全 文 ：HPLC-ELSD法测定瓜子金中瓜子金皂苷己的含量
焦晴晴 1 ,汪维云 1 ,苏　娟2 ,张卫东 2(1.安徽农业大学生命科学学院 , 安徽 合肥 230036;2.第二军医大学药学院天然药
物化学教研室 , 上海 200433)
[作者简介 ] 　焦晴晴(1984-), 女 ,硕士研究生.Tel:(021)81871331,
E-mail:jqq198408@sohu.com.
[通讯作者 ] 　汪维云.Tel:13866763366, E-mail:weiyunw@ 126.com.
　　[摘要 ] 　目的　建立测定瓜子金皂苷己的含量的方法 ,为瓜子金药材质量控制提供依据。方法　采用 HPLC-ELSD法;色谱
柱:SHISEIDOCapcelPakC18柱;流动相:乙腈-水(30：70),等度洗脱;流速:1.0ml/min;柱温:25 ℃, 检测器:蒸发光散射检测器。
结果　瓜子金中瓜子金皂苷己获得良好分离 ,在 0.346 ～ 3.460μg范围内呈现良好线性关系;精密度试验 RSD为 1.64%;重现性
试验 RSD为 2.12%;加样回收率为 99.85%。结论　建立了 HPLC-ELSD法测定瓜子金皂苷己的含量 ,方法简单可行。
[关键词 ] 　瓜子金皂苷己;高效液相色谱;蒸发光散射检测器
[中图分类号 ] 　R927.2　　　[文献标志码 ] 　A　　　[文章编号 ] 　1006-0111(2010)02-0137-03
DeterminationofpolygalasaponinFinPolygalajaponicabyHPLC-ELSDmethod
JIAOQing-qing1 , WANGWei-yun1 , SUJuan2 , ZHANGWei-dong2(1.ColegeofLifeScience, AnhuiAgriculturalUniversity, Hefei
230036, China;2.DepartmentofNaturalMedicinalChemistry, SecondMilitaryMedicalUniversity, Shanghai200433, China)
[ Abstract] 　Objective　 ToestablishanefectivequalitycontrolmethodofthetraditionalChinesemedicine———Polygalaja-
ponicaHout.Methods　 HPLC-ELSDmethodwasadoptedforthedeterminationofpolygalasaponinFinPolygalajaponicaHout.The
analysiswasperformedonaSHISEIDOCapcelPakC
18
(4.6mm×250mm, 5μm)astheanalyticalcolumn, acetonitrile-water(30：
70, v/v)asthemobilephase.Theflowratewas1.0ml/min.Thecolumntemperaturewasat25℃.Results　Thevalidationwascar-
riedoutandthelinearity(r2 =0.999 8)between0.346μgand3.460 μgandrecovery(99.85%)wereacceptable.Theprecision
andreproducibilitywereevaluatedwithRSDvalues1.64%and2.12%, respectively.Conclusion　Thismethodissimpleandfeasi-
bleforthedeterminationofpolygalasaponinFinPolygalajaponicaHout.
[ Keywords] 　PolygalasaponinF;HPLC;ELSD
　　瓜子金药材来源于远志科远志属植物瓜子金
(PolygalajaponicaHout.)或卵叶远志 P.sibiricaL.
