全 文 ：民 族 医 药
Ethnomedicine and Ethnopharmacy
基金项目:青海省自然科学基金 (2014 － Z － 909)。
作者简介:段雅彬 (1990 －)，男，在读硕士研究生。
通信作者:李向阳，Email:qhmclxy@ 163． com
藏药余甘子对大鼠 CYP2C9 活性的影响
段雅彬 姚星辰 李向阳*
青海大学医学院，青海 西宁 810016
【摘 要】 目的:分析藏药余甘子对 CYP2C9 酶活性的影响。方法:对照组灌胃给予生理盐水，实验组灌胃给予余甘子。采用探针药
物法评价 CYP2C9 的活性，探针药物以及代谢产物的浓度用 HPLC测定。结果:对照组和实验组大鼠 CYP2C9 活性分别为 0. 083 ± 0. 042 和
0. 100 ± 0. 049 ，两组数据差异无统计学意义。结论:余甘子对大鼠 CYP2C9 的活性无影响。
【关键词】 藏药;余甘子;CYP2C9
【中图分类号】Ｒ29 【文献标志码】A 【文章编号】1007 － 8517 (2014)11 － 0008 － 03
The effect of Tibetan medicine phyllanthus emblica on the activity of CYP2C9
Duan Ya － bin YAO Xing － chen LI Xiang － yang
Medical College of Qinghai university，Xining 810016，China
Abstract:Objective To analysis the effect of Tibetan medicine Phyllanthus emblica on the activity of CYP2C9． Methods Ｒats in
control and experimental group were administrated orally saline and Phyllanthus emblica，respectively． The activity of CYP2C9 was e-
valuated by the probe drugs method，And probe drugs and metabolites concentration determined by HPLC． Ｒesults The rats CYP2C9
activity in control group and experimental group were 0. 083 ± 0. 042 and 0. 100 ± 0. 049，respectively． There was no significant differ-
ence between two groups． Conclusion the Phyllanthus emblica had no significant effect on the activity of CYP2C9 in rats．
Key words:Tibetan medicine;Phyllanthus emblica L;CYP2C9
余甘子为大戟科叶下珠属植物，在《藏药标准》所载
的 290 种藏药成药中，含余甘子的有 72 种，占总数的
25%。余甘子有防癌作用、抗诱变、抗致畸、抗炎、抗氧
化、抗衰老、保肝、抗溃疡、免疫调节作用［1］。并且有清
热凉血，消食健胃，生津止咳的功效［2］。CYP2C9 是 P450
酶系第二亚家族中的一个重要成员，占肝微粒体 P450 蛋白
总量的 20%，约有 16%的临床药物由 CYP2C9 负责代谢，
如苯妥因，格列苯脲，双氯芬酸，氯沙坦等。但余甘子对
其他复方制剂影响的研究尚未见报道，本文以 CYP2C9 为
研究对象，用探针药物［3 － 5］来分析藏药余甘子对该酶活性
影响，为藏药余甘子临床用药和配伍机制提供一定的参考
依据。
1 材料和方法
1. 1 材料
1. 1. 1 仪器 高效液相色谱仪 (日本岛津);N2000 型色
谱工作站 (浙江大学智能信息工程研究所);XW － 80A 旋
涡混合器 (上海精科有限公司);TGL － 16B 高速离心机
(上海安亭科学仪器厂);各种常规仪器等。
1. 1. 2 药品与试剂 余甘子 (西宁中藏药材批发市场购
买，经青海大学医学院魏全嘉教授鉴定);苯妥英钠 (东京
化成工业株式会社，批号:GF01 － FD);4 －羟化苯妥英
(Sigma公司，批号:00213DG);乌拉坦 (国药集团化学试
剂有限公司，批号:T20090811);甲醇、乙腈为色谱纯;
水为纯净水;其余试剂均为分析纯
1. 1. 3 实验动物 Wistar 大鼠 20 只，清洁级，雌雄各半，
体质量 (200 ± 20)g，由兰州大学医学实验中心提供，合
格证号为 14 － 006。饲养温度 (23 ± 2)℃，照射时间 12 h /d
(7:00 ～ 19:00)，饲养一周后进行实验。
1. 2 方法
1. 2. 1 实验动物分组 将大鼠分为对照组、实验组共 2
组，每组 10 只，雌雄各半。对照组灌胃给予生理盐水
(5 ml /kg)，连续 3 天。实验组灌胃给予余甘子提取液 (5
ml /kg)，连续 3 天。第 4 天对照组和实验组灌胃给予探针
药物苯妥英钠 (15 mg /kg)。
1. 2. 2 余甘子提取液的制备 取干燥余甘子并精密称取
100 g，加入水 1 000 ml 浸泡 30 min，加热至沸腾，回流 50
min，过滤，蒸发浓缩，使其质量为 0. 4 g /ml。
1. 2. 3 对照品溶液配制 精密称取 4 － 羟基苯妥英 5 mg，
置 5 ml 量瓶中，加入纯净水溶解并稀释至刻度，摇匀，即
得 4 －羟基苯妥英贮备液 (1 mg·ml －1)。取此液 0. 5 ml
置 5 ml 量瓶中，加入纯净水定容，即得 100 μg·ml －14 －
