全 文 ：　第 20卷 第 12期
2009年 12月 　　　　　　　　
贵州教育学院学报(自然科学)
JournalofGuizhouEducationInstitute(NaturalScience)
Vol.20.No.12
Dec.2009
反相高效液相色谱法测定铁包金中槲皮素的含量＊
张荣祥 1 ,阮婧华 2 ,王道平 3
(1.贵州师范学院 ,贵州 贵阳　550018;2.3.贵州省中国科学院
天然产物化学重点实验室 ,贵州 贵阳　550002)
摘要:建立测定铁包金中槲皮素含量的方法;考察铁包金中槲皮素提取条件的影响。采用 RP-HPLC对
槲皮素进行定量测定 , 色谱柱为 C18柱 ,流动相为甲醇 -0.2%磷酸溶液(45:55), 检测波长 256nm;结果显示
此方法线性关系良好 , 平均加样回收率为 98.6%(n=6)。因此本方法分离良好 ,结果准确可靠。
关键词:槲皮素;铁包金;反相高效液相色谱法
中图分类号:O614.81　　文献标识码:A　　文章编号:1002-6983(2009)12-0004-03
ContentdeterminationoftheQuercetinin
berchemialineatabyRP-HPLC
ZHANGRong-xiang1 , RUANJing-hua2 , WANGDao-ping3
(1.GuizhouNormalCollege, Guiyang, Guizhou, 550018China;2.3.KeyLaboratoryofChemistryforNatural
Product, ChineseAcademyofScience, Guiyang, Guizhou, 550002China)
Abstract:TheRP-HPLCmethodforthedeterminationofthequercetinintheberchemialineateisestablished
andthemethodforextractingandhydrolyzingtheherbisstudied.QuercetinisseparatedcompletelyonaHypersil
C18 column(4.6mm×250mm, 5 m), usingamixtureofmethanol-0.4% phosphoricacid(45:55)asamobil
phase.Theresultsshowthatthecalibrationcurveislinearandtheaveragerecoveryis98.6% (n=6).Themethod
isprovedtobequickandsimplewithgoodrepeatition, andcanbeusedforqualitycontrol.
Keywords:Quercetin;berchemialineata;RP-HPLC
　 0　引言
铁包金系苗族常用药材 ,为鼠李科勾儿茶属
植物光枝勾儿茶 (Berchemiapolyphylavar.leio-
clada)干燥全株。全年可采 ,多以根 、茎 、叶入药 ,
具有化淤血 ,祛风湿 ,消肿毒的功能。用于肺痨久
咳 ,跌打损伤 [ 1] 。我们在以前曾报道过从光枝勾
儿茶中分离出三萜 、蒽醌类 、黄酮类化合物[ 2, 3] 。
其中 ,以槲皮素为主要成分。为了有效地控制铁
包金的质量 ,本文首次采用高效液相色谱法 ,以槲
皮素为指标 ,建立了铁包金的含量测定方法。实
验结果表明 ,该方法准确灵敏 ,分离度好 ,精密度
和重现性俱佳 ,并且快速 、简便 ,所选指标槲皮素
能够准确的反映铁包金的内在质量 ,可作为铁包
金质量标准的定量方法。
　 1　仪器与试药
　　1.1　主要仪器
Agilent1100 series高效液相色谱仪(真空脱
气机 、四元泵 、自动进样器 、柱温箱 、紫外检测器)
及 Chemstation色谱工作站;AG25 电子天平
(METTLETOLEDO);KQ-250型超声波清洗器
—4—
＊收稿日期:2009-06-10
基金项目:贵州省科学基金(黔科合字(20043061);“西部之光 ”人才培养计划项目
作者简介:张荣祥(1980-),男 ,硕士研究生 ,贵州师范学院讲师 ,主要从事天然产物研究开发。
DOI :10.13391/j.cnki.issn.1674-7798.2009.12.002
(昆山市超声仪器有限公司);电子恒温水浴锅
(上海金桥科析仪厂)。
　　1.2　试药
甲醇 、乙腈均为色谱纯(美国天地公司),水
为新鲜乐百氏纯净水 ,过 0.45 μm滤膜 ,磷酸为
AR级(上海化学试剂有限公司),其他试剂均为
分析纯;槲皮素对照品购自中国药品生物制品检
定所(批号为 081 -9003),铁包金药材采自贵阳
高坡 ,经贵阳中医学院陈德媛教授鉴定为鼠李科