的全草 ,又名瓜子草 、来麻回 ,最早见载于 《植物名
实图考 》,名金锁匙 、地藤草 ,为远志科植物瓜子金
的带根全草 ,具有祛痰止咳 、活血化瘀 、解毒消肿等
作用。近年来用于治疗肺结核 、食道癌等疾病也取
得了良好的疗效 ,尚未被《中国药典》收载 [ 1] 。
瓜子金中主要含有皂苷类成分和黄酮类成分 ,
皂苷类成分是其活性成分 。我们曾对瓜子金进行了
系统的化学成分研究 ,发现瓜子金皂苷己(C53H86
O23)是瓜子金的皂苷主要成分之一 ,含量较高 ,并且
未在其他植物中发现 ,具有特征性[ 2, 3] ,因此选择瓜
子金皂苷己作为瓜子金质量控制的指标性成分 。我
们研究收集了贵州 、广西等地药材 、以及市场流通药
材等 10余个不同产地的样品 ,对药材提取方法 、色
谱条件进行优化 ,并进行了系统适应性试验 ,建立了
HPLC-ELSD法测定瓜子金皂苷己的含量 ,为瓜子金
药材的质量控制提供可行的方法和依据 。
1　仪器与试药
高效液相色谱仪 (岛津 LC-2010A, 日本 ),
SEDEX85型蒸发光散射检测器 ,上海科导超声仪
(型号规格:SK2200H)。SartotiusBP211D型电子天
平。甲醇(J.TBaker色谱纯),乙腈(J.TBaker色谱
纯),水为 Mili-Q超纯水(美国 Milipore),其余试剂
均为分析纯。瓜子金皂苷己对照品 (自制 ,纯度≧
98%)。样品自采及市售 ,经上海第二军医大学张汉
明教授鉴定为瓜子金 PolygalajaponicaHout.全草。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　SHISEIDOCapcelPakC18色谱柱
(4.6 mm×250mm, 5 μm);乙腈 -水(30：70)为流动
相;流速 1.0 ml/min,柱温 25 ℃,进样量为 10 μl,
检测器:SEDEX85型蒸发光散射检测器 。
2.2对照品溶液的制备 精密称取瓜子金皂苷己对
照品适量 ,加 70%的甲醇溶液制成每 1 ml含 173μg
的溶液 ,即得。
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2.3　供试品溶液的制备　提取方法经优化后 ,最终
确定为取本品粉末(过四号筛)0.5 g,精密称定 ,置
具塞锥形瓶中 ,精密加入 70%的甲醇 10 ml,密塞 ,
称定重量 ,超声处理(功率 90 W,频率 59 kHz)60
min后 ,放冷 ,再称定重量 ,用 70%甲醇补足减失的
重量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 ,即得。
图 3　瓜子金药材中瓜子金皂苷己的含量测定图谱
2.4　标准曲线的绘制　精密吸取对照品溶液(浓
度为 0.173 mg/ml)2、4、6、8、10、12、14、16、20 μl,
进行色谱测定 ,按上述条件测定峰面积积分值 ,以瓜
子金皂苷己进样量的对数为横坐标 ,峰面积积分值
的对数为纵坐标 ,绘制标准曲线 , 得回归方程为 Y
=1.798 5X+4.722 3, R2 =0.999 8。理论板数平均
为 17 615.8。结果表明瓜子金皂苷己在 0.346 ～
3.460 μg范围内呈现良好线性关系。
2.5　精密度试验　取同一瓜子金皂苷己对照品溶
液 ,连续测定 6次 ,计算得瓜子金皂苷己峰面积 RSD
值为 1.64%。结果表明仪器有良好的精密度 。
2.6　重现性试验　取同一批号的样品 6份(样品
批号为瓜子金 01),分别精密称重 ,照拟定的方法试
验。测得瓜子金皂苷己峰面积 ,计算得到其平均含
量为 0.653%, RSD为 2.12%。结果证明此方法重
现性良好 。
2.7　稳定性试验　取同一供试样品 ,分别于提取后
0、1、2、4, 6、8、10 h进样 。测得瓜子金皂苷己峰面积
RSD值为 2.21%, 结果表明供试品溶液在 10 h内
基本稳定 。
2.8　回收率试验　取同一批号样品 6份 ,精密加入
分别与样品中瓜子金皂苷己含量相等的对照品 ,按
以上方法测定 ,分别计算回收率 ,结果表明瓜子金皂
苷平均回收率为 99.85%, RSD为 3.00%。
2.9　样品测定　分别精密称取对照品与 10个批次
的样品 ,配置成溶液后按含量测定的方法进行测定。
结果见表 1。
表 1　不同批次瓜子金中瓜子金皂苷己含量测定结果(n=2)
编号 样品产地 平均含量(%)
1 贵州遵义 0.66
2 广西荔浦 0.8
3 贵州怀化 0.79
4 贵州安顺 0.84
5 广西河池 0.76
6 贵州邵阳 1.01
7 贵州衡阳 1.41
8 广西荔浦 0.75
