全 文 ：反相高效液相色谱法测定白蔹药材中大黄素的含量
陈爱军1，2，刘运美2，曾 雷1，蔡凤桃2
(1. 湖南环境生物职业技术学院，湖南 衡阳，421005;
2. 南华大学药物药理研究所，湖南 衡阳，421005)
［摘要］ 目的:采用高效液相色谱法建立白蔹药材中大黄素的测定方法。方法:采用 Wondasil C18(150mm × 4. 6mm，5μm)
色谱柱，流动相为:甲醇 －0. 1% 磷酸溶液(85∶15)溶液，检测波长为 254nm，流速为 1. 0mL/min。结果:大黄素进样量在 0. 005 ～
0. 0612mg /mL范围内线性关系良好，平均回收率为 98. 68%，ＲSD为 0. 54。结论:本方法可作为白蔹药材的质量控制方法。
［关键词］ ＲP － HPLC法;白蔹;大黄素;含量测定
［中图分类号］Ｒ282. 710. 3 ［文献标识码］A ［文章编号］1003 － 7705(2014)12 － 0147 － 02
基金项目:湖南省教育厅高校科学研究项目(编号:14C0390)
第一作者:陈爱军，女，讲师，研究方向:中药化学及天然药物活性成分研究及质量控制的教学与科研工作，E － mail:
20181995@ qq. com
Determination of emodin content in Ｒadix Ampelopsis by
reversed － phase high － performance liquid chromatography
CHEN Ai － jun1，2，LIU Yun － mei2，ZENG Lei1，CAI Feng － tao2
(1. Hunan Environment － Biological Polytechnic，Hengyang 421005，Hunan，China;
2. Institute of Pharmacy and Pharmacology，Nanhua University，Hengyang 421005，Hunan，China)
Abstract:Objective:To establish a method for determining the content of emodin in Ｒadix Ampelopsis by high
－ performance liquid chromatography(HPLC). Methods:HPLC was conducted on a Wondasil C18 column(150mm
×4. 6mm，5μm)with a mobile phase of methanol － 0. 1% phosphoric acid(85 ∶ 15)at a detection wavelength of
254nm and a flow rate of 1. 0mL /min. Ｒesults:Emodin showed a good linear relationship between the sample size
and peak area in the range of 0. 005 － 0. 0612mg /ml. The average recovery rate was 98. 68%，and the relative
standard deviation was 0. 54. Conclusion:The HPLC method can be used for the quality control of the medical mate-
rial of Ｒadix Ampelopsis.
Key words:reversed － phase high － performance liquid chromatography;Ｒadix Ampelopsis;emodin;determi-
nation
白蔹［Ampelopsis japonica(Thunb. )Makino］首载于《神
农本草经》，具有清热解毒、散结止痛、生肌敛疮的功效［1］，
是牛黄清心丸、万京红、痹克颗粒等多种中药成方制剂的重
要组方。白蔹成分中含有大黄素等蒽醌类活性成分［2］，鉴
于白蔹生药材只有定性分析，无明确定量标准的现状。本
文拟以 HPLC法测定大黄素含量高低来控制药材质量，为白
蔹开发利用提供依据。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 岛津 LC － 10ATvp plus 高效液相色谱仪;KQ －
250B 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
1. 2 药材与试剂 大黄素对照品(中国药品生物制品检定
研究院，批号:110756 － 200110);药材购自于衡阳市国仁堂
大药房，经南华大学药物药理研究所生药组老师鉴定为白
蔹。甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱:Wondasil C18(4. 6mm × 150mm，5μm
)，流动相:甲醇 － 0. 1%磷酸溶液(85∶15)，检测波长:254nm，
流速:1. 0mL/min，在上述选定条件下，大黄素峰色谱与样品
中其他组分色谱峰可达基线分离，且与其他相邻色谱峰分离
度大于 1. 5，按大黄素峰计算，理论板数在 3000 以上，对照品
与供试品色谱图见图 1。
2. 2 供试品溶液的制备 取白蔹药材粗粉 10g，精密称定，
置锥形瓶中，加入甲醇 100mL 超声提取 2h，冷却，称重，用甲
醇补足减失的重量。高速离心(8000r /min，15min )，精密量
取上清液 40mL，置圆底烧瓶中，溶液用旋转蒸发仪减压浓缩
挥去乙醇，加 2. 5mol /L硫酸溶液 40mL，超声处理 30min。再
加三氯甲烷 60mL 回流提取 60min，冷却，置分液漏斗分取
三氯甲烷层，水层再用三氯甲烷萃取 3 次，每次 40mL，合并
