全 文 ：收稿日期:2010-10-18
基金项目:国家科技支撑计划课题(2007BAI30B06-2)
作者简介:谭秀芳(1962-),女 , 本科 , 副教授 ,研究方向:新
疆地产中草药成分研究及分析
＊通讯作者:李晓瑾(1962-), 女 ,研究员 , 从事中药资源学
研究。 E-mail:xjlxj@126.com, xjlxj@bsk.com
doi:10.3969/j.issn.1006-9690.2011.03.013
维吾尔药材地锦草 HPLC指纹图谱的研究
谭秀芳 1 ,李晓瑾 2＊ ,王　强3 ,石明辉 1 ,杨　杰 3 ,曹　园3
(1.新疆医科大学药学院 , 新疆 乌鲁木齐 830054;2.新疆中药民族药研究所 ,新疆 乌鲁木齐 830002;
3.中国药科大学中药学院 ,江苏 南京 210009)
摘　要　目的:建立地锦草高效液相色谱指纹图谱。方法:Shim-packODSC18(150 mm×4.6 mm.i.d., 5.0 μm)
为色谱柱 , 甲醇 -0.1%磷酸水系统为流动相(梯度洗脱), 检测波长为 272 nm, 柱温为 30℃。结果:测定了产于新
疆的 10批地锦草的指纹图谱 ,标定了 13个共有指纹峰 , 方法学考察结果符合指纹图谱技术要求。经计算机模拟
相似度计算软件计算 , 相似度大于 0.9。结论:建立的 HPLC指纹图谱分析方法可作为地锦草的鉴别方法之一 ,为
地锦草的质量控制提供了依据。
关键词　地锦草;高效液相;指纹图谱
中图分类号:R284;R285　　　文献标识码:A　　　文章编号:1006-9690(2011)03-0047-05
HPLCFingerprintSpectrumofUighurHerbaEuphorbiaeHumifusae
TanXiufang1 , LiXiaojin2 , WangQiang3 , ShiMinghui2 , YangJie3 , CaoYuan3
(1.ColegeofPharmacy, XinjiangMedicalUniversity, Urmqi830054, China;2.ChineseHerbandMi-
norityMedicineInstituteofXinjiang, Urmqi830000, China;ColegeofTraditionalMedicine, China
PharmaceuticalUniversity, Nanjing210009, China)
Abstract　Objective:ToestablishtheHPLCfingprintspectrumofHerbaEuphorbiaeHumifusaeidentifi-
cation.Methods:ThechromatographicsystemconsistedofaShim-packODSC18 column(150 mm×
4.6mm.i.d., 5.0 μm)andamobilephaseofMeOH-1%H3PO4 inconditionofgradientelution.The
detectionwavelengthwas272nm.Thecolumntemperaturewas30℃.Results:DetectedtheHPLCfing-
printspectrumof10 samplesherbaeuphorbiaehumifusaefromXinjiang;Calibratedits13 characteristic
peaks, andmethodologicalinvestigationresultisinaccordancewiththetechnicalrequirementoffinger-
printspectrum.Thesimilaritycalculationsoftwareshowsthatthesimilarityishigherthan0.9.Conclu-
sion:TheHPLCfingerprintspectrumofHerbaEuphorbiaeHumifusaecanbeusedasanidentification
method.ItmayprovidethebasisforqualitycontrolofHerbaEuphorbiaeHumifusae.
