全 文 ：浙江农业学报 !#$!%&’()#(&$* +,*-’$.%*./’/ !!（!）：!! # !$，!%
柃木的组织培养与快速繁殖技术
徐孝方，梁训义!，许叶君，张银丽，吴根桃，甄益龙
（浙江丰岛股份有限公司 农业科技研发中心，浙江 新昌 &%!’&!）
收稿日期：!( ) ( ) *
基金项目：浙江省科技厅一般计划项目
作者简介：徐孝方（%($& )），男，浙江新昌人，硕士，经济师，在农 业方面主要从事柃木、杨桐和菊花、康乃馨等植物的种植、加工和 出口。 !通讯作者，梁训义，+,-./0：0/.12345 -./06 786 896 :1 摘; 要：为建立柃木的茎尖组培快繁体系，研究了 < !=>2?0! 不同灭菌时间、不同$,@A浓度对柃木芽诱导和增
殖的影响；以及不同的 B@A浓度、糖浓度和生根法，对柃木根诱导和生根的影响。结果表明：外植体用 < !=
>2?0! 表面灭菌 !’ -/1，并以 CDE为基本培养基，芽诱导、增殖时的 $,@A 浓度为 < ’ -2 F G，HAA 浓度为 < ’ -2 F G，IA浓度为 < ! -2 F G，蔗糖为 ! 2 F G；根诱导时 B@A浓度为 < ’ -2 F G和糖浓度为 & 2 F G以及两步生根法 等，是柃木组培和快速繁殖的适宜条件。应用此方法的柃木嫩枝的芽诱导萌发率可达 %=、芽增殖系数为 !< ’$ # J< ’K F次、生根率为 (K=、组培苗成活率为 (’=以上，并已应用于生产。
关键词：柃木；组织培养；快速繁殖；增殖
中图分类号：LK%&< % M !; ; ; ; ; ; ; 文献标识码：A; ; ; ; 文章编号：%J ) %’!J（!%）! ) !! ) ’
!##$% &$’($)% *+, )*-, -).-*/*(.+ .0 !#$% &%’()*+% !1$+2 NO N/.P,Q.12，GBAHI NR1,4/!，NO ST,9R1，U>AHI S/1,0/，CO IT1,V.P，U>+H S/,0P12 （0*/*$&, $.1 2*3*)456*.# 7*.#*& 84& !%&’()#(&$) 9’*.* $.1 :*,.4)4%;，+,*-’$.% :4;4/,’6$74<，=#1<，>’.,$.%
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ZT T3[PXVT\ VP ^.[.16 B1 PX\TX VP TYV.Z0/Y7 . X.[/\ [XP[.2.V/P1 Y4YVT- P1 Y7PPV V/[ :R0VRXT PQ C< -$54.’$，V7T TQQT:VY PQ
\/QQTXT1V YVTX/0/8.V/P1 V/-T PQ >2?0! P1 [P00RVT\ X.VT PQ T3[0.1VY，V7T TQQT:VY PQ \/QQTXT1V $,@A :P1:T1VX.V/P1Y P1 Y7PPV YRZ:R0VRXT .1\ -R0V/[0/:.V/P1 :R0VRXT，V7T TQQT:VY PQ \/QQTXT1V B@A :P1:T1VX.V/P1Y，YR:XPYT :P1:T1VX.V/P1Y .1\ XPPV/12 -TV7P\Y P1 XPPV/12 X.VT _TXT YVR\/T\6 W7T XTYR0VY Y7P_T\ V7.V V7T .[[XP[X/.VT :P1\/V/P1Y QPX V/YYRT :R0VRXT .1\ X.[/[XP[.2.V/P1 PQ C< -$54.’$_TXT .Y QP00P_Y：!’ -/1 Y7PPV YRXQ.:T,YVTX/0/8.V/P1 _/V7 < != >2?0!，CDE Z.Y.0 -T\/R- _/V7 < ’ -2·G )%$,@A，< ’ -2·G )% HAA，< ! -2·G )% IA，! 2·G )% YR:XPYT /1 [XP0/QTX.V/P1 :R0VRXT，< ’ -2·G )%
