全 文 ：变叶木叶片的组织培养与植株再生
江 苏省植物微繁殖技术中心 李玉 巧 朱鹿鸣
摘 要
采用不同络养基加入 不同激素对变叶末叶
片进行 组培 , 以基本培养基 M S 诱导愈伤组织
为佳 , 因 M S 同时呀加 B A 与2 , 4一 D 诱导的愈
伤组织 有利 芽的分化 ; 愈伤组织产 生后 芽的增
殖方式 与茎 尖或侧 芽培 养 的 增 殖方式有 所 区
别 ; 加 入适宜浓 度的引噪丁 酸 ( BI A ) 可使变
叶 木试管苗生根率达70 % 左右 。 选择浪湿度适
宜 的季 节和透 气性较好的基质移栽 , 可提 高移
栽成活率 。
关键词 变叶木 组 织培养 育苗 移植
变叶木 ( C o d i a e u m v a r i e g a t u m v a r . p i 。 -
t u m )
, 又名洒金榕 , 为大戟科变叶木属的常绿
灌木 , 属名贵观叶花卉之一 。 其枝条较细弱 ,
近直立生长 , 叶形及叶色因品种而异 , 变化多
端 。 其叶还可作药用 , 有消炎消肿之功能 , 可
外敷治疗痈疮红肿 。 变叶木在南北各地均有栽
培 , 但因本身的生 一长势较弱 , 枝条细而少 , 种
源奇缺 , 因而常规繁殖较困难 。 有关组织培养
繁殖变叶木的报道主要是用茎尖或侧芽 。 我们
于 19 8只一 198 9年用变叶木叶片进行组织培养获
得再生植株 , 为变叶木的发展提供了一条新的
途径 。
一 、 材料和方法
(一 ) 材料选取
从 3 一 4 年生的变叶木植株上取下幼嫩叶
片 , 自来水冲洗表面后 , 用70 %酒精消毒 15 秒
钟左右 , 取出再用 0 . 1% 升汞溶液灭菌 10 一 12
分钟 , 注意灭菌过程 中要不断摇晃灭菌液带动
灭菌材料旋转 , 以达到和提高消毒效果 。 之后
用无菌水冲洗 4 一 5 次 , 消毒滤纸吸千附水 ,
然后将其剪成 1 厘米见方的小块 , 以正面向上
小心地接种到新鲜培养基上 。
(二 ) 培养基配制
以 M S 和 N .作为基本培养基 , 加人不同浓
度的不同激素进行诱芽培养 :
1
. 诱导愈伤组织 培 养 基 : ( 1 ) M S +
B A
I
. 卜 2 . 。 m g八 (单位 , 下同 ) + 2 , 4 一 D . 。一 ` , . ,
( 2 ) M S + 2
,
4 一 D : .卜 。 二 , ( 3 ) N 。 + B A 、
.卜 : 二 +
2 , 4 一 D 1
.卜 : 二 , ( 4 ) N 。 + 2 , 4 一 D ,一 : 二 ,
2
. 诱芽培 养 基 : ( 1 ) M S 十 B A ,一 5二 十
N A A 二 。 : 一 。 . , , ( 2 ) M s + B A
,一 5 . 。 + N A A 。 . :一 ` ,
3
. 生根 培 养 基 : ( 1 ) 1/ 2M s 十 N A A,
( 2 ) i / ZM s + I B ^
,
( s ) M s 一 B + N A A, ( 4 )
M S 一 B + I B A。
上述诱导愈伤组织和诱芽培养基均加食糟
2 %
, 琼脂0 . 6一 0 . 7% , 培养温度为 2 1士 3 O a ,
日光灯照明每 日 12 小时左右 , 光强度 15 0 o l x 。
二 、 试验结果
(一 ) 愈伤组织的形成、 诱芽与增殖
1
. 诱导愈伤组织
将准备好的接种材 料 , 接 种 到 M s 或 .N
加人不同激素的培养基上 , 诱导愈伤组织 (见
表 l ) 。 据观察 , 基本培养基 M S 同时加人 B A
与 2 , 4一 D 比只加2 , 4一 D 可使 变 叶 木叶片提前
3 一 4天形成愈伤组织 ; 比在基本培 养基 .N
中加 B A 与 2 , 4 一 D 或 只 加 2 , 4 一 D 提前 7 一 10
天 。 根据上述试验 , 选用 M S + B A 十 2 , 4 一 D 为
愈伤组织诱导培养基 ,效果较好 。 愈伤组织的形
成以幼嫩的叶片为佳 , 在同一片幼叶中 , 叶的
尖端往往很难诱导产生愈伤组织 , 叶的中部和
基部诱导效果较好 , 叶脉则更佳 。
2
. 诱芽与增殖
( 1 ) 将形成的愈伤组织块接转到诱芽培
养基上 , 培养 50 天后发现在愈伤组织上长出不
同程度的绿点 。 继续培养 , 可发现有的绿点凸
起 , 慢慢形成一小团绿叶 , 通 过 调 配 激素浓
一 1 4 一
农 1
诱导
不同浓度的不阵滋素对诱导t 伤组织及诱芽培并塞作用的形响
意省组级均碎墓 随见愈严时间伤组 } 始见芽时间(天 ) l (天 ) 分 化 情 况
25朋挑砷动从607M S + B A i . 5 + 2 , 4 一 D l . o 一卜 。
M S + 2 , 4 一 D z 二 _ 1 . :
N
a + B A i
.