Keywords　HerbaEuphorbiaeHumifusae;HPLC;fingerprintspectrum
　　地锦草为大戟科植物地锦 Euphorbiahumifusa Wild.或斑地锦 EuphorbiamaculataL.的干燥全草 ,
是中医 、蒙医 、维吾尔医常用药材 ,在 《中华人民共
和国药典 》、《中华人民共和国卫生部药品标准维吾
尔药品分册 》和 《内蒙古药材标准 》均有记载[ 1, 2] 。
中医认为:地锦草具有清热解毒 、凉血止血之功能 ,
多用其治疗菌痢 、肠炎 、病毒性肝炎 、各种出血症等
疾病;地锦草维吾尔医习用名为夏塔热(Xiahatereqi-
ni)、雅丽蔓(Yalman-kulake), 维医认为:地锦草具
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第 30卷第 3期
2011年 5月 　　　　　　　　　　　　　 中 国 野 生 植 物 资 源ChineseWildPlantResources　　　　　　　　　　 　Vol.30 No.3Jun.2011
有清除异常黏液质 、胆液汁及败血 、消肿止痒之功
能 ,多用其复方治疗手癣 、体癣 、足癣 、银屑病 、过敏
性皮炎等疾病 ,维医临床应用地锦草与中医有很大
差异 ,具有特色之处。地锦草分布于全国各地 ,资源
极其丰富。而目前 ,有报道其化学成分主要有黄酮 、
三萜 、香豆素 、甾醇 、鞣质及酚酸类等化合物[ 3] ,对
地锦草的研究还很缺乏 ,质量评价方面仅建立了地
锦草中芦丁 、槲皮素 、木犀草素和山柰酚 4种有效
成分的含量测定方法 ,对其指纹图谱研究未见报
道 。因此 ,本文通过对新疆和田 10个地区的地锦
草 HLPC指纹研究和分析 ,建立了地锦草的 HPLC
指纹图谱 , 为控制维吾尔药材地锦草质量提供
参考 。
1　仪器与材料
Agilent1100高效液相色谱仪 , H66MC型超声清
洗振荡器 , SartoriusBS110S万分之一分析天平。甲
醇为色谱纯(汉邦),水为市售纯净水 。地锦草药材
(10批)主要来自新疆和田墨玉县 (见表 1)。经新
疆中药民族药研究所李晓瑾研究员鉴定为地锦草。
表 1　样品采集地及采集时间
样品号 采集地 采集时间
1 墨玉县(市场品) 2009.8
2 墨玉县(市场品) 2009.8
3 墨玉县库亚乡吾孜来力克村 2009.8.10
4 墨玉县(市场品) 2009
5 墨玉县(市场购入)兵团 4连 2009.8
6 墨玉县库期乡一连 2009.8.19
7 策勒县 拉仓马(市场购入) 2009.8
8 墨玉县(市场购入)野生 2009.8
9 墨玉县芒来乡达汗村 2009.8.12
10 墨玉县托瓦乡托格里亚村 2009.7.15
2　方法与结果
2.1　以芦丁峰为参照峰建立指纹图谱
2.1.1　色谱条件　色谱柱:Shim-packODSC18
(150mm×4.6 mm.i.d., 5.0 μm);流动相:
A液:0.1%磷酸 , B液:甲醇 ,按表 2梯度洗脱 ,
检测波长为 272 nm,柱温为 30 ℃,进样量:5 μL。
检测时间为 60min。
表 2　梯度洗脱程序
时间(min) A%(磷酸) B%(甲醇) 流速(mL/min)
0 90 10 0.8
25 62 38 0.8
35 62 38 0.8
40 53.6 46.4 0.7
42 50.2 49.8 0.7
60 20 80 0.8
2.1.2　对照品溶液的制备　精密称取芦丁对照品
适量 ,加甲醇制成溶液 ,即得 。
2.1.3　供试品溶液的制备　将地锦草药材粉碎
(过 40目筛),取 500 mg精密称定 ,加入 20 mL甲
醇 ,超声处理 30min,过滤 ,用少量甲醇洗涤残渣 ,合
并至滤液中 ,回收至干 ,加适量水混悬 ,用正丁醇萃
取三次 ,每次 20 mL,合并萃取液 ,减压回收至干 ,残
渣用甲醇转移并定容至 10mL,精密吸取 1mL,定容
至 10 mL,过 0.45μm的微孔滤膜 ,即得。
2.1.4　测定方法　各供试品溶液进样 5 μL,在上
述色谱条件下进行分离测定 ,记录色谱图。以芦丁
特征峰为参照峰 ,计算各共有指纹峰的相对保留时
间和相对峰面积。
2.1.5　方法学考察
2.1.5.1　精密度试验
取同一产地供试品(S1)溶液 5 μL,连续进样 5
次 ,测定指纹图谱 ,结果表明 ,共有峰的相对保留时
间的 RSD均小于 0.4%,表明仪器精密度良好 。
2.1.5.2　稳定性试验
取供试品(S1)溶液 5 μL,分别在 0、2、4、8、24、
48h进样 5次 ,结果表明 ,共有峰的相对保留时间的
RSD均小于 1.2%,表明供试品溶液在 48h内稳定。
2.1.5.3　重现性试验
取同一产地样品(S1)粉末 5份 ,制备供试品溶
液 ,测定指纹图谱 ,结果表明共有峰相对保留时间的
RSD均小于 0.7%,表明本法测定的重现性良好 。
2.1.6　HPLC指纹图谱的建立
取供试品溶液 5 μL,注入液相色谱仪 ,按选定
的测试条件进行检测。同一条件下 ,测定所有供试
品的 HPLC色谱图(见图 1)。根据 10批次供试品
测定结果所给出的峰数 、峰值(积分值)和峰位(相
对保留时间)等相关参数 ,进行分析 、比较 ,制定优
—48—
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　中 国 野 生 植 物 资 源　　　　　　　　　　　　　　　　第 30卷