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第 30 卷第 12 期
2014 年 12 月 HUNAN JOUＲNAL OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol. 30 N0. 12
Dec 2014
A. 对照品 B. 供试品
图 1 HPLC图
三氯甲烷萃取液，置圆底烧瓶中，溶液用旋转蒸发仪减压浓
缩，挥去氯仿。残渣精密加甲醇 10mL 摇匀，滤过，取续滤液
作为供试品溶液，备用。
2. 3 对照品溶液的制备 称取大黄素对照品 5. 1mg，置于
50mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得浓度为
0. 1020mg /mL 的大黄素对照品贮备液，备用。
2. 4 线性关系考察 精密吸取浓度为0. 1020mg /mL的大黄
素对照品溶液 0. 5、1、2、4、6mL，分别置 10mL 量瓶中，加甲
醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取 10μL进样，测定其峰面积积
分值，以对照品浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘
制标准曲线，其回归方程为:A = 43724 × C － 1342. 8，r =
0. 9996。结果表明:大黄素在 0. 0051 ～ 0. 0612mg /mL 浓度
范围内具有良好的线性关系。
2. 5 精密度实验 精密吸取同一份对照品溶液(浓度为
0. 0204mg /mL)10μL，在“2. 1”项色谱条件下，重复进样 6
次，测定其峰面积积分值平均值为 863611，ＲSD 为 1. 27%，
结果表明本方法精密度良好。
2. 6 稳定性实验 分别精密吸取同一份供试品溶液 10μL，
于 0、6、12、18、24h 在“2. 1”色谱条件下，分别进样，测定其
峰面积积分值平均值为 932743，ＲSD 为 1. 16%，结果表明，
供试品溶液在 24h内峰面积值基本稳定。
2. 7 重复性实验 取同一批样品 6 份，按前述“供试品溶
液制备方法”，平行处理，得 6 份提取溶液，在“2. 1”项色谱
条件下，分别进样，测定大黄素峰面积积分值，得 ＲSD 为
1. 76%(n = 6)，结果表明本方法重复性良好。
2. 8 回收率实验 精密称取已知含量(0. 005422%)样品
约 5. 0g，共 6 份，分别精密加入低、中、高浓度的大黄素对照
品适量，按“2. 2”项下方法制成供试品溶液，再按“2. 1”项下
色谱条件进样测定大黄素含量，计算加样回收率。实验结
果表明，本方法加样回收率好。结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果(n = 6)
序号
取样量
(g)
样品中含大
黄素量(mg)
加入大黄素
量(mg)
实测大黄素总
量(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
ＲSD
(%)
1 5. 0013 0. 2712 0. 1020 0. 36669 8. 23
2 4. 9993 0. 2711 0. 1020 0. 3681 98. 66
3 4. 9986 0. 2710 0. 3060 0. 5723 99. 18 98. 68 0. 54
4 5. 0003 0. 2711 0. 3060 0. 5741 99. 48
5 5. 0015 0. 2712 0. 5100 0. 7682 98. 34
6 5. 0018 0. 2712 0. 5100 0. 7673 98. 22
2. 9 样品含量测定 分别取 3 批白蔹药材样品，按“2. 2”
项下方法制备供试品溶液，再按“2. 1”项下色谱条件进样测
定大黄素峰面积，计算样品中大黄素的含量，同一批次样品
进行 3 次平行试验，取平均值，结果见表 2。
表 2 样品含量测定结果(n = 3)
批号 大黄素平均含量(mg /g) ＲSD(%)
20140223 0. 04558 0. 83
20140228 0. 05422 0. 65
20140301 0. 04139 0. 74
3 结果与讨论
3. 1 光谱条件的选择 通过对大黄素标准品甲醇溶液(浓
度 5μg /mL)全波段(200 ～ 400nm)扫描可见:其在 224、254、
264、288nm处具有特征吸收，取白蔹提取物甲醇溶液扫描可
见:溶液在上述波长处均有较大紫外吸收，参照文献［3］，药
材中大黄素测定的波常选定为 254nm，故本文将检测波长定
为 254nm。
3. 2 大黄素提取条件的选择 通过预试验比较了分别以甲
醇和乙醇作为溶剂的加热回流与超声提取大黄素的方案，
提取结果表明:以甲醇为溶剂的超声提取效果相对较好。
蒽醌类成分以游离型与结合型两种形式存在于白蔹药材
中［2］，故本文对白蔹甲醇提取物进行加酸超声水解的方法，
来提高大黄素的提取量，且通过比较发现超声时间为 30min
时效果较好。
3. 3 结论 反相高效高效液相色谱法测定白蔹药材中大黄
素的含量，分离效果好、重复性好，结果准确、方法操作简
便，可为白蔹定量分析方法的建立提供参考。
参考文献
［1］ 国家药典委员会 . 中华人民共和国药典(一部)［M］. 北京:
化学工业出版社，2010:62.
［2］ 赫军，羡冀，宋莹莹，等 . 白蔹化学成分的研究［J］. 沈阳药科
大学学报，2008，25(8):636 － 638.
［3］ 蔡进章，林崇良，王贤亲，等 . 6 种蓼科植物药材大黄素含量比
较［J］. 中华中医药学刊，2012，30(6)，1372 － 1374.
(收稿日期:2014 － 04 － 15)
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