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[0/:.V/P1 :PTQQ/:/T1V，XPPV/12 X.VT .1\ VX.1Y[0.1V YRX‘/‘.0 X.VT PQ V/YYRT :R0VRXT YTT\0/12Y :PR0\ XT.:7 %=，!< ’$) J< K’ [TX V/-T，(K= .1\ a (’= XTY[T:V/‘T046 4%5 6.),#：C(&;$ -$54.’$ W7R1Z；V/YYRT :R0VRXT；X.[/\ [XP[.2.V/P1；[XP0/QTX.V/P1
; ; 柃木（C(&;$-$54.’$W7R1Z）为山茶科柃木 属植物的一种，又称海岸柃，野生常绿灌木或小 乔木。柃木属约 %& 种，分布于亚洲的热带和亚 热带地区及西南太平洋各岛屿；我国的柃木属已 发现有 K% 种，%& 变种，J 变型，主要分布于长江 以南各省区，个别种类可达秦岭南坡，多数分布 于广东、广西及云南等省区［%］；浙江省主要分布 于舟山群岛、台州、宁波、温州等沿海地区。在日 本，作为园艺植物的柃木属仅列出 & 种 % 变种， 即 C(&;$ *6$&%’.$#$E.]/1.（滨柃木）、C< -$54.’$W7R1Z（柃木）、C< -$54.’$‘.X6 6’&45,;))$ @0R-T
（小叶柃木变种）和 C< ;$D(/,’6*./’/ E.]/1P（屋久 岛柃木）［!］。柃木的枝叶加工品是日本传统的供 神祭祖吉祥物，并被称为“神木”，我国对日出口 的市场容量大且稳定。为此，我国的野生柃木资 源被大量开发采摘，随之产生的负面效应是柃木 产品数量和质量急剧下降。鉴于柃木天然分布 范围狭窄，野生资源有限，从实施可持续发展战 略出发，浙江丰岛股份公司早在 !! 年以前就 开始实施较大面积营造柃木人工经济林计划，但 由于种子繁殖时，自然杂交导致变异大，故考虑 通过优良选株采用扦插和茎尖组织培养方法进 行无性系选育的研究和应用。经过 !#—!$
年对外观形态优良植株的选择，采集新抽嫩枝为
外植体，用茎尖组培的方法，成功地培育出生根
植株，并将繁殖的优良单株的组培苗种植于选种
圃。此时国内外仍未见有文献报道此项研究。
虽然随后有张椿芳［#］于 !% 年报道用种子萌发
植株作为外植体进行组培，获得了生根苗，但未
种植成活；而他用野外带芽茎段进行试验，大多
因消毒不彻底受污染而丢弃，即使消毒过关，仍
有 #$&苗株发生褐变，余下 ’&左右也逐渐枯 黄，只有 ( 瓶（占接种总数 (&）出现愈伤，但一直 未见有分化，未能获得无菌材料［#］。迄今为止， 国内外均未见柃木组织培养与快速繁殖成功的 报导。为此，本文就柃木组培快繁研究过程中， 外植体选择、不同灭菌时间、不同 )*+, 浓度对柃 木芽诱导和增殖的影响，以及不同 -+, 浓度和糖 浓度以及不同生根法对柃木根诱导和根生长的 影响等方面进行了研究。 (. 材料与方法 (/ (. 材料 本试验所用的外植体采用经选择的优良柃 木母株 0 号的嫩茎。选取一年生嫩茎为外植体， 采回后将材料放在流水中冲洗，用毛刷小心刷去 茎干、叶腋处的附着物，剪去叶片（先保留叶柄并 保留部分叶片，待灭菌后再剪去，以减轻灭菌对 叶腋处的伤害）。再放在烧杯中用流水冲洗 ! 1， 然后用蒸馏水冲洗 ! 次，再置于蒸馏水 ! 23， 加 ! 23洗洁精和$ 滴吐温的玻璃瓶中，经摇床
