全 文 ：山芝麻水提物对大鼠肝纤维化组织中 α-SMA、
TIMP-1蛋白表达的影响
林　兴 ,冯志强 ,卢锷英 ,梁斯巧 ,黄金山 ,李雪萍 ,罗权海
(广西医科大学 ,南宁 530021)
　　摘要:目的　探讨山芝麻水提物对肝纤维化的治疗作用及机制。方法　将 75只肝纤维化模型大鼠随机分为 5
组各 15只 ,山芝麻高 、中 、低剂量组分别予山芝麻水提物 30、15、7.5 g/kg灌胃 , 秋水仙碱组予秋水仙碱 1 mg/kg灌
胃 , 模型组不用药。灌胃 6周末采用免疫组化法检测各组肝组织中 α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、金属蛋白酶组织
抑制因子(TIMP-1)蛋白表达情况并与 15只正常大鼠(对照组)比较。结果　山芝麻中 、高剂量组 α-SMA及TIMP-1
表达明显低于秋水仙碱组和模型组(P<0.05、P<0.01);亦明显低于低剂量组 , P<0.05。结论　山芝麻水提物可
抑制大鼠肝脏纤维组织的形成;其机制可能为降低 α-SMA、TIMP-1蛋白表达。
　　关键词:山芝麻 ,水提物;肝纤维化;α-平滑肌肌动蛋白;金属蛋白酶组织抑制因子-1
　　中图分类号:R512.62　　文献标志码:B　　文章编号:1002-266X(2010)07-0046-02
　　山芝麻系梧桐科植物山芝麻的根 ,主要作用为
清热解毒 ,主要用于感冒发热 、肺热咳嗽 、咽喉肿痛 、
麻疹等 。以往公开报道的对山芝麻的研究主要集中
在其化学成分的分离 、鉴定方面 ,对其药效学研究较
少 。 2009年 7月 ～ 12月 ,我们观察了山芝麻水提物
对大鼠肝纤维化的治疗作用 ,现分析结果并探讨其
机制。
1　材料与方法
1.1　材料　山芝麻水提物(山芝麻饮片 1 000 g,加
10倍量水提取 2次 ,每次 1.5 h,合并提取液 ,浓缩
至 500ml,即相当于 2g生药 /ml)。雄性 SD大鼠 90
只 ,体质量(200 ±10)g(广西医科大学实验动物中
心提供),试剂:四氯化碳(CCl4 ,成都市科龙化工试
剂厂批号:20090115)。秋水仙碱(昆明制药有限公
司产品 , 0.5 mg/片)。兔抗大鼠 α-平滑肌肌动蛋白
(α-SMA)多克隆抗体 、兔抗大鼠金属蛋白酶组织抑
制因子 -1(TIMP-1)多克隆抗体(均购自武汉博士德
生物工程有限公司)。
1.2　实验方法
1.2.1　模型制备及干预　100只 SD雄性大鼠 ,其
中 15只为正常组 ,其余 85只用 50%CCL4花生油溶
液 2 ml/kg灌胃每周 2次 ,分别于造模后第 5周 、第
6周及第 7周抽取 2只肝纤维化造模大鼠及 1只正
常组大鼠 ,进行病理学检查 ,监测肝纤维化形成的情
况 。病理检查证实造模成功后随机分为五组各 10
只 。模型组不用药;秋水仙碱组予秋水仙碱 1 mg/
kg灌胃 ,山芝麻高 、中 、低剂量组分别予 30、15、7.5
g/kg山芝麻水提物灌胃 ,给药容积为 1 ml/100g;另
15只正常大鼠为对照组 ,予等量生理盐水灌胃。均
每天 1次 ,连续 6周 。给药期间除导致组外 ,其余各
组断续给予 CCL4 ,每周 2次 ,直至实验结束。在最
后一次给药 24 h后 ,经乙醚麻醉内眦采血检测各项
指标 ,取肝左叶作生化及组织学检测。
1.2.2　肝组织 α-SMA、 TIMP-1检测　采用免疫组
化法 。各组均于第 6周末处死 ,取同一部位肝脏组
织于 10%福尔马林液中固定 、乙醇梯度脱水 、石蜡
包埋 、切片 ,厚度为 4 μm,经常规脱蜡脱水 ,用 3%
H2O2去除内源性过氧化物酶 ,用 0.1 mol/L枸椽酸
盐缓冲液微波处理 ,马血清封闭非特异性抗原 ,分别
滴加兔抗大鼠多克隆抗体 α-SMA(1∶150)、TIMP-1
(1∶150), 4 ℃过夜 ,阴性片以 PBS缓冲液代替一
