全 文 :飞龙掌血提取物止血作用初步研究
黄江红1 谢楷标1 邓永福1 吴文奇2 王名南1
1 广东省肇庆市中医院 广东 肇庆 526040
2 广东省肇庆医学高等专科学校 广东 肇庆 526020
摘要 目的:通过对飞龙掌血的乙醇提取物、石油醚提取物、乙酰乙酯提取物、正丁醇提取物止血作
用的观察,确定飞龙掌血的止血有效部位。方法:采用毛细管法、剪尾法测定小鼠的凝血时间、出血
时间,观察飞龙掌血这四种提取物对小鼠的止血作用。结果:飞龙掌血的石油醚提取物部位、正丁醇
提取物部位、乙酸乙酯提取物部位、乙醇提取物部位与空白组比较,均能显著缩短小鼠的出血时间
(P<0.01)和凝血时间 (P<0.01)。结论:在这四个提取物部位中,飞龙掌血乙醇提取物部位的凝血
作用最好,其止血时间与目前有较佳止血效果的三七粉相近,飞龙掌血乙醇提取物部位有较强止血
作用。
关键词 飞龙掌血 凝血时间 出血时间 血小板计数 小鼠
飞龙掌血为芸香科飞龙掌血属植物飞龙掌血
(Toddalia asiatica Lam.)的根或叶,始载于 《植物名
实图考》,因其止血作用较佳,又名见血飞 (《分类草
药性》)、血见愁 (《贵阳民间药草》)、见血散 (《湖南
药物志》)、飞龙斩血 (《云南中草药选》)等。具有祛
风,止痛,散瘀,止血的功效。但其止血活性尚未见
研究报道。笔者对飞龙掌血提取物的凝血作用进行初
步实验研究,旨在为以后飞龙掌血的止血作用进一步
研究及对其开发利用奠定基础。
1 实验材料
1.1 药物:飞龙掌血饮片:由肇庆市邦健医药公司
提供,批号:120315。
1.2 试剂:石油醚:天津市富宇精细化工有限公司,
批号:121217;乙酰乙酯:天津市富宇精细化工有限
公司,批号:120305;正丁醇:天津市大茂化学试剂
厂,批号:120308;血小板稀释液:安徽省巢湖市弘
慈医疗器械有限公司,批号:20130302。
1.3 仪器:电热鼓风干燥箱,JC101型,上海成顺仪
器仪表有限公司、南通嘉程仪器有限公司;电热恒温
水浴箱,420-A型,姜堰市新康医疗器械有限公司;
电 子 天 平,JA2003N; 光 学 显 微 镜: 奥 林 巴
斯,CKX31。
1.4 实验动物:昆明小鼠,SPF级,体重18~22g,
雌雄各半,由广州中医药大学动物中心提供 (生产许
可证号:SCXK (粤)2008-0020)。
1.5 有效部位的制备:首先取1200g的飞龙掌血饮
片,加10倍量的水,煎煮3次,第1次1.5小时,第
2、第3次各1小时,合并3次煎液,过滤,滤液浓缩
成稠膏后,于80℃以下干燥成干浸膏的水提物部位;
利用系统溶剂分离法再以75%乙醇[1]、水饱和正丁
醇、乙酰乙酯、石油醚依次分别从水提物干浸膏中用
回流提取法连续提取2次,合并提取液,过滤,得到
乙醇提取物、石油醚提取物、乙酰乙酯提取物、正丁
醇提取物,然后减压回收各溶剂,于80℃以下干燥成
干浸膏,分别获得乙醇提取物部位、正丁醇提取物部
位、乙酰乙酯提取物部位、石油醚提取物部位。
2 方法与结果
2.1 方法:分述如下。
2.1.1 出血时间 (BT)的测定:取小鼠60只,雌雄
各半,随机分为6组即蒸馏水组、三七粉组及飞龙掌
血乙醇提取物组、正丁醇提取物组、乙酰乙酯提取物
组、石油醚提取物组,分别按2.5g/kg灌胃给药7d
(三七粉按0.5g/kg),1天1次,末次给药后1h,小
鼠夹固定,将小鼠尾尖0.5cm处横向切断,当血液自
动流出时开始计时,每隔30s用滤纸吸去血滴1次,
到血液不再流出为止 (滤纸吸时无血)。以人工形成
创面到出血停止所经时间作为出血时间 (BT)。观察
并记录实验结果。
2.1.2 小鼠血小板计数 (PLC)及凝血时间 (CT)
测定:取小鼠60只,雌雄各半,随机分为6组,分
组给药均同上。末次给药后1h,用毛细取血管在小鼠
眼内眦球采血10μl,用血小板稀释液稀释150倍,普
通光学显微镜下计数 (PLC)。同时用一次性定量孔
径1mm、长10cm取血管插入小鼠另一侧眼内眦球后
静脉丛取血,深约4~5mm,自血液流进管内计时,
注满毛细管后平放于桌上,每隔30s折断两端约
·377·浙江中医杂志2013年10月第48卷第10期
