全 文 ：书斑点的硅胶，分别置于容量瓶中，加适量甲醇，超声洗脱 15 min，
过滤滤液至 10 ml 的容量瓶中，甲醇定容，238 nm 测吸光度。对
照品、供试品 RSD值分别为 1． 27 %，1． 09 %(n = 5)。
2． 7 稳定性实验 精密吸取供试品溶液 20 μl点于薄层板上，按
“2． 6”项方法处理，238 nm处连续测定 0，0． 5，1，2，3，4，5，6 h 后
的吸光度，计算 RSD值得 3． 74 %，说明 6 h内京尼平苷较稳定。
2． 8 重复性实验 同一批号栀子药材 5 份，按“2． 2”项制得 5 份
供试品溶液，分别吸取 20 μl 点于薄层板上，按“2． 6”项方法处
理，238 nm处测吸光度，计算京尼平苷含量。珋x = 3． 18%(n = 5) ，
RSD值为 3． 59 %，说明样品重复性较好。
2． 9 回收率实验 分别精密吸取京尼平苷对照品溶液 10 μl 加
到已知含量的 100 μl供试品溶液中，共 6 份，按“2． 6”项方法处
理，238 nm处测吸光度，根据回收率公式计算，平均回收率 97． 68
%，RSD = 2． 72 %(n = 6)。
2． 10 含量测定 称取不同批次栀子药材，分别按“2． 2”“2． 6”项
方法处理，238 nm处测吸光度，计算栀子中京尼平苷的含量。结
果见表 1。
A －京尼平苷 B －供试品
图 2 紫外扫描光谱图
表 1 京尼平苷的含量测定 %
批号 京尼平苷含量
100801 3． 72
100802 3． 91
100803 3． 58
3 讨论
TLC － UV法测定栀子药材中京尼平苷的含量，方法简便快
速，精密度、稳定性和重复性均良好，可作为准确含量测定用，同
样适用于栀子提取物中京尼平苷的定量检测。
参考文献:
［1］ 赵成城，杨军宣，施俊辉，等． 对《中国药典》2005 年版Ⅰ部栀子中
栀子苷含量测定方法的探讨［J］．时珍国医国药，2011，22(1) :86．
［2］ 杨季菱．栀子中栀子苷的薄层色谱鉴别［J］．中国实验方剂学杂志，
2005，11(3) :65．
收稿日期:2012-05-16; 修订日期:2012-09-19
基金项目:广西壮族自治区千亿元产业重大科技攻关( No．桂科攻 11107009 － 2 － 1) ; 广西壮族自治区自然科学基金( No． 0991006) ;
国家中医药管理局中医药专项资金( No． 2010MZWXGX09) ; 广西壮族自治区中医药管理局科技专项( No． GZYZ1114) ;
广西民族医药创新研究与产业化技术平台的建设( No． 10124008 － 15) 资助项目
作者简介:郭力城( 1977-) ，男( 壮族) ，广西扶绥人，现任广西民族医药研究院助理研究员，硕士学位，主要从事中药民族药资源与质量研究工作．
* 通讯作者简介:滕红丽( 1964-) ，女( 壮族) ，广西平果人，现任广西民族医药研究院研究员，博士学位，主要从事中药民族药资源和质量研究工作．
铁包金药材中槲皮素的薄层鉴别与含量测定研究
郭力城1，滕红丽1* ，梅之南2
(1．广西壮族自治区民族医药研究院 /广西壮医医院，广西 南宁 530001;
2．中南民族大学药学院，湖北 武汉 430074)
摘要:目的 对铁包金药材中槲皮素进行薄层鉴别并建立铁包金药材中槲皮素的含量测定方法。方法 采用薄层色谱法
对铁包金药材中槲皮素进行鉴别并采用高效液相色谱法进行含量测定，色谱柱为迪马 ODS C18 ( 4． 6 mm × 250 mm，
5μm) ;流动相为乙腈 －甲醇( 5∶ 1) A: 0． 1%磷酸溶液 B( 梯度: 0 ～ 30 min，20% ～ 60% A) ;流速 0． 85 ml /min。检测波长
360 nm，柱温 30℃。结果 薄层色谱可鉴别槲皮素。槲皮素在 0． 69 ～ 4． 83 μg范围内线性关系良好，r = 0． 999 8( n = 7) ，
平均回收率为 99． 8% ( RSD: 1． 27%，n = 6) 。结论 该此法简便、准确，可用于铁包金药材的质量控制。
关键词:铁包金; 槲皮素; 薄层色谱法; 高效液相色谱法
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 12． 015
中图分类号:R284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2012) 12-2983-03
TLC Identification and Determination of the Quercetin in Berchemia lineata
GUO Li-cheng1，TENG Hong-li1* ，MEI Zhi-nan2
( 1． Guangxi Zhuang Autonomous Region Institute of Minority Medicine，Nanning，Guangxi; 2． Pharmacological
