全 文 ：飞龙掌血的 HPLC指纹图谱研究
刘志刚 1, 2 ,刘晓燕 1 ,秦晋颖 1
(1.贵阳学院 ,贵州 贵阳 550005;2.沈阳药科大学药学院 ,辽宁 沈阳 110016)
　　摘要　目的:建立飞龙掌血的高效液相色谱指纹图谱 , 评价不同来源飞龙掌血药材的内在质量。方法:采用
HPLC梯度洗脱的方法建立飞龙掌血的指纹图谱 , “相似度评价软件”进行数据处理 , 据此对不同来源和部位的药材
进行比较分析。结果:建立了飞龙掌血药材的 HPLC指纹图谱 , 标定了 20个共有峰;方法的精密度 、重现性和稳定
性良好 ,符合指纹图谱相关要求 。结论:飞龙掌血不同部位的内在质量差别较大 , 该方法可用于飞龙掌血的真伪鉴
别和质量评价。
关键词　飞龙掌血;高效液相色谱;指纹图谱
中图分类号:R282.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2010)08-1240-04
收稿日期:2009-11-24基金项目:贵阳学院 2007年度青年教师课题作者简介:刘志刚(1976-),男 ,讲师,在读博士研究生 ,主要从事药物分析教学与相关研究工作;E-mail:zhi gang liu@163.com。
　　飞龙掌血别名见血飞 ,为芸香科飞龙掌血属植
物飞龙掌血 ToddaliaasiaticaLam.的干燥根或根
皮 ,具有活血化瘀 、止痛止血 、驱风除湿之功效 ,用于
治疗跌打损伤 、风湿性关节炎及多种痛症 、血症 ,是
贵州苗族常用药物〔1〕。现代研究表明其主要含有
生物碱类和香豆素类等化学成分 ,具有抗病原微生
物 、抗病毒 、抗内毒素等药理作用 〔2-5〕。目前 ,对飞龙
掌血质量控制方法的研究报道较少〔6, 7〕 ,且局限于
对单个化学成分的含量测定 ,本研究首次建立了飞
龙掌血药材的 HPLC指纹图谱 ,为飞龙掌血药材的
全面质量评价提供依据 。
1　仪器与材料
SHIMADZU高效液相色谱仪:LC-10AT输液泵 ,
SPD-10A紫外检测器 , WML2010 V5.07色谱工作
站;万分之一电子分析天平(SHIMADZU)等。
10批飞龙掌血药材分别采集于贵阳市花溪区
和南明区 ,经贵阳学院高蓬明副教授鉴定均为芸香
科植物飞龙掌血 ToddaliaasiaticaLam.的干燥根。
药材来源见表 1。白屈菜红碱(纯度 98%,批号:
0839-9908)对照品购于中国药品生物制品检定所 ,
茴芹香豆素对照品自制得到 ,经过光谱及色谱法检
测 ,纯度大于 98.0%。乙腈(色谱纯 , MERCK),冰
醋酸(分析纯),水为重蒸水。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　色谱柱:DiamonsilC18(250 mm×
4.6 mm, 5 μm);流动相梯度洗脱程序见表 2;流速:
1.0 mL/min;检测波长:320 nm;进样量:20 μL。
2.2　对照品溶液的制备　取白屈菜红碱对照品适
量 ,精密称定 ,加甲醇制成浓度为 20 μg/mL的对照
品溶液 ,即得。
　表 1 　飞龙掌血药材样品来源
编号 样品名 采集地
1 飞龙掌血 ToddaliaasiaticaLam.贵州省贵阳花溪区
2 飞龙掌血 ToddaliaasiaticaLam.贵州省贵阳南明区
3 飞龙掌血 ToddaliaasiaticaLam.贵州省贵阳花溪区
4 飞龙掌血 ToddaliaasiaticaLam.贵州省贵阳花溪区
5 飞龙掌血 ToddaliaasiaticaLam.贵州省贵阳南明区
6 飞龙掌血 ToddaliaasiaticaLam.贵州省贵阳花溪区
7 飞龙掌血 ToddaliaasiaticaLam.贵州省贵阳花溪区
8 飞龙掌血 ToddaliaasiaticaLam.贵州省贵阳南明区
9 飞龙掌血 ToddaliaasiaticaLam.贵州省贵阳花溪区
10 飞龙掌血 ToddaliaasiaticaLam.贵州省贵阳花溪区
　表 2 　流动相梯度程序表
时间/min 乙腈/% 0.75%冰醋酸水溶液/%
0 10 90
30 25 75
60 50 50
90 50 50