化的指纹图谱。
图 1　10批药材标准 HPLC图谱
2.1.7　指纹图谱分析
按 2.1.4项测定 10批地锦草样品和对照品 ,其
色谱图见图 1,检测结果见表 3、4。根据 10批供试
样品 HPLC图给出的相关参数 ,比较 、分析供试品谱
图和对照品谱图 ,采用相对保留时间标定共有指纹
峰 ,标定了 13个峰为共有指纹峰 ,建立了地锦草药
材的 HPLC图谱。共有指纹峰的峰号(相对保留时
间):1(0.210), 2(0.329), 3(0.434), 4(0.446), 5
(0.534), 6(0.622), 7(0.637), 8(0.652), 9
(0.707), 10(S)(1), 11(1.062), 12(1.104), 13
(1.133)。
表 3　地锦草药材共有峰相对保留时间
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10(S) 11 12 13
1 0.209 0.327 0.432 0.444 0.533 0.622 0.637 0.652 0.707 1.000 1.063 1.105 1.134
2 0.211 0.330 0.435 0.448 0.537 0.625 0.640 0.655 0.710 1.000 1.064 1.110 1.140
3 0.211 0.330 0.435 0.448 0.537 0.625 0.640 0.654 0.709 1.000 1.063 1.108 1.138
11 0.210 0.329 0.432 0.444 0.532 0.619 0.634 0.649 0.704 1.000 1.061 1.100 1.129
5 0.210 0.329 0.433 0.445 0.534 0.621 0.636 0.651 0.705 1.000 1.062 1.102 1.131
6 0.211 0.329 0.432 0.445 0.532 0.619 0.634 0.648 0.703 1.000 1.059 1.097 1.125
12 0.211 0.329 0.432 0.444 0.532 0.618 0.633 0.647 0.703 1.000 1.059 1.095 1.122
13 0.211 0.329 0.432 0.445 0.532 0.618 0.634 0.648 0.703 1.000 1.059 1.097 1.124
14 0.211 0.329 0.432 0.445 0.532 0.618 0.634 0.648 0.703 1.000 1.059 1.097 1.125
15 0.211 0.330 0.432 0.445 0.533 0.618 0.634 0.648 0.703 1.000 1.059 1.097 1.124
平均 0.210 0.329 0.433 0.445 0.533 0.620 0.636 0.650 0.705 1.000 1.061 1.101 1.129
RSD% 0.31 0.31 0.33 0.32 0.33 0.43 0.41 0.43 0.36 0.17 0.46 0.56
表 4　地锦草药材共有峰峰面积比值
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10(S) 11 12 13
1 0.126 0.114 0.103 0.095 0.322 0.114 0.201 0.625 0.290 1.000 1.292 0.498 1.875
2 0.109 0.092 0.132 0.107 0.308 0.155 0.315 0.660 0.316 1.000 1.424 0.465 1.721
3 0.089 0.076 0.106 0.097 0.251 0.133 0.281 0.521 0.286 1.000 1.177 0.354 1.305
11 0.045 0.055 0.058 0.068 0.226 0.082 0.186 0.380 0.150 1.000 0.960 0.311 1.298
5 0.186 0.150 0.107 0.108 0.317 0.184 0.406 0.688 0.249 1.000 1.710 0.300 1.114
6 0.099 0.078 0.121 0.082 0.270 0.146 0.326 0.483 0.258 1.000 1.260 0.292 1.075
12 0.066 0.087 0.220 0.106 0.317 0.248 0.383 0.742 0.424 1.000 1.527 0.657 2.201
13 0.260 0.086 0.104 0.092 0.276 0.114 0.341 0.479 0.198 1.000 1.644 0.425 1.665
14 0.073 0.048 0.091 0.080 0.248 0.113 0.272 0.490 0.237 1.000 1.161 0.309 1.106
15 0.231 0.093 0.225 0.119 0.429 0.184 0.709 0.661 0.417 1.000 2.401 0.331 1.315