College，South － Central University for Nationalities，Wuhan，Hubei 430074，China)
Abstract: Objective To identify the thin layer of quercetin in Berchemia lineata and set up its content determination method．
Methods To identify the quercetin in Berchemia lineate by adopting thin － layer chromatography; and to determine the content by
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书high performance liquid chromatography． The chromatographic column was Diamonsil ODS C18 ( 4． 6 mm × 250 mm，5μm) and the
mobile phase was acetonitrile － methanol( 5: 1) A∶ 0． 1% phosphoric acid solution B ( Gradient∶ 0 ～ 30 min，20 ～ 60%A) ． The
flow velocity，detection wavelength and the column temperature were 0． 85 ml /min，360nm and 30℃ respectively． Results Thin －
layer chromatography could identify the quercetin． The quercetin showed a good linearity within the range of 0． 69 ～ 4． 83μg，r =
0． 999 8( n = 7) and the average recovery rate was 99． 8% ( RSD: 1． 27%，n = 6) ． Conclusion This method is simple，convenient
and accurate and it can be used to control the quality of Berchemia lineate medicinal materials．
Key words: Berchemia lineata; Quercetin; TLC( thin － layer chromatography)
薄层色谱法既广泛而有效地用于生药的真伪鉴定，又可直观
地利用化学成分(斑点)的异同比较近缘物种的相似程度，对药
材的品质及基源的合理性作出分析与评价。尚未发现对勾儿茶
属植物药系统的薄层色谱鉴定的研究报道，作者首次对广西产铁
包金药材进行了鉴定研究与分析。同时，根据本属植物普遍含有
有效成分黄酮类成分尤其是槲皮素的特点，本研究首次对主要采
自广西武鸣县甘圩镇的 10 批铁包金药材样品用高效液相色谱法
测定了其槲皮素成分的含量，色谱柱为:迪马 ODS C18(4． 6 mm ×
250 mm，5μm) ;流动相为乙腈 －甲醇(5∶ 1)A∶ 0． 1%磷酸溶液
B(梯度:0 ～ 30 min，20% ～60%A) ;流速 0． 85 ml /min。检测波长
360 nm，柱温 30℃。槲皮素在 0． 69 ～ 4． 83 μg范围内线性关系良
好，r = 0． 999 8(n = 7) ，平均回收率为 99． 8%(RSD:1． 27%，n =
6)。建立了铁包金药材中槲皮素的含量测定方法。
1 仪器与试药
210型高效液相色谱仪(美国 VARIAN公司) ，二极管阵列检
测器(DAD) ;电子分析天平(CP2250D，Sartorius) ;KQ －5200 型数
控超声波清洗器(江苏昆山市超声仪器有限公司) ;薄层自动铺
板器(瑞士 CAMAG公司) ;双底层析缸(25 cm × 30 cm × 5 cm) ;
薄层色谱硅胶 G(青岛海洋化工有限公司) ;羧甲基纤维素纳(上
海恒信化学试剂有限公司) ;甲醇、乙腈为色谱纯(美国 Fisher 公
司) ，其他为分析纯(成都市科龙化工试剂厂)。其余试剂均为分
析纯，水为超纯水;槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所，批
号:09062911) ;10 批铁包金药材样品采自广西武鸣县甘圩镇，经
广西中医学院刘寿养教授鉴定为鼠李科勾儿茶属植物细叶勾儿
茶 Berchemia lineata (L．)DC．。
2 方法与结果
2． 1 定性鉴别
2． 1． 1 供试品溶液的制备 称取铁包金粉末约 5． 0 g，精密称定，
加水 50 ml，回流提取 3 次，每次提取 1． 0 h，过滤，合并滤液，滤液
