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的色谱峰［７］。
对比了中性和低极性毛细管柱，结果发现，Ｒｔｘ－５
低极性毛细管柱的分离效果比较好。在程序升温过
程中，升温速度不能太快，否则难以使各种单糖较好
地分离测定。比较了３０∶１和１０∶１两种不同的分
流比，发现当分流比为３０∶１时，峰高较低，峰面积较
小。当把分流比改为１０∶１后，峰高增高、峰面积变
大。故选用分流比为１０∶１。
采用与标准单糖色谱保留时间对照的方法对新
疆药桑叶多糖中单糖种类进行定性实验。测定结果
表明，新疆药桑叶多糖中含有鼠李糖、阿拉伯糖、木
糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖。
参考文献：
［１］　张帆，刘宏炳，田树革，等．药桑中黄铜和多糖的超声提
取与含量测定［Ｊ］．西北药学杂志，２００８，２３（５）：２８２－２８３．
［２］　金春艳，张玲，高兴，等．桑叶酸性蛋白多糖抗氧化作用
的实验研究［Ｊ］．食品科学，２００７，２８（２）：２８４．
［３］　吴胜芳，王树英，汤坚．桑叶的生物功能特性及其应用
［Ｊ］．食品科技，２００３（１０）：９５－９７．
［４］　孙莲，孟磊，阎超，等．桑叶的降血糖活性成分和药理作
用［Ｊ］．中草药，２００２，３３（５）：４７１－４７３．
［５］　赵骏，高岚．桑叶多糖的降糖降脂作用［Ｊ］．天津中医药，
２００４，２１（６）：５０５－５０６．
［６］　欧阳臻，常钰，李永辉，等．桑叶多糖的提取纯化及其含
量测定［Ｊ］．时珍国医国药，２００５，１６（１０）：９６１－９６２．
［７］　陶乐平，丁在富，张部昌．气相色谱在多糖结构测定中的
应用［Ｊ］．色谱，１９９４，１２（５）：３５１－３５４．
（收稿日期：２０１２－０５－０４）
飞龙掌血提取物体外抗氧化活性研究
陈小雪，龙盛京＊（广西医科大学药学院，南宁 ５３００２１）
摘要：目的　研究飞龙掌血体外不同极性部位的抗氧化作用。方法　采用Ｆｅｎｔｏｎ法、ＤＰＰＨ自由基法、硫代巴比妥酸（ＴＢＡ）法，
测定飞龙掌血总提取物（ＴＥＦ）、石油醚萃取相（ＰＥＦ）、乙酸乙酯萃取相（ＥＡＦ）、正丁醇萃取相（ＮＢＦ）和剩余水相（ＷＦ）的抗氧化
活性。结果　ＴＥＰ、ＰＥＦ、ＥＡＦ、ＮＢＦ和 ＷＦ对羟基自由基、ＤＰＰＨ 自由基均有较好的清除作用，且对自由基的清除效率与提取
物质量浓度有一定量效关系；适当质量浓度的ＴＥＰ、ＰＥＦ、ＥＡＦ、ＮＢＦ对脂质过氧化有较强的抑制作用，高浓度 ＷＦ对脂质过氧
化有诱导作用。结论　飞龙掌血提取物具有体外抗氧化作用，可被开发成天然的抗氧化剂。
关键词：飞龙掌血；自由基；抗氧化活性
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４－２４０７．２０１３．０１．０１１
中图分类号：Ｒ２８　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００４－２４０７（２０１３）０１－００２７－０３
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　Ｔｏｄｄａｌｉａ　ａｓｉａｔｉｃａ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ
ＣＨＥＮ　Ｘｉａｏｘｕｅ，ＬＯＮＧ　Ｓｈｅｎｇｊｉｎｇ＊（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｏｌｅｇｅ，Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ　５３００２１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｏｄｄａｌｉａ　ａｓｉａｔｉｃａｅｘｔｒａｃｔｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄ　Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｔｏｔａｌ　ｅｘｔｒａｃｔｉｖｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎ（ＴＥＦ），ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ　ｅｔｈｅｒ　ｆｒａｃｔｉｏｎ（ＰＥＦ），ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎ（ＥＡＦ），ｎ－ｂｕｔａｎｏｌ　ｆｒａｃｔｉｏｎ（ＮＢＦ）ａｎｄ　ｗａｔｅｒ
ｆｒａｃｔｉｏｎ（ＷＦ）ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　Ｆｅｎｔｏｎ，ＤＰＰＨ　ａｎｄ　ＴＢＡ　ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｒｅｓｕｌｔ　ＴＥＰ，ＰＥＦ，ＥＡＦ，ＮＢＦ　ａｎｄ　ＷＦ　ｓｈｏｗｅｄ　ａｎ－
ｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｅｌｉｍｉｎａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｈｙｄｒｏｘｙｌ　ｒａｄｉｃａｌ（·ＯＨ）ａｎｄ　ＤＰＰＨ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌｓ（ＤＰＰＨ·），ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｉｎ－
ｃｒｅａｓｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｉｎｃｒｅａｓｅ；ａｎｄ　ｍｏｄｅｒａｔｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＴＥＰ，ＰＥＦ，ＥＡＦ，ＮＢＦ　ｈａｄ　ａ　ｓｔｒｏｎｇｅｒ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ
ｏｎ　ｌｉｐｉｄ　ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ，ｈｉｇｈ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＷＦ　ｈａｄ　ａｎ　ｉｎｄｕｃｉｎｇ　ｌｉｐｉｄ　ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｏｄｄａｌｉａ　ａｓｉａｔｉｃａ　ｅｘｔｒａｃｔｓ
ｓｈｏｗｅｄ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ，ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｅｘｐｌｏｉｔｅｄ　ａｓ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｓｏｕｒｃｅｓ　ｏｆ　ｎａｔｕｒａｌ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ　ｆｏｒ　ｐｌａｎｔ－ｂａｓｅｄ　ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　ｉｎｄｕｓ－
ｔｒｉｅｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｔｏｄｄａｌｉａ　ａｓｉａｔｉｃａ；ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ
作者简介：陈小雪，女，在读硕士研究生
＊通信作者：龙盛京，男，教授
　　自由基是活性氧、活性氮的重要组成部分，在细
胞新陈代谢和机能活动中产生，在细胞凋亡、基因表
达与离子运输等中扮演重要的角色［１］。抗氧化成分
可以清除这些自由基，能够预防上述疾病的发生发
展，而从中草药中提取与分离抗氧化剂是其有效途径
之一。
飞龙掌血为芸香科植物，是民间常用的一种植物
药，《中国民族药志》记载了布依族、傣族、哈尼族、景
颇族、拉祜族、苗族、土家族、佤族、瑶族和壮族的用药
经验。在肯尼亚，飞龙掌血果实用于治疗咳嗽，根用
于治疗消化不良和风湿，叶子也用于治疗肺病和风湿
病［２］。在日本冲绳岛，飞龙掌血作为传统药茶，还有
其具有抗Ａ型流感病毒活性的报道［３］。
１　仪器与材料
１．１　仪器　７２２Ｎ型分光光度计（上海精科实业有限
公司）；ＫＱ－３００ＤＥ型数控超声波清洗器（昆山市超声
７２西北药学杂志　２０１３年１月　第２８卷　第１期
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仪器有限公司）；８００型离心沉淀器（上海手术器械十
厂）；旋转蒸发仪Ｒ－１００１Ｎ、ＤＺＦ－真空干燥箱。
１．２　试药　飞龙掌血Ｔｏｄｄａｌｉａ　ａｓｉａｔｉｃａ（Ｌｉｎｎ．）Ｌａｍ
采自广西南宁百济乡，由广西医科大学药学院生药教
研室朱丹鉴定。１，１０－菲啰啉，成都市科龙化工试剂
厂；ＤＰＰＨ（２，２－ｄｉｐｈｅｎｙｌ－１－ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙ１），购自Ｓｉｇｍａ
公司；２－硫代巴比妥酸、考马斯亮蓝Ｇ２５０、牛白蛋白，国
药集团化学试剂有限公司；Ｌ－半胱氨酸，天津市光复精
细化工研究所；其余试剂均为国产分析纯。
１．３　动物　ＳＤ大鼠，体质量２００～３００ｇ，由广西医
科大学实验动物中心提供。
２　方法
２．１　提取物溶液的制备　称取飞龙掌血茎１００ｇ，加
７０％乙醇超声提取（功率１５０Ｗ，频率４０ｋＨｚ）３次，
每次８００ｍＬ、３０ｍｉｎ，合并３次的提取液，滤过。滤
液减压浓缩得总浸膏，一分为二；一份为总提取物
（ＴＥＦ），另一份加入适量水分散后，依次用石油醚、乙
酸乙酯和正丁醇萃取，各萃取组分经减压浓缩得到石
油醚（ＰＥＦ）、乙酸乙酯（ＥＡＦ）、正丁醇（ＮＢＦ）和剩余
水相（ＷＦ）４个组分。
２．２　对羟基自由基（·ＯＨ）清除能力的测定　采用
Ｆｅｎｔｏｎ反应原理法［４］，量取１ｍｍｏｌ·Ｌ－１　１，１０－菲啰
啉溶液１ｍＬ于试管中，加入０．２ｍｍｏｌ·Ｌ－１的磷酸
盐缓冲液２ｍＬ（ｐＨ　７．４），充分混匀，再加入１ｍＬ
新配制的１ｍｍｏｌ·Ｌ－１硫酸亚铁溶液，混匀后加入１
ｍＬ蒸馏水，最后加入１ｍＬ新配制的１ｍＬ·Ｌ－１双
氧水启动反应，于３７℃ 水浴反应６０ｍｉｎ后，在５１０
ｎｍ处测吸光度（Ａ）。损伤管测值为Ａ１；样品管（Ａ２）
以１ｍＬ样品代替蒸馏水；未损伤管（Ａ０）以蒸馏水代
替双氧水。同时在相同条件下测定抗坏血酸（ＶＣ）对
羟基自由基的清除作用，作阳性对照。
羟自由基清除率＝［（Ａ２－Ａ１）／（Ａ０－Ａ１）］×１００％
２．３　提取物对ＤＰＰＨ 自由基的清除作用［５］　将飞
龙掌血各提取物及ＶＣ用甲醇分别配成一系列质量
浓度。分别取各质量浓度的试样１．００ｍＬ于试管
中，每支试管各加入３０ｇ·ｍＬ－１　ＤＰＰＨ甲醇溶液４
ｍＬ均匀混合，在室温下避光静置４０ｍｉｎ。以甲醇调
零，于５１７ｎｍ处测定其Ａ。空白对照组采用甲醇替
代ＤＰＰＨ 溶液。
ＤＰＰＨ自由基清除率＝［１－（Ａ１１－Ａ１０）／Ａ１２］×１００％
　　式中：Ａ１０为空白对照；Ａ１１为样品管；Ａ１２为阴性
对照。
２．４　抗脂质过氧化活性的测定　ＳＤ大鼠禁食１２ｈ后，
