全 文 ：檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
［参考文献］
［1］ 楼之岑，秦波 ．常用中药材品种整理和质量研究 ． 第二
册［M］．北京:北京医科大学、北京大学医学出版社，
1995:672．
［2］ 刘 玉 平 ． 刺 五 加 茶 ． 中 国:A23F3 /34;A61K35 /78;
A61P37 /02［P］． 2001-10-24．
［3］ 刈米达夫 ． 植物化学［M］． 杨本文译 ． 北京:科学出版
社，1985:135．
［4］ 孙卓然，刘圆，孟庆艳，等 ． RP-HPLC 测定四川产红毛
五加药材茎皮及叶中不同采收期绿原酸的含量［J］．
中国实验方剂学杂志，2009，15(2) :15．
［5］ 刘军海，裘爱泳 ． 绿原酸及其提取纯化和应用前景
［J］．粮食与油脂，2003，9:44．
［6］ 吴卫华，康桢，欧阳冬生，等 ． 绿原酸的药理学研究进
展［J］．天然产物研究与开发，2006，18(4) :691．
［7］ 林宏 ． 金银花药理研究进展［J］． 江西中医学院学报，
2009，21(6) :82.
［责任编辑 顾雪竹］
［收稿日期］ 20120319(007)
［基金项目］ 广东省中医药局科研课题(2010234)
［第一作者］ 黄勇红，实验师，硕士研究生，从事药物分析和药物制剂的教学及研究，Tel:020-28854900，E-mai:huangyh@ gdyzy． edu． cn
［通讯作者］ * 陈任宏 副教授，从事药学教学与科研，Tel:020-28854975，E-mail:chenrenhong306@ 163． com
飞扬草药材 HPLC指纹图谱研究
黄勇红，黄艳萍，陈任宏 *
(广东食品药品职业学院，广州 510520)
［摘要］ 目的:建立飞扬草药材的 HPLC 色谱指纹图谱。方法:采用 HPLC 以槲皮素、没食子酸及杨梅苷为对照物，
Platisil ODS C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，以乙腈-0. 05%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱，流速 1. 0 mL·min
－ 1，柱温
25 ℃，洗脱时间为 60 min，检测波长 360 nm。结果:检测了广东不同来源的 12 批飞扬草药材，确定 9 个共有色谱峰，相似度评
价结果表明，各产地飞扬草药材相似度均 ＞ 0. 90。结论:飞扬草 HPLC 指纹图谱可用于飞扬草药材的鉴别及质量控制。
［关键词］ 飞扬草;高效液相色谱;指纹图谱
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)16-0074-03
［网络出版地址］ http:/ / www． cnki． net / kcms / detail /11． 3495． R． 20120608． 1456． 018． html
［网络出版时间］ 2012-6-8 14:56
Study on Chromatography Fingerprints of Euphorbiae hirta by HPLC
HUANG Yong-hong，HUANG Yan-ping，CHEN Ren-hong*
(Guangdong Food and Drug Vocational College，Guangzhou 510520，China)
［Abstract］ Objective:To establish the chromatography fingerprint of Herba Euphorbiae hirtae by HPLC．
Method:HPLC was used with quercetin gallic acid and myricitrin as control samples． The sample are separated on
Platisil ODS C18 column (4. 6 mm × 250 mm，5 μm) with acetonitrile-0. 05% phosphoric acid as the mobile
phase，gradient elution，at the flow rate of 1. 0 mL·min － 1 at 25 ℃ ． The time of gradient elution is 60 min and the
UV detection is set at 360 nm． Result:Twelve samples of E． hirta in different origin of Guangdong were detected
and nine main marker peaks were selected in the standard fingerprint． The similarity of samples is all over
0. 90. Conclusion:The HPLC fingerprint can be used for identification of E． hirta as well as quality control．