震荡 ( 1，取出后用蒸馏水冲洗 # 次后待用。将
供芽诱导的外植体在超净工作台上用 %&酒精
浸泡 # 4，除灭菌时间对柃木芽诱导的影响试验
外，其余试验均采用 5 !& 6789! 浸泡灭菌 !$2:;，然后用无菌水冲洗$ < ) 次，用消毒滤纸吸
干材料表面的水分，然后切成 ( =2 左右的小段，
每段有一个腋芽供诱导培养。
(/ !. 方法
(/ !/ (. >?@培养基
>?@ 培 养 基 配 方：A6’AB# ’ 27 C 3，
8D（AB#）!·’6!B $)) 27 C 3，E!FB’ GG 27 C 3， 8D89!·6!B G) 27 C 3，E6!?B’ (% 27 C 3，6#+B# )5 ! 27 C 3，AD!@HB’·!6!B 5 !$ 27 C 3，@7FB’·
%6!B #% 27 C 3，@;FB’·6!B !!5 # 27 C 3，I;FB’·
%6!B 05 ) 27 C 3，8JFB’·$6!B 5 !$ 27 C 3，KLFB’·
%6!B !%5 0 27 C 3，AD!MNO, #%5 # 27 C 3，维生素
+( (5 27 C 3，维生素 +) 5 $27 C 3，烟酸 5$ 27 C
3，甘氨酸 !5 27 C 3，肌醇 ( 27 C 3，蔗糖 ! 7 C
3，琼脂 ) 7 C 3。
(/ !/ !. 外植体不同表面灭菌时间对柃木芽诱导
的影响
外植体采用 5 !& 6789! 进行表面灭菌，灭
菌时间按 ($，!，!$，# 2:; ’ 个梯度，灭菌后接
种在 >?@ P)*+, (5 27 C 3 P A,, 5 $27 C 3 P Q, 5 ! 27 C 3 P !5 &蔗糖培养基上，琼脂浓度 5$&，R6 $5 )。培养室温度（!) S !）T，光照时 间 (’ 1 C U，光照强度 ’ < ) !2H9 C（2!·4）。观察 不同灭菌时间下外植体的污染率以及对柃木芽 诱导的影响。 (/ !/ #. 不同 )*+, 浓度对柃木芽诱导及增殖的 影响 采用>?@ P A,, 5$ 27 C 3 P Q, 5 ! 27 C 3
为基本培养基，添加 )*+, 5 (，5 $，(5 ，(5$，
!5 ，#5 27 C 3 ) 个浓度梯度，# 次重复，探讨不
同 )*+,浓度对柃木芽诱导及增殖的影响。培养
条件同 (5 !5 ! 节。
(/ !/ ’. 不同 -+,浓度对柃木根诱导的影响
以 >?@为基本培养基，添加 5 $和 5 0 27 C 3 ! 个浓度梯度的 -+,，设 # 次重复，观察不同 -+,浓度对柃木生根时间、根系生长情况及生根 率的影响。培养条件同 (5 !5 ! 节。 (/ !/$. 不同生根方法对柃木生根的影响
试验采用两步生根法和一步生根法 ! 种不
同的方法，设 # 次重复，观察其对柃木生根时间
·#!·徐孝方等：柃木的组织培养与快速繁殖技术
及生根率的影响。两步生根法即植株在含有激
素的生根培养基上生长 ! #后，再转接到无激素
的过渡培养基中生长；一步生根法是指根诱导和
生根阶段的植株，一直生长在含有激素的培养基
中。培养条件同 !$%$ % 节。
!& %& ’( 不同糖浓度对柃木生根的影响
两步生根法的生根阶段，在无激素培养基中
添加 %)或 *)的蔗糖，观察不同蔗糖浓度对柃
