全 文 ：收稿日期:2010-12-22; 修订日期:2011-06-08
基金项目:国家自然科学基金(No． 30760308) ;
国家科技支撑计划项目(No． 2007BAI30B03)
作者简介:库尔班尼沙·买提卡思木(1981-) ，女(维吾尔族) ，新疆和田
人，现任新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所助理研究员，硕士学位，主
要从事天然药物化学研究工作．
* 通讯作者简介:斯拉甫·艾白(1960-) ，男(维吾尔族) ，新疆伊犁人，现
任新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所研究员，主任药师，硕士生导师，
硕士学位，主要从事抗炎免疫药理学研究工作．
地锦草抗真菌有效部位中芦丁及槲皮苷含量
的高效液相色谱法测定
库尔班尼沙·买提卡思木1，祖里皮亚·塔来提1，
古丽娜·达吾提2，希尔艾力·吐尔逊1，斯拉甫·艾白1，2*
(1．新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所，新疆 乌鲁木齐 830049;
2．新疆维吾尔自治区维吾尔医医院，新疆 乌鲁木齐 830049)
摘要:目的 建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定维吾尔医药地锦草抗真菌有效部位中芦丁及槲皮苷含量的方法。方
法 色谱柱为 waters symmetry C18(4． 6 mm × 150 mm，5 μm) ;流动相为甲醇 － 0． 4%磷酸水溶液(42∶ 58，V /V) ，，检测波长
为 360nm;流速为 1． 0 ml·min －1;柱温 25℃;进样量 10 μl。结果 芦丁和槲皮苷线性范围分别在 0． 42 ～ 2． 52 μg，0． 6 ～
3． 6μg内线性关系良好(r≥0． 999 5) ，平均加样回收率分别为 99． 2%，101． 1%，RSD≤3． 3%。结论 该方法操作简便、准
确、灵敏度高、重复性好，可用于地锦草抗真菌有效部位的质量控制。
关键词:高效液相色谱法; 芦丁; 槲皮苷; 地锦草
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2011． 11． 006
中图分类号:R291． 5;R284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2011)11-2584-02
Determination of Rutin and Quercitrin in the Antifungal Extract from Euphorbia macula-
ta L． by HPLC
Kuerbannisha·Maitikasimu1，Zulipiya·Talaiti1，Gulina·Dawuti2，Xieraili·Tuersun1，Silafu·Aibai1，2*
(1． Institute of Xinjiang Uighur Medicine ，Urumqi 830049，China;2． Xinjiang Uighur Medical Hospital，Urumqi
830049，China)
Abstract:Objective To develop an HPLC method for determination of 2 flavonoids components － rutin and quercitrin in the an-
tifungal extract from Euphorbia maculata L． ．Methods The analysis was performed on a column of waters symmetry C18(4． 6 mm
× 150 mm，5 μm) ，and methanol － 0． 4% phosphoric acid(42:58 v /v)were used as mobile phase at a column temperature of
25℃ ． The detection wavelength was 360 nm，the flow rate was 1． 0 ml·min －1 and injection volume was 10 μl． Results The av-
erage recovery of rutin and quercitrin were 99． 2% and 101． 1% respectively (RSD≤3． 3，n = 9)． Conclusion This method is
simple，rapid，accurate and reliable for the quality control of Euphorbia maculata L．
Key words:HPLC; Dijincao; Rutin; Quercitrin