s + 2 , 4 一 D i .一 s
N
e + 2
,
4 一 D i一 x .。
M S + B A Z
.
o + 2
,
4 一 D 2 . 。
系f s + 2 , 4 一 D : . 。
N 。 + B A : . 。 + 2 , 4 一 D o . 。
N
s + 2
,
4 一 D : . 5
M S + B A :
.
0 + 2 一 4 一 D 3 . o一 ; . 0
N
。 + B A : 二 + 么 , 4 一 D 3 .卜 ` , 。
8 0夭后
9 0天后
出现绿色芽点 , 量多 , 有少量凸起
部分见绿色芽点
芽点少 , 色较黄
芽点很少 , 色嫩黄
绿色芽点丛生 , 多数凸起
绿色芽点稀少
愈伤组织块 , 个别见芽点
嫩黄愈伤组织 , 形成芽点极少
愈伤组织块质地紧密 ,诱芽难 ,并由嫩黄变褐坏死
愈伤组织块 , 未见芽分化 , 并逐渐由嫩黄变褐烂死
12巧9n58聆
注 : 诱芽培养基为 M S 十 B A I .卜 2 . 。 + N A A 。 ,卜。 . :
度 , 在其中伸出极短的小嫩枝 ; 有的绿点发育
形成一团绿叶后 , 长成不同程度的丛生芽 。 从
试验结果看出 , B A 与 N A人 的不同浓度对芽的
分化和增殖有一定影响 (见表 2 ) 。 当 B A 与
N A A 的 浓 度 配比不适宜时 , 芽的分化量降低
或发育生长成芽块 , 很难形成有效苗 , 或形成
嫩黄色呈半透明状的玻璃苗 , 移栽不能成活 。
所以必 须 把 B A 的浓 度控制在 1 . 5一 2 . s m g l/
之间 , N A A 的浓度 掌握 在 0 . 05 一 0 . 2 m g / 1之
间 , 即用 M s + B人 , . 卜 : . 。千N A A 。 . 。。一 : , 可促 进
变叶木芽的分化和有效苗的形成 。
( 2 ) 从诱芽试验中看出 , 由于诱导愈伤
组织的培养基中成份不同 , 使形成的愈伤组织
对芽的分化有一 定 影 响 (见表 1 , 表 2 ) 。 M s
加 B A 和 2 , 4一 D 比只加 2 , 4 一 D 、 比 N 。 加 B A 和
2 , 4 一 D 或只加 2 , 4 一 D 的培养基 , 不但能提前形
成愈伤组织 , 而且能较好地诱导芽的分化 。 当
然在诱导愈伤组织培养基中 , 对 B A 和 2 , 4一 D
的用量要 控 制 在 1 . 0一 1 . 5 二 g /l 和 1 . 5一 2 . 0
二 g l/ 之间 。 如果超出此 范 围 , 则降低愈伤组
织芽的分化量或得不到有效芽 。
( 3 ) 变叶木叶片组织培养芽的增殖形式
与茎尖和侧芽培养的增殖形式不同。 主要是在
第 1 、 2 代培养时 , 茎尖和侧芽的增殖以先抽
茎或长侧芽的形式增殖 , 而叶片诱导愈伤组织
的增殖 , 大多是在愈伤组织表面产生凸起物 ,
而后 出现绿色芽点 , 形成一小团绿叶 , 再从中
抽出极短嫩枝 , 直接抽生短枝的情况极少 。
(二 ) 根的再生
木本植物的组织培养 , 其芽的增殖较草本
难 , 而根的再生较草本更难 。 变叶木属木本植
物 , 通过多 种 试验 , 选择 出以 l/ ZM S 和改良
M S (即M s 一 B ) 二种基本培养基 , 加入 N A A 、
I B A诱导变叶木生根 , 效果较好 (见表 3 ) 。
表 2 不同浓度激素对变叶木叶片愈伤组织诱芽和生长的影响
基本培养基 + 激素 (m g / )L 接 种 数 }增 殖 数 } 增殖倍数 生 长 情 况
M S +
B A
I
. 。 + N A A o
.
o l
B A i
.