平均 0.128 0.088 0.127 0.095 0.297 0.147 0.342 0.573 0.283 1.000 1.455 0.394 1.468
RSD% 56.75 32.74 42.74 16.29 19.32 32.54 43.00 20.44 30.77 27.81 29.90 25.86
　　地锦草相似度评价:将 10个批次地锦草样品
HPLC测试数据导入国家药典委员会 “中药指纹图
谱相似度评价系统(2004A)”软件 ,经校正 ,将谱峰
自动匹配 ,然后生成对照图谱 ,进行谱峰差异性评价
和整体相似性评价 。通过中药指纹图谱相似度计算
软件得出地锦草样品 HPLC指纹图谱共有模式图 ,
见图 2,与共有模式比较 , 10个批次地锦草相似度见
表 5。
—49—
第 3期　　　　　　　　　　　　　　谭秀芳 , 等:维吾尔药材地锦草 HPLC指纹图谱的研究　　　　　　　　　　　
图 2　10批地锦草 HPLC指纹图谱共有模式图 图 3　地锦草药材的全波长扫描图
表 5　10批地锦草药材相似度
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 对照指纹图谱
1 1 0.999 0.994 0.951 0.985 0.985 0.993 0.982 0.984 0.915 0.995
2 0.999 1 0.995 0.95 0.985 0.987 0.991 0.981 0.986 0.913 0.995
3 0.994 0.995 1 0.956 0.991 0.987 0.977 0.975 0.996 0.917 0.995
11 0.951 0.95 0.956 1 0.985 0.92 0.924 0.96 0.964 0.978 0.974
5 0.985 0.985 0.991 0.985 1 0.969 0.964 0.98 0.994 0.958 0.997
6 0.985 0.987 0.987 0.92 0.969 1 0.973 0.976 0.981 0.883 0.981
12 0.993 0.991 0.977 0.924 0.964 0.973 1 0.969 0.96 0.892 0.98
13 0.982 0.981 0.975 0.96 0.98 0.976 0.969 1 0.971 0.943 0.988
14 0.984 0.986 0.996 0.964 0.994 0.981 0.96 0.971 1 0.93 0.992
15 0.915 0.913 0.917 0.978 0.958 0.883 0.892 0.943 0.93 1 0.947
对照指纹图谱 0.995 0.995 0.995 0.974 0.997 0.981 0.98 0.988 0.992 0.947 1
3　讨　论
3.1　提取方法的考察
考察不同浓度甲醇(0%, 30%, 60%, 90%,
100%)及乙醇(0%, 30%, 60%, 90%, 100%)的提
取效率 ,以 100%甲醇的提取液中色谱峰的数目及
总峰面积最大 ,因此选择甲醇为提取溶剂 。考察甲
醇冷浸 、超声 30 min及加热回流 1 h的总峰面积 ,以
甲醇超声 30 min及加热回流 1 h总峰面积最大 ,由
于超声法省时 ,所以选择甲醇超声 30 min。
以甲醇提取液直接进样发现 ,基线漂移严重 ,杂
质峰多 ,干扰严重 。将提取液回收至干 ,水混悬 ,正
丁醇萃取后 ,杂质去除干净 ,大多数色谱峰达到基线
分离。因此 ,将样品用甲醇提取后 ,用正丁醇萃取 ,
去除杂质 ,富集所需成分。为保证萃取完全 ,进一步
对萃取次数进行考察 ,分别用等量正丁醇萃取 1次 ,
2次 , 3次 , 4次 , 5次 ,发现萃取至 3次时总峰面积不
再增加 ,证明用等量正丁醇萃取 3次能保证成分充
分提取。
3.2　流动相的选择
考察了甲醇 -水 、乙腈 -水 、甲醇 -乙腈 -水系
统 ,以甲醇 -水系统色谱峰分离度最佳 ,因此 ,选择
甲醇 -水系统为流动相 。另外 ,此时色谱峰拖尾严
重。考察了甲醇 -0.5%甲酸水 、甲醇 -0.5%乙酸
水 、甲醇 -0.1%磷酸水系统 ,以甲醇 -0.1%磷酸水
系统所得色谱峰峰形最佳 , 因此 , 最终采用甲醇
-0.1%磷酸水系统为流动相。
3.3　检测波长的选择
经 DAD检测器在 190 ～ 400nm扫描 ,在 272nm
左右给出的色谱峰信息较多 ,且各个色谱峰响应值
相当 ,所以选择 272nm处检测(见图 3)。
根据实验结果可知研究采用了 HPLC技术 ,建
立了地锦草的指纹谱。在实验色谱条件下 ,能得到
较多的色谱峰且分离效果好 , (下转第 68页)
—50—
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　中 国 野 生 植 物 资 源　　　　　　　　　　　　　　　　第 30卷
含特征性蒽醌类成分 ,本文首次报道了齿叶蓼主要
含有原花青素类物质 。
(3)对何首乌中蒽醌及茋类的组织分布研究显
示 ,蒽醌类成分主要分布于韧皮部 ,茋类成分主要分
布于周皮和韧皮部[ 14] 。然而齿叶蓼韧皮部狭窄 ,这
可能与蒽醌及二苯乙烯类成分的累积相关 。
参考文献:
[ 1] 　李法曾 ,许崇梅 ,曲畅游 ,等.中国蓼族植物系统分类研究综述
[ J].西北植物学报 , 2004, 24(1):189-192.