地锦草为大戟科植物地锦 EH Willd． 或斑地锦 Euphorbia
maculata L．的干燥全草，是中医、维吾尔医常用药材，维医习用名
为 Xiahatereqini、Yalmankulake，具有清除异常粘液质、胆液质及败
血，消肿止痒等功能［1］。维吾尔医认为地锦草可纠正异常气质，
促进正常体液的生成，从而解除异常粘液质对皮肤的刺激，而使
局部组织的生长力、摄住力及营养力恢复正常，以使机体康复。
临床主要用于治疗手癣、体癣、足癣、花斑癣等皮肤病和菌痢、肠
炎、病毒性肝炎、银屑等疾病。其化学成分主要有黄酮、三萜、香
豆素、甾醇、鞣质及酚酸类等化合物［2］，是一种药用价值很高的
植物，近年来引起国内外学者的极大重视。据文献报道，地锦草
具有抗菌作用［3］。本课题组富集了地锦草抗真菌有效部位并建
立了 HPLC 法同时测定抗真菌有效部位中的两种黄酮类成
分———芦丁及槲皮苷含量的方法，为地锦草抗真菌有效部位质量
控制提供了定量依据。
1 材料与仪器
1． 1 材料 地锦草抗真菌有效部位干浸膏。
1． 2 仪器 美国 Waters 高效液相色谱仪，Waters 2996 二极管阵
列检测器，Empower数据采集系统(美国沃特诗公司) ;Milli － Q
超纯水纯化系统(18 MΩ，Millipore公司) ;SGT7200HBT型超声清
洗器(上海冠特超声仪器有限公司) ;JA1203 电子分析天平(1 /10
万，上海恒平科学仪器有限公司) ;0． 45 μm针筒式滤器。
1． 3 试药 芦丁标准品(批号:008l 一 9304)、槲皮苷标准品(批号:
0861 －200001)均为供含量测定用对照品，购自中国药品生物制品检
定所，甲醇、超纯水(色谱纯)，乙醇、甲醇、磷酸(均为分析纯)。
2 方法
2． 1 色谱条件 色谱柱为 waters symmetry C18(4． 6 mm × 150
mm，5 μm) ;流动相:甲醇 － 0． 4%磷酸水溶液(42∶ 58，V /V) ;流
速 1． 0 ml /min。检测波长 360 nm;柱温:25℃;进样量:10 μl。
2． 2 对照品溶液的制备
2． 2． 1 芦丁对照品溶液的制备 精密称取已干燥恒重的芦丁对
照品 21 mg，用甲醇使其充分溶解，并定容至 25 ml 的容量瓶中，
既得质量浓度为 0． 84 mg /ml 的芦丁对照品储备液，精密吸取储
备液 1 ml置于 10 ml的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，得浓度为
0． 084 mg /ml的对照品供试液，放置 4℃冰箱备用。
2． 2． 2 槲皮苷对照品溶液的制备 精密称取已干燥恒重的槲皮
苷对照品 24 mg，用甲醇充分溶解，并定容至 100 ml的容量瓶中，
得质量浓度为 0． 24 mg /ml 的槲皮苷对照品储备液，精密吸取储
备液 5 ml置于 10 ml的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，得浓度为
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时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 11 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL． 22 NO． 11
0． 12 mg /ml的对照品供试液，放置 4℃冰箱备用。
2． 3 样品溶液的制备 准确称取地锦草有效部位浸膏 100 mg，
置于 25 ml容量瓶中，加适量甲醇使充分溶解并稀释至刻度，得
质量浓度为 4 mg /ml的样品溶液。精密吸取上述溶液 1 ml，置于
50ml的容量瓶中并稀释至刻度，得浓度为 0． 08 mg /ml 的样品供
试液。
2． 4 方法学考察
2． 4． 1 线性关系考察 芦丁标准曲线的绘制:精密吸取质量浓度
为 0． 084 mg /ml的芦丁对照品供试液 5，10，15，20，25，30 μl，进
样，在上述色谱条件下测定峰面积，以峰面积(Y)对质量浓度(X)
进行线性回归，得到回归曲线。为 Y = 11 879X － 16 152 ，r =
0． 999 5。结果表明芦丁质量浓度在 0． 42 ～ 2． 52 μg 范围内与峰
面积线性关系良好。
槲皮苷标准曲线的绘制:精密吸取质量浓度为 0． 12 mg /ml
的槲皮苷对照品溶液 5，10，15，20，25，30 μl，进样，在上述色谱条
件下测定峰面积，以峰面积(Y)对质量浓度(X)进行线性回归，得
到回归曲线 Y = 33 944X － 84 272，R = 0． 999 5。结果表明槲皮苷
质量浓度在 0． 6 ～ 3． 6 μg范围内与峰面积线性关系良好。
2． 4． 2 精密度实验 分别取浓度为 0． 084，0． 12 mg /mL 的芦丁、
槲皮苷对照品溶液，分别连续进样 6 次，每次 10 μl，以峰面积计
算精密度，RSD分别为 0． 96%，0． 92%(n = 6)。表明操作过程中