5 + N A A
o
.
o i
B A
I
.
5 + N A A
o
.
l
B A : 。 + N A A o
.
1
B A 2
. 。十 N A A o .卜 1 . 。
B A 3
. 。 + N A A o
.
i
B A
:
.
e一 。 . 0 + N A A o i ’
生长较慢 , 苗较壮
生长一般 , 苗嫩黄
苗壮 , 叶色绿生长眨
苗壮 , 叶色绿生长旺
苗壮 , 叶较大 , 生长慢 , 签部有愈伤组织
芽丛生状 , 苗细幼嫩 , 难移栽成话
丛生芽呈块抉 , 芽分化困难
52
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一 1 5 一
衷 3 M S与 M导冬加不同生长素对安叶木试挤苗生根的形响
培 养 基 成 份
( m g / l )
接种数 生 根 率
( % )
01Ic`0126儿 M S + N A A : . 。一
M S
一 B 十 N A A 2
. 。 _
牡M S 十 I A A ; . 。 一 ` .
M S 一 B + I入 A ` 。 _
1匕 M S + I B A 4
. 。
M S 一 B + I B A 4
,
.
月M S 十 I B A 。 . 。一 6 , 。
生根株
(株 ) 根 系 生 长 情 况
M S
一 B 卜 I B A
M S 一 B + IB A
1万
1 2
1 4
l 3
0
7
.
6
0
9
.
1
1 4
.
2
6 6
.
6
1 6
.
6
7 1
.
4
4 6
.
1
} 长乳白色松散愈伤组织 , 久培变褐烂死
1从愈伤组织 上伸出鸡爪形根
}乳自色松散愈伤组织 , 久培变褐烂死
} 从愈伤组织上伸出鸡爪根 , 黄褐色
: 从轻度愈伤组织上伸出较细弱 、 黄褐色根
{根系生长较正常 , 粗壮 , 白色
{有轻度愈伤组织 , 黄褐色根细弱
{ 根系发育正常 , 粗壮
}根系发育较差 , 根须较细 , 开始形成愈伤化
1
. 不同生长素对生根有一定的影响 , 生
长素对根的分化是必要的 , 但植物种类不同 ,
所需要的生长素也不完全相同 。 N A A 、 IA A对
变叶木的刺激生根作用不佳 , 特别对变叶木叶
片再生植株生根作用较差 。 从本试验结果可看
出 , IB A 适宜的浓度对诱导变叶木叶片再生植
株生根效果较好 , 但 BI A 的用 量 在 4一 6 0 9 l/
为宜 , 否则将不能生根 。
2
. 盐的浓度 : 在生根试验 基本 培 养基
M S
一 B 中 降低了氮 ( N ) 的用量 , 适当增加了
磷 ( P ) 和钾 ( K ) 的用量 , 基本能控制愈伤
组织的形成 (或 严 重 形 成 ) 。 以 M S 一B 附加
I B A
月 。一 。 . 。 为 培 养基培养变叶木叶片的再生植
株生根 , 一般 20 天左右即可移栽 。
三 、 试管苗的移教
试管苗刚从基部愈伤组织中长出的根与枝
条的主要维管束系统很少有联系 , 此时若将试
管小苗移栽会严重地阻止水份向上运输 , 导致
失水 , 影响成活 。 通 过 适 当 地调整培养基成
份 , 可使根系生长正常 , 能提高移栽苗的成活
率 。
移栽时应注意以下几点:
1
. 适宜的温度 : 在没有控温 、 控湿设备
的情况下 , 宜选择室外温度在 20 O c 左右的天气
进行移栽 。
2
. 适宜的湿度 : 试管苗移栽后应立即罩
上玻璃瓶或盖上薄膜 , 使其有一个保湿的小环
境 , 待其成活后慢慢除去覆盖物 。
3
. 基质的制备 : 变叶木喜微酸性 、 透气
良好的土壤 。 宜用松林内土与稻壳灰的混合物
( 2 : 1 ) 作基质 。
如能满足上述条件 , 移栽成活率一般可达
9。% 左右 , 另外移栽苗和成活苗均需要有庇荫
条件 。 (责任编辑 李 蓓 )
(上接第 13 页 ) 特点的将科技成果推广与技术
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(责任编辑 李蓓 )
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