挥干。加 50 ml 水溶解，用石油醚萃取 3 次，每次 30 ml，弃去石
油醚液，水液用乙酸乙酯萃取 3 次，每次 30 ml，合并乙酸乙酯萃
取液，水浴上挥干，残渣加甲醇 1 ml 使溶解，取上清液作为供试
品溶液。
2． 1． 2 对照品溶液的制备 取槲皮素对照品，加甲醇制成每毫升
含 0． 1 mg的溶液，作为对照品溶液。
2． 1． 3 薄层色谱法 按《中国药典》2010 年版一部附录 VIB薄层
色谱法［1］，分别吸取供试品溶液及槲皮素对照品溶液各 10μl 分
别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板上，以
甲苯 －醋酸乙酯 －甲酸(5∶ 4∶ 1)为展开剂，置盐酸蒸气饱和的
展开缸内，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品相应的
位置上，显相同颜色的斑点。
2． 1． 4 实验结果 样品药材的薄层色谱结果见图 1。斑点颜色
为:棕黄色，其中对照品槲皮素斑点显棕黄色。
2． 2 HPLC测定
2． 2． 1 色谱条件 色谱柱为迪马 ODS C18(4． 6 mm × 250 mm，5
μm) ;流动相为乙腈 －甲醇(5∶ 1)A∶ 0． 1%磷酸溶液 B(梯度:0
～ 30min，20% ～60%A) ;流速 0． 85 ml /min。检测波长 370 nm，
柱温 30℃。进样量 10 μl，理论塔板数按槲皮素计算，应不低于
3 000。在此色谱条件下，槲皮素对照品、铁包金药材的 HPLC 图
谱见图 2 ～ 3。
1． 槲皮素 2．铁包金
图 1 铁包金 TLC图
图 2 槲皮素 HPLC图谱
图 3 铁包金 HPLC图谱
2． 2． 2 对照品溶液的制备 精密称取槲皮素 0． 010 g 置 100 ml
容量瓶中，加色谱甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品液(浓
度 0． 138 mg /ml)。
2． 2． 3 供试品溶液的制备 取铁包金粉末约 2． 0 g，精密称定，加
水 50 ml，回流提取 3 次，每次提取 1． 0 h，过滤，合并滤液，滤液挥
干。加 50 ml水溶解，用石油醚萃取 3 次，每次 30 ml，弃去石油醚
液，水液用乙酸乙酯萃取 3 次，每次 30 ml，合并乙酸乙酯萃取液，
水浴上挥干，加甲醇定容至 25 ml量瓶中，摇匀，用 0． 45 μm微孔
滤膜滤过，即得。
2． 2． 4 方法学考察
2． 2． 4． 1 线性关系考察 精密吸取槲皮素对照品液(浓度 0． 138
mg /ml) ，摇匀，用 0． 45μm 微孔滤膜过滤。自动进样 5，10，15，
20，25，30，35μl，测得峰面积。以峰面积(A)为纵坐标，其进样量
(C)为横坐标，得槲皮素的回归方程为:A = 26． 94C － 7． 77，r =
0． 999 8(n = 7) ，结果表明，槲皮素在 0． 69 ～ 4． 83μg 范围内进样
量与峰面积之间有良好的线性关系。见表 1。
表 1 对照品线性范围考察实验结果
浓度 C /μg·ml －1 对照品峰面积
0． 69 11． 83
1． 38 29． 5
2． 07 47． 0
2． 76 65． 8
3． 45 84． 7
4． 14 104． 5
4． 83 122． 7
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书2． 2． 4． 2 精密度实验 取槲皮素对照品液(浓度 0． 138 mg /ml) ，
摇匀，用 0． 45 μm微孔滤膜过滤。进样 15 μl，重复进样 6 次，测
定峰面积，结果 RSD值为 0． 293%。见表 2。
表 2 精密度实验结果
样品 对照品峰面积
1 43． 2
2 42． 9
3 43． 2
4 43． 1
5 43． 2
6 43． 0
RSD(%) 0． 293 5
珋x 43． 12
2． 2． 4． 3 重复性考察 取样品 1 粉末 2 g，精密称定，共 6 份，按
“2． 2． 3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，RSD
值为 0． 387%。见表 3。
表 3 重复性实验结果
样品 对照品峰面积
1 40． 2
2 40． 1
3 39． 9
4 39． 8
5 40． 2
6 40． 3
RSD(%) 0． 3875
珋x 40． 08
2． 2． 4． 4 回收率试验 取样品 1 粉末 2 g，精密称定，配制方法见
“2． 2． 3”供试品样液的配制，得供试品样液，从中精密量取 1 ml，
加入以上 1 ml槲皮素对照品溶液(浓度 0． 28 mg /ml) ，混合摇匀，
微孔滤膜滤过，得加样回收液，重复做 6 份，进样 10μl，测定峰面
积，结果平均回收率为 99． 8% (RSD:1． 27%，n = 6)。结果如