[ 2] 　中国科学院中国植物志编委会.中国植物志第 25卷第 1分册
[ M].北京:科学出版社 , 1998.
[ 3] 　侯元同.中国蓼族植物系统学研究 [ D] .山东师范大学 , 2006.
[ 4] 　庄永龙 ,林中清.蓼属蔓蓼组花粉外壁超微结构的研究 [ J] .安
徽大学学报:自然科学版 , 2001, 25(1):91-95.
[ 5] 　国家中医药管理局《中华本草 》编委会.中华本草 [ M].上海:
上海科学技术出版社 , 1999:650, 660.
[ 6] 　唐丽萍, 杨淑达 ,胡炜彦 ,等.彝族民间药酱头的生药学鉴定
[ J].云南中医学院学报 , 2007, 30(6):14-17.
[ 7] 　刚爱书 ,蔡　霞.毛脉蓼系统分类位置的修订 [ J] .植物分类
学报 , 2008, 46(5):742-749.
[ 8] 　夏从龙 ,李龙星.何首乌与伪品酱头的鉴别 [ J] .时珍国医国
药 , 2003, 14(9):540.
[ 9] 　阮细发.中药何首乌及其几种伪品的理化鉴别 [ J] .海峡药学 ,
2007, 19(9):68-69.
[ 10] 　戚欢阳 ,张朝凤 ,张　勉 , 等.毛脉寥化学成分及抑菌活性的
研究 [ J] .中国药学杂志 , 2005, 40(11):819-8123.
[ 11] 　林　云 ,张朝凤 ,张　勉.愉悦蓼的黄酮类成分研究 [ J] .中国
中药杂志 , 2009, 34(13):1690-1691.
[ 12] 　陈　靖 ,张朝凤 ,张　勉.卷茎蓼地上部分化学成分研究 [ J].
中国中药杂志 , 2010, 35(23):3165-3167.
[ 13] 　ZhangCF, ChenJ, ZhaoLQ, etal.Threenewflavonoidsfrom
theactiveextractofFallopiaconvolvulus[ J] .JournalofAsian
NaturalProductsResearch, 2010, 13(2):136-142.
[ 14] 　缑慧君 ,张朝凤 ,张　勉.何首乌不同器官和组织中蒽醌和茋
类化合物的分布 [ J] .中国野生植物资源 , 2008, 27(2):44-
48.
(上接第 50页)
椐此所得的相对保留值也十分稳定 ,所建立的色谱
指纹谱具有较大的稳定性和可控性。我们认为该方
法能得到地锦草药材所含组分的大量信息 ,其指纹
谱能反映地锦草药材的内在品质。可用于地锦草药
材品质和真伪品的鉴别。
参考文献:
[ 1] 　额尔登高娃 ,贺喜格达来.地锦草蒙医应用与研究 [ J] .中国民
族医药杂志 , 2008, 1(1):29.
[ 2] 　李治建 , 古力娜·达吾提 , 斯拉甫·艾白.维药地锦草的研究
进展 [ J] .中国民族医药杂志 , 2008, 8(8):15
[ 3] 　柳润辉 ,孔令义.地锦草脂溶性成分研究 [ J].天然产物研究与
开发 , 2005, 17(4):437.
·简讯 ·
《中国野生植物资源 》被评为 RCCSE中国核心学术期刊
武汉大学中国科学评价研究中心(RCCSE)和中国科教评价网近期联合发布了《中国学术期刊评价研究
报告(2011-2012)》 。在被评价的 6400种学术期刊中 ,共有 1273种学术期刊进入核心区 , 占总数的
19.9%。 《中国野生植物资源 》被评为 RCCSE中国核心学术期刊(A等为核心期刊 ,占各学科期刊总数的
15%)。
《中国野生植物资源 》编辑部
二〇一一年六月十日
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　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　中 国 野 生 植 物 资 源　　　　　　　　　　　　　　　　第 30卷