2.3　供试品溶液的制备　精密称取飞龙掌血药材
粉末 0.5 g,加入适量甲醇浸泡过夜 ,超声提取 0.5
h,用甲醇定容至 100 mL,摇匀 ,用 0.45 μm滤膜过
滤 ,即得 。
2.4　精密度试验　取同一供试品溶液 ,在上述色
谱条件下 ,连续进样 5次 ,记录指纹图谱 ,结果各共
有峰的相对保留时间的 RSD均小于 3.0%,单峰面
积占总峰面积大于 10%的共有峰的相对峰面积的
RSD均小于 5.0%,采用国家药典委员会 “相似度评
价软件 ”进行评价 ,相似度均不小于 0.95,符合指纹
图谱要求。
2.5　重现性试验　取同一批飞龙掌血药材 5份 ,
分别制备供试品溶液 ,在上述色谱条件下测定指纹
·1240· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 33卷第 8期 2010年 8月DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2010.08.020
图谱 ,结果各共有峰的相对保留时间的 RSD均小于
3.0%,单峰面积占总峰面积大于 10%的共有峰的
相对峰面积的 RSD均小于 5.0%,相似度均不小于
0.95,符合指纹图谱要求。
2.6　稳定性试验　取同一供试品溶液 ,分别在 0、
3、8、12、24 h按上述色谱条件测定指纹图谱 ,供试品
溶液放置 24 h内相对保留时间的 RSD均小于
3.0%,单峰面积占总峰面积大于 10%的共有峰的
相对峰面积的 RSD均小于 5.0%,表明供试品溶液
在 24 h内稳定 。
图 1　飞龙掌血药材对照指纹图谱
11(S).白屈菜红碱(参照峰)　15.茴芹香豆素
　　表 3 　10批飞龙掌血样品共有峰的相对保留时间
峰号 样品编号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
1 0.29 0.28 0.29 0.28 0.29 0.29 0.29 0.29 0.29 0.29
2 0.31 0.30 0.30 0.31 0.30 0.30 0.31 0.30 0.30 0.31
3 0.36 0.36 0.36 0.35 0.36 0.36 0.36 0.35 0.36 0.36
4 0.40 0.41 0.40 0.39 0.40 0.41 0.40 0.39 0.40 0.41
5 0.47 0.46 0.46 0.47 0.45 0.47 0.46 0.46 0.47 0.45
6 0.54 0.54 0.53 0.54 0.54 0.54 0.54 0.53 0.54 0.54
7 0.57 0.58 0.58 0.56 0.57 0.58 0.58 0.56 0.57 0.58
8 0.62 0.62 0.61 0.62 0.62 0.62 0.61 0.62 0.62 0.62
9 0.87 0.87 0.86 0.86 0.87 0.87 0.87 0.86 0.86 0.87
10 0.91 0.91 0.91 0.91 0.92 0.91 0.91 0.91 0.91 0.92
11 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00
12 1.02 1.02 1.02 1.02 1.02 1.01 1.02 1.02 1.02 1.02
13 1.07 1.07 1.06 1.06 1.07 1.07 1.07 1.07 1.07 1.06
14 1.41 1.41 1.41 1.41 1.41 1.41 1.41 1.41 1.41 1.41
15 1.50 1.49 1.51 1.50 1.50 1.50 1.49 1.51 1.50 1.50
16 1.56 1.56 1.56 1.55 1.55 1.56 1.56 1.56 1.56 1.55
17 1.61 1.61 1.61 1.60 1.61 1.61 1.61 1.61 1.61 1.61
18 1.88 1.88 1.88 1.87 1.89 1.88 1.88 1.88 1.88 1.87
19 2.12 2.12 2.12 2.13 2.12 2.12 2.12 2.13 2.12 2.12