断头处死取肝，立即用４℃内含蔗糖０．２５ｍｏｌ·Ｌ－１的
ＰＢＳ（磷酸盐缓冲溶液ｐＨ７．４）冲洗３次，称质量。剪
碎，加入预冷的ＰＢＳ缓冲液４０ｍＬ低温匀浆，匀浆液
离心１０ｍｉｎ（３　０００ｒ·ｍｉｎ－１）；取上清液得肝粗线粒
体液，用考马斯亮蓝法测定蛋白含量后［６］，分装冷冻
储存。临用时，根据匀浆液蛋白含量，用ＰＢＳ溶液稀
释成蛋白含量为４ｇ·Ｌ－１的肝匀浆供试液。
Ｆｅ２＋ －半胱氨酸诱发的肝匀浆脂质过氧化反应测
定方法［７］，取肝匀浆储备液１ｍＬ，加入不同质量浓度
的测试样品溶液１ｍＬ，再加１ｍｍｏｌ·Ｌ－１硫酸亚铁
０．１０ｍＬ、０．０１ｍｏｌ·Ｌ－１　Ｌ－半胱氨酸０．０２ｍＬ，无糖
ＰＢＳ溶液补足到相同体积，混匀，３７℃水浴２０ｍｉｎ。
再加入２ｍＬ　２００ｍＬ·Ｌ－１醋酸终止反应，最后加入
１ｍＬ　６．７ｍＬ·Ｌ－１　ＴＢＡ，混匀，沸水中加热２０ｍｉｎ，
冷却，３　０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ。取上清液于５３５
ｎｍ处测吸光度值Ａ，以获取脂质过氧化物终产物丙
二醛含量。空白管不加ＴＢＡ。并以０．１ｍＬＴＥＰ（５０
μｍｏｌ·Ｌ
－１）产生的丙二醛作为标准，求出丙二醛的
生成量和抑制率。
抑制率＝［（Ａ２２－Ａ２１）／（Ａ２２－Ａ２０）］×１００％
式中：Ａ２０为空白管的吸光值；Ａ２１为样品管的吸
光值；Ａ２２为对照管的吸光值。
２．５　统计学方法　每次实验均设３个平行管，取平
均值为１次实验数据，实验重复３次，采用ＳＰＳＳ　１３．０
软件处理，所有数据以珚ｘ±ｓ表示，并计算出各个提取
物的回归方程及半数抑制质量浓度。
３　结果
３．１　对·ＯＨ 自由基的清除作用　见图１。由图１
可以看出，飞龙掌血各提取物均显示出了羟基自由基
清除活性，并与溶剂的极性有一定的相关性，ＰＥＦ活
性较低，ＮＢＦ显示了很强的羟基自由基清除活性，比
ＴＥＦ清除活性略高，但都低于ＶＣ的活性，并且各提
取物浓度增加其清除效果亦增强。当ＴＥＦ、ＮＢＦ质
量浓度为５ｍｇ·ｍＬ－１清除率可以达到８０％以上。
·ＯＨ由芬顿反应体系Ｆｅ２＋（ｏｒ　Ｃｕ２＋）／Ｈ２Ｏ２ 产生，
在水溶液中孵化ＦｅＳＯ４ 和 Ｈ２Ｏ２。因此，抗氧化剂清
除羟基能直接清除或螯合自由金属离子预防羟基的
形成，Ｈ２Ｏ２ 转变成其他无害的化合物。
图１　不同极性萃取部位对羟基自由基的清除作用（珔ｘ±ｓ，ｎ＝５）
Ｆｉｇ．１Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｏｒ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｔｈｅ　ｈｙｄｒｏｘｙｌ
ｒａｄｉｃａｌ（·ＯＨ）（珔ｘ±ｓ，ｎ＝５）
８２ 西北药学杂志　２０１３年１月　第２８卷　第１期
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３．２　对ＤＰＰＨ自由基的清除作用　从图２可以看
出，在一定质量浓度范围内，ＤＰＰＨ 的清除率（Ｙ）与
各部位的质量浓度 （Ｘ）呈近似线性关系，如表１所
示。各提取物对ＤＰＰＨ自由基的清除能力有明显的
剂量依赖性。其中以ＥＡＦ的清除率为最高，ＩＣ５０值
为０．０４０　９２ｍｇ·ｍＬ－１，ＰＥＦ活性较低。由于ＥＡＦ、
ＮＢＦ都为粗品，如果对其中的抗氧化成分采用适当
的方法进行进一步的纯化，其对ＤＰＰＨ 的清除活性
有望更强。
表１　飞龙掌血不同极性萃取部位对 ＤＰＰＨ自由基的清除
作用（珔ｘ±ｓ）
Ｔａｂ．１Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｏｒ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｔｈｅ　ＤＰＰＨ
ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｌ（·ＯＨ）（珔ｘ±ｓ）
组分 回归方程 ｒ　 ＩＣ５０值／ｍｇ·ｍＬ－１
总提取物 Ｙ＝８．７４７＋５２６．３５０　Ｘ　 ０．９９２　１　 ０．０７８　３８
石油醚萃取物 － － －
乙酸乙酯萃取物 Ｙ＝２０．２４８＋７２７．０００Ｘ　 ０．９９１６　 ０．０４０　９２
正丁醇萃取物 Ｙ＝８．２６８＋７１８．５００　Ｘ　 ０．９８８８　 ０．０５８　０８
剩余水相 Ｙ＝３．７４４＋３８２．０００Ｘ　 ０．９９５　４　 ０．１２１　１０
ＶＣ　 Ｙ＝５．６６５＋３　７３９．７５０　Ｘ　０．９９２　４　 ０．０１１　８６
　注：－为量效关系非线性，无相应的数值
３．３　对脂质过氧化的抑制作用　由图２可以看出，
适当质量浓度的ＴＥＰ、ＰＥＦ、ＥＡＦ、ＮＢＦ有较强的抗脂
质过氧化作用，当ＴＥＦ质量浓度为１．０ｍｇ·ｍＬ－１的
时，最大抑制率可达到６６．７８％。但高质量浓度 ＷＦ
对脂质过氧化有诱导作用，其作用机制并不明了，有
待进一步研究。
图２　不同极性萃取部位对脂质过氧化的抑制作用（珔ｘ±ｓ，ｎ＝７）
Ｆｉｇ．２Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｏｒ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｌｉｐｉｄ　ｐｅｒｏｘ－
ｉｄａｔｉｏｎ（珔ｘ±ｓ，ｎ＝７）
４　讨论
抗氧化剂中和自由基通过接受或贡献电子清除
孤对电子。但是，合成抗氧化剂由于有致癌作用在药
物制剂中并不是首选。因此，寻找和识别天然安全的
抗氧化剂，尤其是来源于植物的，这几年有显著地增
加。Ｆｅｎｔｏｎ反应法和ＤＰＰＨ·清除方法常用于评估
化合物的抗氧化活性。本实验通过对飞龙掌血不同
极性部位清除羟基自由基、ＤＰＰＨ自由基、抗脂质过
氧化活性的测定研究，为寻找和追踪飞龙掌血有效的
抗氧化活性物质提供实验依据。实验结果发现５个
部分在低和高质量浓度时，均有一定的清除羟基自由
基、ＤＰＰＨ自由基的能力，其中以ＥＡＦ、ＮＢＦ的清除
率最高。此外，适当质量浓度的ＴＥＰ、ＰＥＦ、ＥＡＦ和
ＮＢＦ有较强的抗脂质过氧化作用，但高质量浓度
ＷＦ对脂质过氧化有诱导作用。虽然飞龙掌血植株
的抗氧化活性比抗坏血酸低，与文献中其他天然植物
的抗氧化活性比较，也比某些天然植物的抗氧化活性
低，但作为天然抗氧化物质，有进一步综合开发研究
的价值。
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Ｌｙｇｏｄｉｕｍ　ｊａｐｏｎｉｃｕｍ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ ［Ｊ］．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ　Ｐｏｌｙｍ，
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ｐａｃｉｔｙ　ａｎｄ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｉｐｉｄ　ｏｘｉｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｗｉｎｅｓ，ｇｒａｐｅ
ｊｕｉｃｅｓ　ａｎｄ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｉｃ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ
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（收稿日期：２０１２－０６－２２）
９２西北药学杂志　２０１３年１月　第２８卷　第１期