［Key words］ Euphorbiae hirtae;HPLC;fingerprint
·47·
第 18 卷第 16 期
2012 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 16
Aug．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.16.072
飞扬草又名大飞扬草、大飞羊、大乳草、金花草
等，为大戟科植物飞扬草的全草或带根全草，为一年
生草本植物，广泛分布于广东、广西、福建等地区，全
草主要含黄酮苷、酚类、三萜等成分［1］，具有清热、
解毒、通乳、渗湿、杀虫止痒功效［2］，可用于治疗肠
炎、菌痢、上呼吸道感染、尿路感染，还可通乳、消肿，
治疗各种出血，外治皮炎、湿疹、顽癣等［3-4］。其酚
类成分中含有没食子酸、槲皮苷、杨梅苷等多种成
分［5］，目前关于其主要有效成分之一槲皮苷含量测
定方法的报道有很多［6-7］，也有见其总黄酮含量测
定方法的报道［8］，但未有对其指纹图谱研究的报
道。本文采用高效液相色谱法，以槲皮素、没食子
酸、杨梅苷为对照品，建立了广东地区 12 批飞扬草
药材的指纹图谱，为飞扬草药材的质量控制提供
依据。
1 仪器与试药
Agilent1100 型高效液相色谱仪(美国，配有
DAD) ，Sartorius BP211D 型电子天平(0. 01 mg) ，
Platisil ODS C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，
KQ-500E 型超声清洗器(昆山市超声仪器有限公
司)。
乙腈(色谱纯) ，超纯水(自制) ，其他试剂均为
分析纯。槲皮素对照品(批号 100081-200406) ，没
食子酸对照品(批号 100081-200406) ，杨梅苷对照
品(批号 100081-200406) ，对照品均购于中国药品
生物制品检定所，12 批飞扬草药材产地见表 1。所
有药材经广东省中药研究所汪小根教授鉴定为
Euphorbia hairta L．。
表 1 飞扬草药材来源
编号 样品来源 采集时间 编号 样品来源 采集时间
S1 广州龙洞 2010-07 S7 广东德庆 2010-07
S2 广州从化 2010-07 S8 广东罗定 2010-07
S3 广东佛冈 2010-05 S9 广东阳江 2010-06
S4 广东清远 2010-05 S10 广东普宁 2010-06
S5 广州罗岗 2010-06 S11 广东白云区 市售
S6 广东连州 2010-07 S12 广州白云区 市售
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Platisil ODS C18色谱柱(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm)。流动相乙腈(A)-0. 05%磷酸溶液
(B)梯度洗脱(0 ～ 10 min，15% A，10 ～ 20 min，
15% ～ 25% A，20 ～ 30 min，25% ～ 40% A，30 ～
40 min，40% ～ 50% A，40 ～ 50 min，50% ～ 5% A，
50 ～ 60 min，5% A) ，记录时间为 60 min。流速 1. 0
mL·min － 1，柱温 25 ℃，检测波长 360 nm，进样体积
10 μL，理论塔板数不低于 8 000。
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 对照品溶液的制备 精密称取槲皮素、没食
子酸、杨梅苷对照品，加甲醇分别配制成 0. 3 g·L － 1
的溶液，0. 45 μm 微孔滤膜滤过作为对照品溶液。
2. 2. 2 供试品溶液的制备 称取飞扬草药材粉末
5 g(粗粉) ，加 80%乙醇 40 mL 回流 1. 5 h 共 2 次，
放冷，过滤，合并滤液蒸干，残渣用甲醇溶解并定容
于 10 mL 量瓶中。临用前过 0. 45 μm 微孔滤膜滤
过，取续滤液作为供试品溶液。
2. 3 方法学考察
2. 3. 1 分析时间的确认 精密吸取供试品溶液 10
μL 注入高效液相色谱仪，记录 100 min 色谱图，发
现 50 min 后无色谱峰，故把分析时间定为 60 min。
2. 3. 2 精密度试验 取 S1 供试品溶液，连续进样
6 次，分别对共有峰的相对保留时间和相对峰面积
进行考察。结果表明，各共有峰的相对保留时间
RSD ＜ 0. 4%;相对峰面积 RSD ＜ 3. 0%，符合指纹图
谱分析要求。
2. 3. 3 稳定性试验 取 S1 供试品溶液，分别于 0，
2，4，6，12 h 进样分析，考察其共有峰的相对保留时
间和相对峰面积。结果表明，各共有峰相对保留时
间 RSD ＜ 0. 4%，相对峰面积 RSD ＜ 3. 0%，表明供试
品溶液在 12 h 内基本稳定。
2. 3. 4 重复性试验 取 S1 供试品药材粉末 5 份，
按已确定指纹图谱方法制备供试品溶液，分别对共