20 2.17 2.17 2.16 2.17 2.17 2.16 2.17 2.17 2.16 2.17
·1241·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 33卷第 8期 2010年 8月
2.7　指纹图谱及技术参数　分别取不同来源的飞
龙掌血药材按 “2.3”项下方法制备供试品溶液 ,注
入液相色谱仪 ,记录 95 min的 HPLC图谱 ,根据测
定结果建立了飞龙掌血药材的色谱指纹图谱共有模
式 ,标定了 20个共有峰(见图 1),通过对照品比较 ,
确定 11号峰为白屈菜红碱 , 15号峰为茴芹香豆素 ,
以 11号峰为参照物 ,分别计算各共有峰的相对保留
时间 ,结果见表 3。
2.8　指纹图谱相似度评价　采用国家药典委员会
“相似度评价软件 ”进行数据分析处理 ,以共有模式
为参照谱计算样品 1 ～ 10号的相似度分别为
0.990、 0.981、 0.986、 0.983、 0.971、 0.992、 0.989、
0.972、0.991、0.986, 10批不同来源飞龙掌血药材
的叠加指纹图谱见图 2。
图 2　10批飞龙掌血药材的叠加指纹图谱
S1 ～ S10.10批飞龙掌血药材样品
2.9　药材不同部位 HPLC指纹图谱比较　本实验
分别对飞龙掌血根部和根皮部的 HPLC指纹图谱
进行了初步研究 ,结果显示飞龙掌血根部与根皮
部色谱指纹图谱的整体面貌接近 , 但根部色谱指
纹图谱中色谱峰数目和峰面积均较根皮部有明
显减少 ,与共有模式的相似度低于 0.80。结果见
图 3。
图 3　飞龙掌血药材不同部位 HPLC指纹图谱比较
3　讨论
3.1　色谱条件的确立:通过实验比较了甲醇-水系
统 、乙腈 -水系统 ,在 “2.1”项下的流动相条件及梯度
洗脱条件下获得的色谱峰尖锐 ,基线平稳 ,分离度良
好 ,色谱峰信息丰富;分别比较了 230、 254、 280、
300、320 nm等检测波长下获得的色谱图 ,在 320 nm
处检测的峰数目较多 ,指纹图谱整体特征较好 ,故选
择在 320 nm处进行检测;分别对不同品牌和规格的
色谱柱进行比较 ,实验结果表明 ,以 DiamonsilC18
(250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱的整体分离效果较
满意。
3.2　供试品溶液制备方法的选择:分别比较了以
无水乙醇 、95%乙醇和甲醇为溶剂提取样品后所获
得的高效液相色谱指纹图谱特征 ,结果甲醇提取液
所得色谱峰的峰数明显较多 ,指纹图谱整体特征体
现的较好 ,超声提取法操作简便 、快速 。
3.3　通过对不同药用部位飞龙掌血药材的指纹图
谱研究 ,可以看出药材根部与根皮部色谱指纹图谱
的整体面貌接近 ,但根部色谱指纹图谱中色谱峰数
目和峰面积均较根皮部有明显减少 ,按照药典委员
会 “相似度评价软件”评价 ,药材根部色谱指纹图谱
与共有模式的相似度低于 0.80,特别是主要有效成
·1242· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 33卷第 8期 2010年 8月
分白屈菜红碱的含量差别巨大 ,表明飞龙掌血中以
生物碱为主体的活性成分主要富集在根皮部 ,根部
相对较少 。通过对药材指纹图谱相似度 、共有峰相
对保留时间的计算 ,结合有效成分的定量测定结果 ,
就能够更加全面有效地控制药物的质量 ,进而从源
头上确保制剂产品的质量。
参 考 文 献
[ 1] 国家中医药管理局《中华本草》编委会 .中华本草·苗
药卷 [ M] .贵阳:贵州科技出版社 , 2005:108-110.
[ 2] 南京中医药大学编 .中药大辞典 [ M] .第 2版 .上海:
上海科技出版社 , 2006:381-383.
[ 3] 郭书好 , 任先达 ,李素梅 , 等.飞龙掌血中心血管活性成
分的分离与鉴定 [ J].中药材 , 1998, 21(10):515-516.
[ 4] 郝小燕 ,彭琳 , 叶兰 .飞龙掌血生物总碱抗炎镇痛作用
的研究 [ J] .中西医结合学报 , 2004, 11(2):450-452.
