互叶白千层药材粉末１ｇ，置入具塞锥
形瓶中，精密加入１０％甲醇２５ｍｌ，超声１ｈ，放置冷却
至室温，过滤，滤液蒸至１ｍｌ，加１０％甲醇定容至５ｍｌ
容量瓶中，再用０．４５μｍ微孔滤膜过滤，取续滤液，即
得供试品溶液。色谱图如图２所示。
图２　没食子酸供试品溶液色谱
　　Ｆｉｇ．２　ＨＰＬＣ　ｃｈｒａｍａｔｏｇｒａｍｓ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅ　ｓｕｂ　ｔａｎｃｅ　ｏｆ
ｇａｌｉｃ　ａｃｉｄ
２．４　线性关系考察
　　称取没食子酸对照品溶液５０．３９ｍｇ，置入５０ｍｌ
容量瓶中，加１０％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得
１．００７８ｍｇ／ｍｌ标准品溶液，精密吸取０．１ｍｌ、０．２ｍｌ、
０．３ｍｌ、０．４ｍｌ、０．５ｍｌ、０．６ｍｌ标准品溶液至１０ｍｌ容
量瓶，加流动相稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件进
行测定。以对照品溶液进样量为横坐标，峰面积积分
值为纵坐标进行线性回归，得回归方程为 ｙ ＝
３１１６３９９．２３４７　ｘ－１０６０５．４６６７，ｒ＝０．９９９１。 结果表
明，对照品溶液在０．２０１６～１．２０９６μｇ范围呈良好的
线性关系。
２．５　精密度、稳定性和重现性实验
　　取同一供试品溶液连续重复进样６次，结果没食
子酸峰面积的ＲＳＤ 值为０．８５％。实验的精密度好。
　　取同一供试品溶液，每隔２ｈ进样，进行到１２ｈ考
察，结果没食子酸峰面积的ＲＳＤ 值为０．９５％。实验
的稳定性良好。
　　精密称取同一批次互叶白千层药材样品各６份，
按上述供试品溶液制备方法和色谱条件测定峰面积
并计算，结果没食子酸的平均含量为９０．８８μｇ／ｇ，
ＲＳＤ ＝１．５３％。实验的重现性良好。
２．６　加样回收率实验
　　精密称取已测知含量的药材样品（没食子酸平均
含量 为 ９０．８８μｇ／ｇ）０．５ｇ，共 ９ 份，精 密 加 入
１．００７８ｍｇ／ｍｌ的没食子酸，其中，３份分别加０．８ｍｌ，
３份分别加１．０ｍｌ，３份分别加１．２ｍｌ，按上述供试品
溶液制备方法和色谱条件测定峰面积并计算。结果
没食子酸的加样平均回收率为１０１．８６％，ＲＳＤ ＝
１．７６％。详见表２。
２．７　样品含量测定
　　分别取不同产地的互叶白千层，按上述供试品溶
液制备方法和色谱条件依次测定没食子酸含量，结果
（表３）显示，５个产地的互叶白千层样品中没食子酸
的最高含量为１１３．７μｇ／ｇ，最低含量为８０．９２μｇ／ｇ。
２７ Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．１９Ｎｏ．１，Ｆｅｂｒｕａｒｙ　２０１２
表２　没食子酸加样回收试验结果
Ｔａｂｌｅ　２　Ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｇａｌｉｃ　ａｃｉｄ
样品含量
Ｓａｍｐｌｅ
ｃｏｎｔｅｎｔ
（μｇ）
加入量
Ｄｏｓａｇｅ
（μｇ）
实测量
Ｍｅｓｓｕｒｅｄ
ｖａｌｕｅ
（μｇ）
回收率
Ｒｅｃｏｖｅｒｙ
（％）
平均回收率
Ａｖｅｒａｇｅ
ｒｅｃｏｖｅｒｙ
（％）
ＲＳＤ
（％）
４５．４６　 ３６．２８　 ８２．４２　 １０１．８７　 １０１．８６　 １．７６
４５．４５　 ３６．２８　 ８３．１７　 １０３．９７
４５．４７　 ３６．２８　 ８２．８８　 １０３．１１
４５．４８　 ４５．３５　 ９０．７１　 ９９．７４
４５．４９　 ４５．３５　 ９２．７２　 １０４．１５
４５．４９　 ４５．３５　 ９２．１１　 １０２．８０
４５．５６　 ５４．４２　 ９９．８４　 ９９．７４
４５．６９　 ５４．４２　 １０１．０３　 １０１．６９
４５．５０　 ５４．４２　 ９９．７６　 ９９．７１