勾儿茶属植物光枝勾儿茶 (Berchemiapolyphyla
var.leioclada)。
　 2　方法与结果
　　2.1　色谱条件
色谱柱为 HypersilC18柱(4.6mm×250mm,
5μm);流动相为甲醇 B-0.2%磷酸(45∶55);检
测波长 256nm;柱温 30℃;流速为 1ml/min;在此
条件下槲皮素峰与杂质峰能得到较好分离(见
图 1)。
图 1　高效液相色谱图
　　2.2　对照品溶液制备
精密称取槲皮素对照品适量 ,置 50 mL量瓶
中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,作为对照品溶液 。
　　2.3　线性关系考察
精密吸取槲皮素对照品储备液(0.2245mg/mL)
0.5μL、1 μL、4 μL、8μL、12 μL进样 ,以峰面积
为横坐标 Y,对照品量为纵坐标作图 X,绘制标准
曲线 , 得回归方程 Y=4891.4X+1.769, r=
0.9998.结果表明槲皮素在 0.1123 ～ 2.694 μg范
围内与峰面积有良好的线性关系。
　　2.4　供试品溶液制备
取本品细粉约 0.2 g, 精密称定 , 加甲醇
-25%盐酸(4:1)的混合溶液 25mL,超声溶解约
5 min,置水浴中加热回流 30 min,迅速冷却至室
温 ,转移至 50mL量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,摇
匀 ,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过 ,取滤液 ,即得。
　　2.5　精密度试验
取供试品溶液 ,按以上色谱条件重复进样 6
次 ,测定峰面积 ,结果 RSD为 0.2%(n=6)。
　　2.6　稳定性试验
取供试品溶液 ,按以上色谱条每隔一定时间
进样 1次 ,测定峰面积 ,结果 RSD1.2%,显示供试
品溶液至少在 48 h内稳定。
　　2.7　重复性试验
精密称取样品 6份 ,按 2.4项下方法提取 ,测
定峰面积并计算槲皮素含量(mg/g),结果槲皮素
的平均含量为 5.165mg/g, RSD=1.7%(n=6)。
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　　2.8　回收率试验
精密称取已知含量样品 6份 ,精密加入槲皮
素对照品适量 ,按 2.4项下方法提取 ,测得峰面积
并计算含量。结果显示 ,平均回收率为 98.6%,
RSD=2.4%(n=6)。
　 3　讨论
槲皮素为黄酮类化合物 ,在银杏 、山楂等中均
有分布 ,具心血管方面的生理活性 。也是铁包金
中的主要有效成分 ,因此测定其含量可较好地控
制产品质量 ,保证用药的安全有效。
　　3.1　色谱条件的选择
从实验得知 ,山楂叶提取物酸水解后能得到
较好的色谱图 ,槲皮素峰与杂质峰能得到较好分
离 [ 4] 。本实验曾采用甲醇 -0.1%甲酸(50:50)
为流动相 ,但所得色谱图中槲皮素与杂质峰不能
很好地分离 ,后来采用甲醇 -0.2%磷酸(45:55)
为流动相后 ,磷酸的比例增加 ,由于磷酸可以抑制
黄酮甙元的酚羟基的电离 ,改善了分离效果 ,防止
拖尾现象 ,因此所得色谱图槲皮素峰与杂质峰能
得到较好分离。
　　3.2　提取方法的考察
经初试发现 ,铁包金中的槲皮素存在两种形
式:游离态和结合态。本试验对提取溶剂 、提取方
法进行了考察。采用甲醇 、50%甲醇 、甲醇 -盐酸
(4:1)结合超声 、索氏 、回流提取方法对槲皮素的
含量进行了测定。试验结果表明 ,采用甲醇 -盐
酸(4:1)回流提取 30 min的方法槲皮素提取较完
全 ,且色谱峰形良好。因此 ,我们拟采用以上酸水
解法测定铁包金中甙元槲皮素 。
　　3.3　不同部位含量的考察
结果表明该药材叶中槲皮素的含量高于茎中
的含量;茎部位水解前后槲皮素的含量变化较小 ,
叶部位水解前后槲皮素的含量变化明显 ,表明叶
部位成分多以槲皮素为甙元。考虑到用药的安全
性 ,我们建议铁包金的叶和茎应该分别入药。
参考文献:
[ 1]包骏 , 冉懋雄.贵州苗族医药研究与开发 [ M] .贵
阳:贵州科技出版社 , 2002:145.
[ 2]杨娟 , 段文峰 , 彭英 , 等.光枝勾儿茶化学成分研究
(I)[ J] .中草药 , 2006, 37(6):836-837.
[ 3]杨娟 , 潘琪 , 魏东法 , 等.光枝勾儿茶化学成分研究
(Ⅱ)[ J] .中国药学杂志 , 2006, 41 (4):255-257.
[ 4]陈发奎.常用中草药有效成分含量测定 [ M] .北京:人
民卫生出版社 , 1997.
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