木生根率的影响。培养条件同 !$%$ % 节。
!& %& +( 生根、炼苗与移栽
将生长健壮、具 * , - 片叶子的幼嫩分枝从
基部切下转接到 ./0 1 234 5$67 8 9培养基中 进行根诱导。一般在接种后 # 左右形成根原 基，!5 #左右开始生根，此时再将其转接到不含 激素的 ./0培养基中，%5 #左右形成发达根系， 每株生根 * , - 条，根长 !$ , %$:6，生根率达 ;<)。生根阶段培养约 *5 #、苗高 * :6 左右时， 移至种植大棚或温室的自然条件下，炼苗 % , * #，再松开瓶口炼苗 % , * #即可进行移栽。 移栽苗床设在温室或大棚内，采用熟化的疏 松红壤作苗床基质，移栽时先洗净苗根部的培养 基，然后将组培苗种植在疏松的红壤基质中并立 即浇水。移栽后覆盖塑料薄膜以控温保湿 % 个 月左右，控制温度在 %5 , %=>，并适度遮荫，在夏 季高温季节，必需覆盖遮阳网遮荫。移栽成活 后，结合浇水，加很少量复合肥（5$ %) , 5$)）， 以促进更快生长。 %( 结果与分析 %& !( 不同 ?7>@% 灭菌时间对外植体污染率和芽 诱导的影响 随着 5$ %) ?7>@% 灭菌时间的延长，外植体
的污染率逐渐下降（表 !）。!，%5 6AB 处理的污
染率分别为 ’$5)和 ’’$ 5)，当灭菌时间延长到
*5 6AB时，污染率下降到 -%$)，灭菌效果较好。 但在后期的生长发育过程中我们发现，消毒时间 为 *5 6AB 时，虽然对外植体腋芽的萌发没有影 响，但萌发后生长明显减慢；灭菌时间为 % 6AB 时，污染率为 ’$ 5)，较灭菌时间为 *5 6AB 的污
染率要高，但腋芽萌发和后期的生长发育均较正
表 ! 5$%) ?7>@% 不同灭菌时间对外植体污染率的影响 #$%&’ ! ( CDDE:FG HD #ADDEIEBF GFEIA@AJKFAHB FA6E HD 5$%) ?7>@% HB ELM@KBFG MH@@NFE# IKFE 灭菌时间 8 6AB 接种的外植体数 污染外植体数 污染率 8 ) ! *- %% ’$ 5
%5 *< % ’’$5 % -5 %* ’$ 5
*5 -5 !+ -%$常。因此认为，采用 5$ %) ?7>@% 处理 % 6AB，是
柃木外植体较为理想的表面灭菌时间。
%& %( 不同 ’O34浓度对柃木芽诱导及增殖的影响
’O34浓度影响柃木腋芽诱导的萌发率和增
殖系数。从表 % 可以看出，本试验所采用的 ’ 个
’O34浓度梯度中，浓度为 5$!，5$ ，!$5 67 8 9时， 腋芽的萌发率均达到了 !55)，但几乎每个外植 体只诱导出一个芽，而 !$ 5 67 8 9 的处理，出现有
一个外植体诱导萌发 * 个芽。随着 ’O34 浓度继
续升高，腋芽诱导的萌发率逐渐下降，当浓度提
高到 *$5 67 8 9，萌发率下降到 +5)，较 5$ ! , !$5 67 8 9的 * 个浓度处理下降了 *5)。当 ’O34 浓 度为 5$ ! , !$5 67 8 9 时，一个月以后，芽的生长 高度达到 !$ :6以上，且叶片大而浓绿，苗的长
势良好；当 ’O34浓度为 !$, *$ 5 67 8 9 时，一个
月后芽的生长高度仅为 !$% :6 左右，苗较小，且 叶片小而皱褶，对日后的增殖及生根不利。因此 认为，芽诱导时 ’O34 浓度 5$ ! , !$5 67 8 9 均可 采用，但从后期的生长发育中我们发现，5$ 67 8
9浓度的 ’O34更有利于生根。
从表 * 可以看出，在 ’O34 浓度 5$! , %$ 5