有峰的相对保留时间和相对峰面积进行考察。结果
表明，各共有峰相对保留时间 RSD ＜ 0. 4%，相对峰
面积 RSD ＜ 3. 0%，符合指纹图谱分析要求。
2. 4 指纹图谱建立及相似度分析 取不同产地的
飞扬草药材，按 2. 2 项下方法制备供试品溶液，各取
10 μL 分别进样，按 2. 1 项色谱条件进行 HPLC 分
析，建立指纹图谱。以峰 5 为参比峰，飞扬草的
HPLC 指纹图谱中 9 个共有峰作为构成指纹图谱稳
定的特征峰，同时将所得到的色谱图数据导入指纹
图谱评价系统，进行色谱峰匹配，建立飞扬草指纹图
谱共有模式，并计算相似度。按上述色谱条件分别
将 12 批供试品进样分析，记录色谱图(图 1)。经统
计共有峰面积占总峰面积百分比为 80% ～ 90%，非
共有峰面积与总峰面积的百分比 ＜ 20%。符合指纹
图谱研究的非共有峰占总峰面积百分比 ＜ 10%的技
术要求。
将 12 批药材图谱数据导入中药色谱指纹图谱
·57·
黄勇红，等:飞扬草药材 HPLC 指纹图谱研究
图 1 12 批飞扬草药材指纹图谱
表 2 相似度分析
样品号 相似度 样品号 相似度
S1 0. 977 S7 0. 907
S2 0. 968 S8 0. 940
S3 0. 943 S9 0. 936
S4 0. 957 S10 0. 907
S5 0. 908 S11 0. 902
S6 0. 978 S12 0. 966
2. 没食子酸;3. 杨梅苷;5. 槲皮素
图 2 飞扬草药材指纹图谱共有色谱峰的标定
相似度评价系统软件，自动匹配后生成对照图谱，以
此作为飞扬草药材的对照指纹图谱，进行相似度评
价，其计算结果见表 2，生成的共有模式对照指纹图
谱见图 2。12 批样品的相似度计算结果均 ＜ 0. 9，说
明各产地的药材有较好的一致性。
3 讨论
3. 1 波长的选择 采用 DAD 全波长扫描，并采集
其三维色谱图，通过综合考虑该三维色谱图在所有
波长下出峰的多少，和各成分的分离情况以及各色
谱峰的丰度，最后选定检测波长 360 nm。
3. 2 流动相的确定 选择了 3 种流动相系统及其
不同比例进行比较，包括甲醇-水、乙腈-水以及乙腈-
0. 05%磷酸。结果表明，各种流动相中以乙腈-
0. 05%磷酸系统为最佳，其图谱上各个色谱峰的分
离度较好，保留时间适中，因此选此流动相系统作为
飞扬草 HPLC 指纹图谱检测的流动相。
3. 3 色谱柱的考察 选择了 3 种不同填料、规格及
厂家的色谱柱进行比较，包括 Platisil C18(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm) ，Shim-pack VP ODS(4. 6 mm × 250
mm，5 μm)以及 Agilent Zorbax SB (4. 6 mm × 250
mm，5 μm)。结果表明，各种色谱柱中以 Platisil C18
为最佳，所得色谱图峰数目较多，峰面积较大，分离
度良好，因此选此色谱柱作为飞扬草 HPLC 指纹图
谱检测的色谱柱。
3. 4 提取方法的考察 选择了超声提取和回流提
取进行比较，结果表明回流提取色谱峰较多。对提
取溶剂和提取时间进行考察，结果表明以 80%乙醇
提取 2 次色谱峰较多，干扰较少，基线稳定。
3. 5 与对照药材的比对 根据所得的共有模式，将
飞扬草对照药材色谱图与共有模式进行相似度计
算，以检查共有模式是否正确。经过同样的谱图处
理后，计算了其与共有模式的相似度。结果显示，各
产地飞扬草药材之间相似度均 ＞ 0. 90，说明该共有
模式可用于飞扬草药材的检测。
［参考文献］
［1］ 谢贤强，吴萍，林立东，等 ． 飞扬草化学成分的研究
［J］． 热带亚热带植物学报，2007，15(5) :450．
［2］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会 ．中华本草 ．第 2
册［M］．上海:上海科学技术出版社，1999:648．
［3］ 杨梅 ． 飞扬草的应用［J］． 中国民族民间医药杂志，
2006(2) :121．
［4］ 章佩芬，罗焕敏 ． 飞扬草药理作用研究概况［J］． 中药
材，2005，28(5) :437．
［5］ 陈玲 ．飞扬草叶中的多酚类成分研究［J］． 中国中药杂
志，1991，16(1) :38．
［6］ 林焕泽，吴秀荣 ． 高效液相色谱法测定飞扬草中槲皮
苷的含量［J］．中国医院药学杂志，2006，26(8) :1032．
［7］ 马春婷 ． 伍思强 ． 高效液相色谱法测定飞扬草中槲皮
苷的含量［J］．今日药学，2009，19(10) :26．
［8］ 潘代勇 ． 分光光度法测定大飞扬草中总黄酮的含量
［J］．中国药物与临床，2010，10(5) :541．
［9］ 谭超元，王海波，王东，等 ．钩藤饮片 HPLC 指纹图谱研
究［J］．中国实验方剂学杂志，2012，18(1) :63.
［责任编辑 顾雪竹］
·67·
第 18 卷第 16 期
2012 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 16
Aug．，2012