表３　互叶白千层样品中没食子酸含量测定结果（ｎ＝５）
Ｔａｂｌｅ　３　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｇａｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｒｅｇｉｏｎ（ｎ＝５）
产地Ｒｅｇｉｏｎ
采集日期
Ｃｏｌｅｃｔｉｏｎ　ｄａｔｅ
含量
Ｃｏｎｔｅｎｔ（μｇ／ｇ）
广西南宁Ｎａｎｎｉｎｇ　Ｇｕａｎｇｘｉ　 ２０１１－０６　 １１３．７
广西南宁Ｎａｎｎｉｎｇ　Ｇｕａｎｇｘｉ　 ２０１１－０７　 ９６．１
广西南宁Ｎａｎｎｉｎｇ　Ｇｕａｎｇｘｉ　 ２０１１－０８　 １１１．２
广西南宁Ｎａｎｎｉｎｇ　Ｇｕａｎｇｘｉ　 ２０１１－０９　 １６３．６
广西钦州Ｑｉｎｚｈｏｕ　Ｇｕａｎｇｘｉ　 ２００９－０８　 ８０．９２
３　结论
　　本实验建立了互叶白千层药材中没食子酸含量
测定的 ＨＰＬＣ法。本次研究完善和增加了互叶白千
层药材的含量测定方法，为药材的多成分多指标质量
控制，提高药材质量标准及进一步开发利用提供了更
多的实验基础和化学数据。
参考文献：
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［８］　刘布鸣，董晓敏，黄艳，等．互叶白千层的化学成分研究
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［９］　Ｖｉｅｉｒａ　Ｔ　Ｒ，Ｂａｒｂｏｓａ　ＬＣＡ，Ｍａｌｔｈａ　Ｃ　Ｒ　Ａ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ
ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｆｒｏｍ　Ｍｅｌａｌｅｕｃａ　ａｌｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ （Ｍｙｒｔａｃｅａｅ）
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［１０］　林霄，董晓敏，黄艳，等．互叶白千层脂溶性成分的ＧＣ－
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１５４，１５６．
（责任编辑：邓大玉）　　
（上接第７０页Ｃｏｎｔｉｎｕｅ　ｆｒｏｍ　ｐａｇｅ　７０）
［２］　陈全斌，杨瑞云，义祥辉，等．ＲＰ－ＨＰＬＣ法测定罗汉果鲜
果及甜甙中总黄酮含量［Ｊ］．食品科学，２００３，２４（５）：１３３－
１３５．
［３］　陈全斌，义祥辉，余丽娟，等．不同生长周期的罗汉果鲜
果中甜甙Ｖ和总黄酮含量变化规律研究［Ｊ］．广西植物，
２００５，２５（３）：２７４－２７７．
［４］　陈全斌，杨建香，义祥辉，等．罗汉果叶中黄酮甙元的研
究［Ｊ］．广西植物，２００６，２６：２１７－２２０．
［５］　陈全斌，杨建香，程忠泉，等．罗汉果叶黄酮甙的分离与
结构鉴定［Ｊ］．广西科学，２００６，１３（１）：３５－３６，４２．
［６］　陈全斌，喻彬，沈种苏，等．不同生长周期罗汉果叶中总
黄酮含量变化规律研究［Ｊ］．广西科学，２００６，１３（４）：３００－
３０２．
［７］　陈全斌，杨建香，义祥辉，等．ＲＰ－ＨＰＬＣ法测定罗汉果叶
中总黄酮含量［Ｊ］．广西科学，２００５，１２（１）：４３－４５．
［８］　陈全斌，苏小建，沈种苏，等．罗汉果叶黄酮抗氧化能力
研究［Ｊ］．食品研究与开发，２００６，２７（１０）：１８９－１９１．
［９］　陈全斌，沈钟苏，韦正波，等．罗汉果黄酮活血化淤药理
作用研究［Ｊ］．广西科学，２００５，１２（４）：３１６－３１９．
［１０］　陈全斌，义祥辉．罗汉果叶黄酮及其制备工艺：中国，
ＺＬ２００３１０１１０８２７Ｘ［Ｐ］．２００７－０５－０２．
（责任编辑：陈小玲）　　
３７广西科学　２０１２年２月　第１９卷第１期