67 8 9范围内，随着’O34浓度的提高，柃木腋芽
表 (( 不同 ’O34浓度对柃木腋芽诱导的影响
#$%&’ ( ( CDDE:F HD #ADDEIEBF ’O34 :HB:EBFIKFAHBG HB GPHHF GNQ:N@FNIE HD ! #$%&’()$处理浓度 8 （67·9 R!） 接种外植 体数 诱导成功外 植体个数 诱导成功率 8 ) 5$ ! %* %* !55$55 K4 5$ %+ %+ !55$55 K4 !$ 5 %5 %5 !55$55 K4 !$ %% %5 ;5$;5 KQ43 %$ 5 !; !+ <;$5 Q43 *$ 5 !+ !% +5$!5 :3 注：同一列不同行数据后没有相同小写字母代表差异显著（* S 5$ 5）；没有相同大写字母代表差异极显著（* S 5$5!）。下同 ·-5%· 浙江农业学报( 第 %% 卷( 第 % 期（%5!5 年 * 月） 的增殖系数亦随之提高，说明高浓度 !#$ 对柃
木的腋芽增殖有促进作用。但在观察中发现：当
!#$浓度为 %& ’ 和 (& ’ )* + , 时，萌发的叶子较 ’& - )* + ,时明显要小，且玻璃苗数量明显增多。 而较 %& ’ 和 (& ’ )* + ,而言，!#$浓度为 ’& - )* +
,时，植株的长势好，个体大，增殖时间短，且对后
期的生根较为有利（图 %$）。 表 ! 不同 !#$浓度对柃木腋芽增殖的影响
#$%&’ !. /00123 40 560017183 !#$ 2482183793648: 48 ;74<60179
3648 40 ! #$%&’()$
!#$浓度 +（)*·, =%）接种外植体数 增殖后苗数量 增殖系数 ’& % (’ (- %& (- 9$
’& - -- %(> (& -! ?#
%& ’ -- %>- @& @! 2A
(& ’ (’ BC D& >- 5E
(F @. 不同 G#$浓度对柃木生根的影响 表 D 表明，( 个 G#$浓度对根系出现的时间
影响不大，接种后经 - 5左右形成根原基，%’ 5左
右开始生根，开始生根时间较短，愈伤小，根系生
长正常；但 G#$浓度影响生根率，随着 G#$ 浓度
的升高，生根率从 B@& @@H下降到 >%& D>H，可见
较低的 G#$浓度有利于柃木生根（表 D）。 表 ( 不同 G#$浓度对柃木生根的影响
#$%&’ ( . /00123 40 560017183 G#$ 2482183793648: 48 744368*
7931 40 ! #$%&’()$
G#$浓度 +（)*·, =%） 供试株数 生根株数 生根率 + H ’& - @’ (> B@& @@ ’& > -D DD >%& D> (F D. 不同生根法对柃木生根的影响 一步与两步生根法，在生根率上存在明显差 异（表 -）：一步生根法的生根率仅为 !!& !CH，而 两步生根法的生根率可达 B@& @@H，提高 (’H以 上，且生根苗移栽到土壤中后恢复生长快。由此 表 ) 不同生根法对柃木生根率的影响 #$%&’ ). /00123 40 560017183 744368* )13I45: 48 744368* 7931 40
! #$%&’()$
生根方法 接种株数 生根株数 生根率 + H
两步生根法 @’ (> B@& @@
一步生根法 %! (D !!& !C
可以看出，柃木适合采用两步生根法，经过含有
激素培养基中诱导生根阶段，再转到无激素培养
基中进行生根培养，能提高生根率和组培苗的移
栽成活率。
(F -. 生根阶段培养基糖含量对柃木生根的影响