[ 5] 王秋静 ,路航 , 吕文伟 .飞龙掌血水提物镇痛抗炎作用
的实验研究 [ J] .中国实验方剂学杂志 , 2007, 13(5):
35-37.
[ 6] 梁妍 ,黄俊 , 赵超 ,等.用高效液相色谱法测定飞龙掌血
中茴芹香豆素含量 [ J].贵阳医学院学报 , 2003, 28(6):
519-520.
[ 7] 郝小燕 ,曹晓红 , 梁妍 ,等.用高效液相色谱法测定飞龙
掌血中异茴芹香豆素含量 [ J] .中国中药杂志 , 2004, 29
(8):768-769.
建立品牌药品的近红外打假模型
张永耀 ,韩　莹 ,侯惠婵 ,胡世强
(广州市药品检验所 ,广东 广州 510160)
　　摘要　目的:建立品牌药品的近红外光谱技术判别模型 , 打击假冒品。方法:在一致性检验模型设置中 , 根据
不同品牌药品的各自情况 ,选取适当的数据前处理方式和波数谱段范围建立判别模型。结果:正品均在模型设定
的 CI限度范围内 ,而假冒品均在模型设定的 CI限度范围之外。 结论:建立品牌药品判别模型 ,可针对药品活性成
分和辅料成分的敏感谱区进行比较和分析 , 提高其专属性 ,扩大了对假冒品的鉴别范围。
关键词　品牌药品;近红外光谱法;打假模型
中图分类号:R282.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2010)08-1243-03
收稿日期:2010-02-18作者简介:张永耀(1952-),男 ,副主任药师 ,主要从事药品检验及质量标准的研究;Tel:13503098887, E-mail:zhangyongyao@gzfda.gov.cn。
　　不法分子往往选择高效高值高销量的品牌药品
进行假冒 ,从而获取更大经济利益 。假冒的药品不
仅对病患者造成了极大的伤害 ,同时 ,也严重损害了
生产企业和消费者的权益 ,扰乱了药品市场秩序 。
本文收集消渴丸 、咳喘顺丸 、舒筋健腰丸 、小柴
胡颗粒等品牌药品 ,采用近红外光谱法和数据分析
软件 , 在 OPUS光谱分析软件的 SetupConformity
Test模块中根据不同品牌药品的各自情况建立判别
模型 ,对建模样品光谱进行不同数据前处理 ,选取适
当的波数谱段范围 ,计算每个波长点吸收度的平均
值和标准偏差 ,将吸收度的平均值 ±标准偏差的若
干倍作为该波长点的可信区间(即 CI限度),然后
根据待测样品光谱的 CI值是否超出 CI限度可快速
判断待测样品是否可疑 。
1　仪器及材料
1.1　仪器　Matrix-F傅里叶变换近红外光谱仪 ,手
持光纤探头 , 铟镓砷(InGaAs)检测器 , OPUS5.0光
谱分析软件(德国 BRUKER公司);LC-20AT高效液
相色谱仪(日本岛津);LEICACME电光显微镜(德
国 Leica)。
1.2　材料　广州中一药业有限公司消渴丸 17批
(编号:1 ～ 17, 批号分别为:MY0074, MO7018,
MO1315, LY0077, LO0677, KO3189, MO0279,
MF0014, MO1383, MO1375, MO1367, MO1341,
MO0313, MO0287, MO7001, MO0295, MO1354);“消
渴丸 ”假冒品 4批 (编号:18 ～ 21 ,批号分别为:
LO0462 , LO0579, LO3073, LO5628)。广州陈李济药
厂咳喘顺丸 14批 (编号:22 ～ 35, 批号分别为:
TA1221 , TA1051, TA1031, TA1131, TA1011,
TA1081 , TA1141, TA1281, TA1091, TA1041,
NC1291, PC1641, TA1061, TA1101);“咳喘顺丸 ”假
冒品 3批 (编号:36 ～ 38, 批号分别为:PC1641,
PE2371, TL2831)。广州陈李济药厂舒筋健腰丸 10
批(编号:39 ～ 48,批号分别为:NB1221, NE1821,
NG2261, NB1181, NF2091, ND1681, NG2521,
NJ3261, ND1561 , NK3361);“舒筋健腰丸 ”假冒品 2
·1243·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 33卷第 8期 2010年 8月