抗 ,后依次加入羊抗兔抗体 IgG,用辣根酶标记的链
霉卵白素工作液进行反应 ,用显色剂 DAB显色 、脱
水 、透明 ,中性树胶封片 , 分别检测各组 α-SMA及
TIMP-1的表达情况 ,阳性片细胞胞质中出现棕黄
色 ,阴性片无着色。每张切片取 5个视野测定 α-
SMA及 TIMP-1蛋白阳性产物的积分光密度值 (A
值),取平均值 。
1.2.3　统计学方法　采用 SPSS13.0软件。数据
以 x±s表示 ,配对 t检验。 P≤0.05为差异有统计
学意义。
2　结果
2.1　α-SMA蛋白表达　对照组血管壁偶见 α-SMA
阳性表达。与对照组比较 ,模型组静脉 、汇管区 、纤
维间隔和邻近的肝窦分布大量的阳性表达细胞 ,多
数细胞有 3 ～ 5个较长突起 ,胞质呈棕黄色。与模型
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山东医药 2010年第 50卷第 7期
组比较 ,山芝麻中 、高剂量组和秋水仙碱组上述部位
阳性细胞数目显著减少 ,胞质阳性染色显著减轻 , α-
SMA表达明显降低(P<0.05或 P<0.01)。见表 1。
2.2　TIMP-1蛋白表达　正常组少数标本血管壁和
胆管壁周围有少量 TIMP-1阳性染色。模型组阳性
染色多集中于纤维间隔 、中央静脉周围 、肝窦处间
质 ,胞质呈棕黄色 。山芝麻中 、高剂量组和秋水仙碱
组在汇管区和纤维间隔中有少许淡黄色的阳性染
色 ,与模型组比较 , TIMP-1表达明显降低(P<0.05
或 P<0.01)。见表 1。
表 1　各组 α-SMA、TIMP-1蛋白表达(A值 , x±s)
组别 n α-SMA TIMP-1
模型组 10 9.673±2.263 8.873±1.269
秋水仙碱组 10 3.758±0.937■ 4.673±1.026■
山芝麻低剂量组 10 7.971±2.529 7.756±1.158
山芝麻中剂量组 10 4.752±0.978＊ 4.924±1.022＊
山芝麻高剂量组 10 4.326±0.848■ 4.397±1.038■
对照组 10 1.738±0.386 3.112±0.421
　　注:与模型组比较 , ＊P<0.05, ■P<0.01
3　讨论
α-SMA是肝星状细胞(HSC)激活的标志 ,激活
的 HSC可分泌多种细胞因子 ,其中转化生长因子-
β1(TGF-β1)是最强的致纤维化因子 ,具有抑制肝细
胞增殖 、诱导肝细胞凋亡 、激活 HSC、促进其产生
ECM、减少 ECM降解的作用[ 1, 2] 。 TIMPs是低相对
分子质量的糖蛋白 ,广泛分布于机体内的组织和体
液中 ,其中 TIMP-1为可溶性蛋白质分子 ,在肝纤维
化形成过程中 TIMP-1表达增强 ,可抑制 MMPs活
力 ,使 ECM降解减少 ,促使肝纤维化形成 , TIMP-1
增加的程度可反映肝纤维化的严重程度 [ 3] 。研究
发现 ,病损肝脏的 TIMP-1较正常肝脏明显增高 ,其
出现越早 , 升高幅度较大 , 病损程度越重 [ 4, 5] ;故
TIMP-1水平能反映肝纤维化程度 。本研究结果表
明 ,山芝麻组治疗后 α-SMA、TIMP-1表达明显低于
模型组 ,肝纤维化程度明显轻于模型组 ,且呈剂量依
赖性 。山芝麻治疗肝纤维化的可能机制为抑制
HSC的活化;降解过度生成的胶原纤维 。
综上所述 ,山芝麻水提物对肝纤维化有治疗作
用 ,能抑制肝纤维化的发生与发展 ,其机制可能为降
低 α-SMA、TIMP-1蛋白表达 。
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(收稿日期:2009-11-10)
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