0.5cm,并缓慢向左右拉开,仔细观察折断处有无血
凝丝出现,出现血丝时停表即为血液凝固时间
(CT),观察并记录。
2.2 结果与分析:分述如下。
2.2.1 出血时间 (BT)的测定:从表1所示,与蒸
馏水组比较,飞龙掌血乙醇提取物组、正丁醇提取物
组、乙酰乙酯提取物组、石油醚提取物组、三七粉组
均能明显缩短小鼠的出血时间 (P<0.01)。
表1 三七粉及飞龙掌血提取物对小鼠出血时间的影响 (x±s,s)
组别
剂量
(g/kg)
例数 出血时间
蒸馏水组 — 10 358.60±26.59
石油醚提取物组 2.5 10 172.40±21.72**
正丁醇提取物组 2.5 10 133.50±25.47**
乙酰乙酯提取物组 2.5 10 165.80±23.79**
乙醇提取物组 2.5 10 122.40±12.38**
三七粉组 0.5 10 109.40±12.82**
注:与蒸馏水组比较,**P<0.01。
2.2.2 凝血时间 (CT)测定:从表2所示,与蒸馏
水组比较,飞龙掌血的乙醇提取物组、正丁醇提取物
组、乙酰乙酯提取物组、三七粉组能缩短小鼠的凝血
时间 (P<0.05或P<0.01)。
表2 三七及飞龙掌血提取物对小鼠凝血时间的影响 (x±s,s)
组别
剂量
(g/kg)
例数 凝血时间
蒸馏水组 — 10 131.70±12.99
石油醚提取物组 2.5 10 127.40± 8.10*
正丁醇提取物组 2.5 10 112.50±16.64**
乙酰乙酯提取物组 2.5 10 95.60± 8.68**
乙醇提取物组 2.5 10 84.90± 9.96**
三七粉组 0.5 10 77.70± 9.79**
注:与蒸馏水组比较,*P<0.05,**P<0.01。
2.2.3 血小板计数 (PLC):从表3所示,与蒸馏水组
比较,飞龙掌血乙酰乙酯提取物组、乙醇提取物组、三
七粉组能明显降低小鼠的血小板数量 (P<0.05或P<
0.01)。
表3 三七粉及提取物对小鼠血小板数量的影响 (x±s)
组别
剂量
(g/kg)
例数
(只)
血小板数量
(×1010/L)
蒸馏水组 — 8 3.48±0.59
石油醚提取物组 2.5 8 2.97±0.83*
正丁醇提取物组 2.5 8 2.33±0.87*
乙酰乙酯提取物组 2.5 8 1.82±0.59**
乙醇提取物组 2.5 8 1.59±0.48**
三七粉组 0.5 8 1.36±0.17**
注:与蒸馏水组比较,*P<0.05,**P<0.01。
3 讨论
出血时间是指穿破毛细血管,自出血至自然止血
所需时间,其长短与血小板数量与功能、毛细血管功
能、组织因子数量以及组织收缩力等方面的因素有
关。测定出血时间是观察受试药物对凝血机制有无影
响的第一步。本实验表明飞龙掌血的石油醚提取物部
位、正丁醇提取物部位、乙酰乙酯提取物部位、乙醇
提取物部位均能明显缩短小鼠出血时间。
凝血时间是指血液自离体至凝固所需时间,它的
长短反映血液中参与凝血的各种凝血因子的含量以及
它们的功能。其中,血小板的数量和功能以及毛细血
管功能是决定性因素。本实验表明飞龙掌血的乙醇提
取物部位、正丁醇提取物部位、乙酰乙酯提取物部位
能缩短小鼠的凝血时间,飞龙掌血乙醇提取物部位、
正丁醇提取物部位能明显降低小鼠的血小板数量。
本研究表明,飞龙掌血石油醚提取物部位、正丁
醇提取物部位、乙酰乙酯提取物部位、乙醇提取物部
位均能具有一定程度的止血作用。另外,实验显示乙
醇提取物部位的出血时间、凝血时间与三七粉的实验
数据接近,飞龙掌血乙醇提取物部位的止血效果最
好。其主要凝血活性成分及其机制有待进一步研究。
在对小鼠凝血时间的影响及对小鼠血小板数量的
影响实验中显示,飞龙掌血乙酰乙酯提取物部位比正
丁醇提取物部位的凝血时间短、血小板数量低,考虑
可能与乙酰乙酯提取的成分及正丁醇提取的成分有
关,对此有待进一步研究。
本实验显示飞龙掌血的乙醇提取物部位的止血效
果与三七粉的效果接近。
收稿日期 2013-01-04
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·477· 浙江中医杂志2013年10月第48卷第10期