在采用的 ( 个糖浓度梯度中，表现出随着蔗
糖含量从 (H提高到 @H，生根率从 >!& !CH提高
到 B%& !CH（表 !）。因此，在柃木的生根阶段，适
当提高蔗糖浓度对柃木生根有一定的促进作用
（图 %#）。
表 * 生根阶段培养基糖含量对柃木生根的影响
#$%&’ *. /00123 40 560017183 :J274:1 2482183793648: 48 744368* 7931 40 ! #$%&’()$糖浓度 +（*·, =%） 接种数 生根数 生根率 + H (’ !’ -( >!& !C @’ D> DD B%& !C 图 +. 柃木的生根培养（$）和增殖培养（#）
,-./ + K44368* 985 ;74<601793648 2J<3J71 40 ! #$%&’()$
(F !. 组培苗的移栽成活率
通过所采用本研究的炼苗和移栽技术，组培
苗的成活率可达 B-H以上（图 (）。
·-’(·徐孝方等：柃木的组织培养与快速繁殖技术
图 !! 柃木组培苗移栽后的苗床生长情况
#$% ! #$%&’ $( &)**+, -+.&+#, *,,/.)01*$( ! #$%&’()$ )0 (),./ 2(&,# *3.20&)01
4! 讨论
目前国内对柃木属植物的研究，主要集中在
经典植物分类学以及柃木属植物作为优质蜜源
植物和药用植物的研究上［5 6 7］，而有关繁殖、栽
培及抗性生理的研究较少。国内柃木主要采用
种子繁殖和扦插繁殖的方法。而种子播种育苗
往往存在苗木的粗细、高矮差别大，生长相对缓
慢，而且一年只能繁殖一次，远不能弥补资源快
速扩繁需要的缺点［4］。采用茎尖组织培养，材料
来源单纯，无性系的遗传背景一致，生产快、周期
短、重复性强，生产不受季节限制［8，9］。尤其是选
择优良柃木母株，采用组培快繁的方法，可以迅
速扩大优株群体，弥补其他繁殖方式的不足之
处，这一方法现已开始应用于大田生产。
从 :;;4 至 :;;< 年先后完成了从柃木外植体
芽诱导到组培苗生根及移栽的整个过程，建立了
柃木的组培快繁体系。本试验表明，柃木外植体
表面灭菌用 ;= :> ?1@.: 处理 :< A)0左右较为理
想，在适宜的培养基和培养条件下柃木芽诱导的
萌发率可达 B;;>，增殖系数达 5= <9，生根率达
C9>，且移栽成活率可达 C<>以上。为柃木的组
织培养和规模化生产提供了可靠的基础资料。
参考文献：
［B］! 林来官D中国植物志D第 <; 卷第 B 册，山茶科柃木属［E］D
北京：科学出版社，BC9C= 8; 6 B49D
［:］! 井上赖数，石井林宁D 最新园艺大辞典第 5 卷（FGHGI），
!*+,$ -.*’/［E］D 京都：诚文堂新光社，昭和 <9 年（BC94
年）：::4 6 ::5D
［4］! 张椿芳D三种柃木属植物组织培养技术研究［F］D南京：南
京林业大学，:;;8D
［5］! 林盛秋D蜜源植物［E］D北京：中国林业出版社，BC99D
［<］! 潘健D 柃属植物资源及繁殖技术的研究［F］D南京：南京林
业大学，:;;5D
［7］! 应叶青，吴家胜，钱莲芳，等D杨桐、铃木扦插育苗技术［ J］D
林业实用技术，:;;<，8：:; 6 :BD
［8］! 谭文澄，戴策刚D 观赏植物组织培养技术［E］D 北京：中国
林业出版社，BCCBD
［9］! 陈正华D木本植物组织培养及其应用［E］D北京：高等教育
出版社，BC97：5<7 6 57（责任编辑! 陈华平）
·7;:· 浙江农业学报! 第 :: 卷! 第 : 期（:;B; 年 4 月）