羟基苯妥英水溶液;依次稀释成 10、1 μg·ml －1的溶液。
按相同方法配制得 100、10、1 μg·ml －1的苯妥英钠水
溶液。
1. 2. 4 样本采集 对照组和实验组给予苯妥英钠 12 小时
后采集血液，分离血清，冰箱冷冻保存待测。
1. 2. 5 血浆样品处理 从冰箱中取出样品在室温下解冻，
涡旋 30 秒，吸取 120μl 血清样品加 40μl 30% HCLO 混旋
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1 min，TGL － 16B高速离心机 16 000 r /min 离心 10 min，取
上清液 10 (l采用高效液相色谱进样分析。
1. 2. 6 酶活性评价 大鼠给予苯妥英钠后测定 12 h血清中
苯妥英钠 (PHT)和代谢产物 4 － 羟基苯妥英 (HPPH)，
以 HPPH/PHT的浓度比值评价 CYP2C9 的活性。
1. 2. 7 色谱条件 采用反相高校液相色谱法测定血清中苯
妥英钠和代谢产物的浓度。色谱条件 PHT 和 HPPH:流动
相为乙腈 －水 －冰乙酸 －三乙胺 (40 ∶ 60 ∶ 0. 3 ∶ 0. 3，v /v)，
色谱柱为 Lichrospher C18 (250 mm × 4. 6 mm，5 (m)，流
速为 1. 0 ml·min －1，检测波长为 220 nm;进样量 10μl。在
此条件下将一定浓度的苯妥英钠和 4 －羟基苯妥英的对照
品溶液进样 10μl，得对照品溶液色谱图 (Figure 1 A);取
大鼠空白血清，按样品处理项下方法操作，进样 10μl，得
空白血清色谱图 (见 Figure 1 B);将一定浓度的苯妥英钠
和 4 －羟基苯妥英的对照品溶液加入空白血清中，依同法
操作，得相应色谱图 (Figure 1 C);取给药 12 h 后的血清
样品，依同法操作，得给药后的色谱图 (Figure 1 D);其
中苯妥英钠和 4 －羟基苯妥英的峰形良好，基线平稳;结
果表明，血清中的内源性物质不干扰苯妥英钠和 4 －羟基
苯妥英的测定。
1. 2. 8 回收率及精密度 配制低、中、高浓度的标准血清
样品 (苯妥英钠和 4 －羟基苯妥英均为 1、6、20 μg /ml)
按“样品预处理”项下操作并进样分析，测定值与相同浓
度对照品溶液测定值相比计算回收率 (n = 5);同日和连续
5 日各处理 5 份样品，求日内 ＲSD 和日间 ＲSD。精密度与
回收率结果分别见表 1。
表 1 精密度及回收率考察结果 (n = 5)
Concentration (μg /ml) ＲSD (%)
Added Found Intra － day Inter － day
Ｒecovery (%)
4 －羟基苯妥英
1 0. 81 5 5. 1 91. 2 ± 2. 0
6 6. 80 6. 4 8. 7 100. 4 ± 3. 4
20 21. 19 3. 9 4. 2 91. 0 ± 3. 0
苯妥英钠
1 1. 20 7. 2 5. 6 99. 6 ± 6. 2
6 6. 40 5. 1 6. 6 97. 4 ± 5. 7
20 19. 19 4. 6 5. 6 101. 0 ± 6. 2
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1. 2. 9 数据处理 所有数据以 mean ± SD表示，SPSS13． 0
统计软件进行分析处理，采用两独立样本 t 检验，P ＜ 0. 05
为差异有统计学意义。
2 结果
采用前述建立的 HPLC 法测定对照组与实验组给药后
的 CYP2C9 酶活性，对照组与实验组给药后的 CYP2C9 酶活
性评价。由表 2 可知，对照组与实验组大鼠 CYP2C9 的活
性无统计学意义，余甘子对 CYP2C9 的活性无影响。
表 2 对照组与实验组 CYP2C9 酶活性 (x ± s，n = 10)
组别 对照组 实验组 P
活性 0. 083 ± 0. 042 0. 100 ± 0. 049 0. 501
3 讨论
基于 P450 的中药配伍机制研究文献报道较多，刘琳
娜［6］等验证了甘草水煎液对 P450 活性有一定增强作用;呼
自顺［7］等研究表明黄芩对 CYP2C9 的活性有增强作用，说
明黄芩对其他药物的代谢起到减毒防毒的作用。本文研究
显示余甘子虽对 CYP2C9 活性无影响，但对其它 P450 各亚
酶活性影响如何，哪类主要成分影响酶活性，当余甘子和
酶诱导剂或酶抑制剂合用时又会产生何种结果，值得进一
步研究。
叶亚琳［8］等通过采用 CO 还原差示光谱法测定 CYP450
的含量来说明对酶活性的影响，只能验证 P450 的活性，而
探针药物法 (苯妥英钠)可以特异性评价 CYP2C9 活性，
李芹［9］等采用基因法研究 P450 酶活性，本研究采用探针药
物法评价酶活性，并且比基因法要简便，快捷。本实验采
用了 Liehrospher C18 色谱柱和乙腈 －水 －冰乙酸 －三乙胺
(40∶ 60∶ 0. 3∶ 0. 3，v /v)为流动相，进行等度洗脱，苯妥英
钠和 4 －羟基苯妥英可以在 10 min 中内完成测定，比文献
报道［10］的分析时间明显缩短。
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(收稿日期:2014. 04. 03
檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾
)
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(收稿日期:2014. 04. 05)
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