9 安徽滁州 0.33
10 安徽亳州 0.19
注:药材瓜子金为统货
根据 10批样品检测结果 ,将含量限度为 “本品
以按干燥品计算 ,含 C53H86O23不得少于 0.6%”。
3　讨论
3.1　提取方法的选择　首先我们分别采用了超声 、
回流 、浸渍 3种不同的提取方法 ,结果表明 3种提取
方法无显著差异。综合考虑提取时间和方法操作简
单易行 ,所以选用超声法提取瓜子金中的瓜子金皂
苷己 。其次 ,分别考察了不同溶剂(水 、乙醇和不同
浓度的甲醇)对瓜子金皂苷己的提取效果 ,试验结
果表明 70%甲醇提取的瓜子金皂苷己浓度最高。
考察不同倍数的溶剂体积(20、40、60、80倍)对瓜子
金皂苷己的提取效果 ,试验结果表明当溶剂体积倍
数为样品质量的 20倍时 ,就可以将瓜子金中的瓜子
金皂苷己完全提出 。最后 ,分别考察超声时间(10、
20、40、60、80 min)对瓜子金皂苷己的提取效果的影
响 ,试验结果表明超声提取 60 min后 ,瓜子金皂苷
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己基本提取完全 。
3.2　色谱条件的优化　我们试用了 3种型号的 C18
柱 ,包括:AgelaPromosilC18 250 mm×4.6 mm, 5
μm;AgelaVenusilMPC18 250 mm×4.6 mm, 5 μm;
SHISEIDOCapcelPakC18 250mm×4.6 mm, 5 μm。
结果表明用 SHISEIDOCapcelPakC18柱能更好的
分离瓜子金药材成分 ,而且对照品瓜子金皂苷己峰
形较好 ,理论板数较高 。考察了不同柱温(20、25、
30 ℃)对分离效果的影响 ,结果表明柱温对分离效
果的影响不大 ,在合适的流动相条件下 ,瓜子金皂苷
己峰都能与其他峰达到基线分离 ,但考虑到其可操
作性 ,我们选用最接近室温的 25 ℃。
3.3　质量差异　从表 1中结果可以看出 ,受气候 、
土壤 、生态环境等因素的影响 ,不同产地的瓜子金药
材中瓜子金皂苷己的含量存在很大的差异 ,其含量
在 0.19% ～ 1.41%。因此在瓜子金药材进一步研
究开发的过程中 ,应当监控其中瓜子金皂苷己的含
量 ,尽量选择含量较高的药材 。
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[收稿日期 ] 　 2009-10-22
[修回日期 ] 　 2009-12-14
(上接第 129页)
的影响:由于乳糖为水溶性辅料 ,随着乳糖的溶解 ,
扩散孔道和孔隙率增加 ,从而使得释放速率加快 ,因
此乳糖的用量对释药行为有一定的影响。 ④填充剂
种类的影响:由结果可知 ,释药速率 MCC>淀粉 ,这
可能是由于淀粉与 MCC相比 ,具有较强的溶胀性 ,
能使已形成的孔道及孔隙率减小 ,所以其释药速率
要慢于 MCC。
3.2　压片压力对释药的影响　从结果可知 ,压片压
力对释药行为基本无影响 ,这是因为虽然压力的改
变可影响骨架片的密度 ,使未水化骨架片的孔道和
孔隙率发生变化 ,但对于 HPMC骨架片 ,影响释药
的主要因素是凝胶层的形成速度和凝胶层性质 ,当
压力达到一定值后 ,释药行为与压力无关 。
3.3　体外释放条件对释药的影响　 ①溶出装置的
影响:实验结果表明 ,不同的释放度测定装置对释药
无显著性影响。但在实验过程中发现 ,采用小杯法
时释放前期片剂直接接触溶出杯底部 ,凝胶骨架片
遇水后会生成亲水凝胶而粘附在杯壁上 ,从而可能
造成有效释药面积的减少 ,影响释放测定结果 。故
本实验选择沉降篮法进行释放度试验考察 。②溶出
介质的影响:难溶性药物 HPMC骨架片的释放主要
受骨架溶蚀为主和药物扩散为辅的协同控制 ,而
HPMC在生理 pH范围内性质稳定 ,故在不同溶出
介质中 ,药物释放表现出一定的差异主要是由扩散
所引起的。而药物从骨架片中扩散到介质中的驱动
力则是取决于药物在介质中的溶解性 [ 11] 。由前几
章实验可知 , 药物在水 、0.1 mol/LHCl溶液和 pH
6.8磷酸盐缓冲液中的溶解度几乎相同 ,故其释放
行为也相似 ,即药物的释放不受 pH值的影响。但
SDS溶液对药物的溶解度有显著的影响 ,可使药物
释放明显加快 。同时 ,由实验结果可以看出 ,不同浓
度的 SDS溶液对药物释放基本无影响。
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[收稿日期 ] 　 2009-10-24
[修回日期 ] 　 2009-12-27
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