仪器精密度良好。
2． 4． 3 重复性实验 精密量取浓度为 4 mg /ml样品溶液 1 ml，平
行 6 份，用甲醇制成样品供试液并分别进样测定。结果芦丁、槲
皮苷 RSD分别为 2． 50%，3． 80%(n = 5) ，结果表明此方法具有较
好的重复性。
2． 4． 4 稳定性实验 精密吸取样品溶液，分别于 0，1，2，3，4，5，6，
7，8，9，10 h进样测定峰面积。结果芦丁峰面积 RSD 为 2． 5%(n
= 10)槲皮苷峰面积 RSD为 2． 8%，表明样品供试液在 10 h内基
本稳定。
2． 4． 5 加样回收实验 分别精密称取 18 份已知含量的同一样品
粉末 100 mg，分别置于 25 ml的具塞锥形瓶中分别准确加入相应
的对照品溶液(1． 5，2，2． 5，0． 5，1，1． 5 ml) ，按照供试品溶液制备
方法制备供试样品，在上述色谱条件下测定。结果见表 1。结果
表明，按本方法测定样品中芦丁及槲皮苷的含量，加样回收率均
符合要求。
表 1 加样回收率实验结果
编号
样品量
m /mg
对照品加入量
m /mg
实测量
m /mg
回收率
(%)
RSD
(%)
1 0． 184 2 0． 134 4 0． 318 2 97． 6
2 0． 184 3 0． 134 4 0． 318 0 95． 9
3 0． 184 0 0． 134 4 0． 318 1 98． 7
芦
丁
4 0． 184 1 0． 168 0 0． 351 9 96． 0 3． 3
5 0． 184 0 0． 168 0 0． 352 4 100． 4
6 0． 184 2 0． 168 0 0． 352 2 105． 2
7 0． 184 2 0． 201 6 0． 385 9 99． 4
8 0． 184 1 0． 201 6 0． 378 7 95． 2
9 0． 184 2 0． 201 6 0． 382 0 105． 0
1 0． 099 0 0． 060 0． 117 9 97． 7
2 0． 099 3 0． 060 0． 118 3 98． 5
3 0． 099 1 0． 060 0． 118 6 105． 6槲
皮
苷
4 0． 099 2 0． 120 0． 123 0 97． 6 2． 9
5 0． 099 1 0． 120 0． 122 6 103． 9
6 0． 099 3 0． 120 0． 123 1 104． 1
7 0． 099 1 0． 180 0． 127 5 102． 9
8 0． 099 1 0． 180 0． 128 0 99． 8
9 0． 099 2 0． 180 0． 126 9 100． 4
n = 9
2． 5 样品中芦丁、槲皮苷含量的测定 按照“2． 1． 1”项下进行色
谱分析测定，进样之前过 0． 45 μm 滤膜。芦丁、槲皮苷含量分析
结果见表 2。对照品和样品分析色谱图分别见图 1 ～ 3。
图 1 芦丁对照品 HPLC图谱
图 2 槲皮苷对照品 HPLC图谱
1．芦丁 2．槲皮苷
图 3 样品 HPLC图谱
表 2 样品中芦丁及槲皮苷含量测定结果
样品
编号
芦丁峰
面积
槲皮苷
峰面积
芦丁 C /mg·g － 1
含量 平均含量
槲皮苷 C /mg·g － 1
含量 平均含量
1 2 528 2212 272 674 45． 25 24． 25
2 2 657 1732 313 559 50． 00 46． 00 24． 75 24． 75
3 2 545 0422 355 019 45． 50 25． 25
n =3
3 讨论
实验过程中分别采用了甲醇 －水、甲醇 － 0． 1%磷酸、甲醇 －
0． 2%磷酸、甲醇 － 0． 4%磷酸、乙腈 －水、乙腈 － 0． 1%磷酸、乙腈
－ 0． 4%磷酸为流动相，通过出峰数目、峰面积、分离度等的对比，
选择最优的流动相。以甲醇 － 0． 4%磷酸为流动相系统时，出峰
数目多，分离效果好，漂移现象较弱，峰形好，故确定流动相为甲
醇 － 0． 4%磷酸水溶液。制备供试品溶液时实验分别采用，50%，
95%的乙醇，无水乙醇，甲醇作为溶剂，经过 HPLC 实验分析，得
出纯甲醇溶解所得的供试品峰型、分离度均较好。因此，选择甲
醇为提取溶剂。
本实验建立了 HPLC法同时测定地锦草抗真菌有效部位中
芦丁及槲皮苷含量的方法。该方法操作简便、灵敏度高、准确，可
作为控制地锦草抗真菌有效部位质量的定量依据。
参考文献:
［1］ 新疆维吾尔自治区卫生厅．维吾尔药材标准，上册［S］． 乌鲁木齐:
新疆科技卫生出版社，1993:99．
［2］ 安惠霞，李治建，古丽娜·达吾提，等．地锦草的研究进展［J］．时珍
国医国药，2008，19(12) :2866．
［3］ 古力娜·达吾提，尤丽吐孜，艾则孜·亚森，等．维药地锦草软膏的
体外抗真菌及其对豚鼠皮肤真菌感染的治疗作用研究［J］．中药药
理与临床，2007，23 (5) :178．
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