表 4。并按以下公式计算:
公式:回收率(%)=
测得对照品量(μg)－样品中原有量(μg)
加入对照品量(μg)
× 100(%)
表 4 加样回收率试验结果
样
号
加入对照量
m /μg
样品中原有对
照量m /μg
测得对照量
/μg
回收率
(%)
平均浓度回收率
(%)
RSD
(%)
1 1． 400 1． 421 2． 850 102． 01
2 1． 400 1． 423 2． 798 98． 21
3 1． 400 1． 422 2． 817 99． 64 99． 79 1． 27
4 1． 400 1． 420 2． 808 99． 14
5 1． 400 1． 420 2． 822 100． 14
6 1． 400 1． 422 2． 816 99． 57
2． 2． 4． 5 稳定性实验 取样品 1 粉末 2 g，按“2． 2． 3”制备供试
品，于 0，2，4，6，8，12 h进样 10 μl，按上述色谱条件测定峰面积，
计算 RSD值为 0． 33%，结果表明，供试品溶液在 12 h内稳定。见
表 5。
2． 2． 5 样品含量测定 取 10 个不同批次的样品粉末 2． 0 g，精密
称定，配制方法见“2． 2． 3”供试品样液的配制，得供试品，按上述
色谱条件测定，记录峰面积，按外标法计算含量。含量测定结果
见表 6。
表 5 稳定性试验结果
时间 t /h 对照品峰面积
0 39． 2
2 39． 3
4 39． 2
6 39． 0
8 39． 5
12 39． 2
RSD(%) 0． 331 7
珋x 39． 23
表 6 样品中槲皮素的含量
样品编号 种名 采样地点 采收时间 含量(%)
1 铁包金 广西武鸣县 2010 － 04 － 12 0． 354 7
2 铁包金 广西武鸣县 2010 － 05 － 15 0． 060 6
3 铁包金 广西武鸣县 2010 － 06 － 15 0． 027 6
4 铁包金 广西武鸣县 2010 － 07 － 15 0． 048 3
5 铁包金 广西武鸣县 2010 － 08 － 15 0． 132 7
6 铁包金 广西武鸣县 2010 － 09 － 15 0． 103 8
7 铁包金 广西武鸣县 2010 － 10 － 15 0． 015 9
8 铁包金 广西武鸣县 2010 － 11 － 15 0． 010 7
9 铁包金 广西武鸣县 2010 － 12 － 15 0． 020 1
10 铁包金 广西武鸣县 2010 － 03 － 20 0． 195 2
3 讨论
通过实验发现，在槽内先加入展开剂，再在展开缸内用小烧
杯盛上盐酸，然后进行薄层板预饱和 30 min，再展开，其色谱斑点
圆而集中，分离度较好。
铁包金药材除了含有槲皮素外，还有多种黄酮苷，本研究以
盐酸和硫酸作为水解酸进行了比较，还对水解酸的浓度、溶剂和
提取时间进行了考察。结果本研究所用的条件较好。曾对甲醇
－水(50∶ 50)、甲醇 － 0． 1%磷酸(50∶ 50)、乙腈 －水(45∶ 55)
等流动相进行考察，发现上述条件不够理想。采用乙腈 －甲醇
(5∶ 1)A:0． 1%磷酸溶液 B(梯度:0 ～ 30 min，20 ～ 60% A)作为
流动相，槲皮素色谱峰能够达到基线分离，峰形对称、尖锐。
1990 年版《广西中药材标准》收载老鼠耳(细叶勾儿茶)
Berchemia lineata (L．)DC．的干燥根为铁包金药材的来源品种，
而调查发现，广西壮族地区临床常用的铁包金药材的原植物经鉴
定实际包括鼠李科勾儿茶属植物细叶勾儿茶(老鼠耳)Berchemia
lineata (L．)DC．、多叶勾儿茶 Berchemia polyphylla Wall． ex Laws．
var． polyphylla、光枝勾儿茶 Berchemia polyphylla var． leioclada
(Hand． － Mazz．)Hand． － Mazz． 以及多花勾儿茶 Berchemia flori-
bunda (Wall．)Brongn．等 4 种植物的茎藤或根［2］。尚未对另外三
种植物进行槲皮素的含量测定。因此，多叶勾儿茶、光枝勾儿茶、
多花勾儿茶三种植物的干燥茎藤或根在成分含量上是否有差异?
能否同时作为铁包金药材使用有待商榷。
在 1990 年版《广西中药材标准》中［3］，只对药材性状与粉末
鉴别作了规定，本实验首次对铁包金药材中槲皮素进行薄层鉴定
与含量测定，可作为铁包金药材质量控制的有效方法。
参考文献:
［1］ 国家药典委员会．中国药典，一部［S］．北京:中国医药科技出版社，
2010:附录 VIB．
［2］ 广西壮族自治区卫生厅．广西中药材标准，第 1 版［S］．南宁:广西
科学技术出版社，1990:79，260．
［3］ 滕红丽，陈科力，陈士林． 壮药铁包金及其药材商品的物种基础
［J］．中药材，2010，33(5) :674．
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