全 文 ：同浓度 LBP处理 48 h后 ,亚二倍体凋亡峰逐渐增高。
与 LBP0μg/ml组比较 , P<0.01
图 1　LBP对 TE-13细胞凋亡率的影响(n=3)
2.4　LBP对 TE-13去磷酸化 Rb蛋白表达的影响 Rb蛋白在未
经 LBP处理的细胞 TE-13中仅见少数细胞呈现弱表达 , 经 LBP
处理后 , Rb蛋白表达阳性细胞数增加。对 LBP作用组 TE-13细
胞的凋亡率与去磷酸化 Rb蛋白表达量进行线性相关分析 , 呈正
相关(r=0.900, P<0.01)。结果见表 2。
表 2　不同浓度 LBP作用 TE-13细胞的凋亡率及
表达去磷酸化 Rb蛋白的阳性细胞率( x±s)
组别 凋亡率(%) Rb蛋白的阳性细胞率(%) P
阴性对照 5.51±0.23 11.46±0.15
LBP(200μg/ml) 18.45±1.33＊ 36.47±0.56＊ <0.01LBP(400μg/ml) 33.32±2.36＊ 80.83±1.23＊ <0.01
3　讨论
本实验中 LBP对人食管癌细胞 TE-13增殖影响的研究结果
显示 , 微量的 LPB(100 μg/ml)即对 TE-13细胞的增殖具有明显
抑制作用 ,并呈浓度和时间依赖性。 LBP诱导细胞发生凋亡 ,随
着 LBP浓度的增加 , TE-13细胞亚 G1峰逐渐增高 , 表明 LBP能
够诱导肿瘤细胞快速凋亡。
Rb蛋白是细胞周期和细胞分化中重要的转录调节因子 ,处
于细胞生长和分化的中心环节 ,在控制细胞进入细胞分裂周期及
脱离细胞周期进入分化状态中起关键作用 [ 4 , 5] , 目前认为其抑癌
机制主要是通过与一类转录因子 EIF的结合或解离 ,控制着细胞
由 G1进入 S期。 Rb基因的抗癌性主要与其蛋白产物 Rb蛋白有
关 , 已有研究表明高表达的去磷酸化的 Rb蛋白能够诱导肿瘤细
胞发生凋亡 [ 6] 。 Rb蛋白在细胞核中表达 , 并以高磷酸化和低磷
酸化的形式存在 , 低磷酸化或者去磷酸化 Rb蛋白为其活性形
式 , 可与转录因子 EIF及其它肿瘤蛋白结合从而使其丧失转录活
性 , 使肿瘤细胞阻滞在 G1期 ,抑制其增殖。所以细胞中去磷酸化Rb表达增加 ,将阻止肿瘤细胞的大量增殖促进其凋亡。近年的
研究发现 , Vp-16、5-Fu抑制结肠癌细胞(HIC/ S)增殖和诱
导凋亡与细胞内Rb蛋白表达增高相关 [ 7, 8] 。 Zhao等 [ 9]的报道也
表明 , 癌细胞凋亡过程中去磷酸化形式的 Rb蛋白明显高表达本
实验以人食管癌细胞 TE-13为研究对象 , 探讨去磷酸化 Rb蛋白
表达状况与枸杞多糖(LBP)诱导肿瘤细胞 TE-13 凋亡和抑制其
增殖之间的关系 。研究结果显示 LBP对人食管癌 TE-13细胞的
生长增殖具有抑制作用 ,并呈剂量和时间依赖性 , 同时使去磷酸
化 Rb蛋白的表达增加 , 且去磷酸化 Rb蛋白的表达量与 LBP诱
导 TE-13细胞凋亡率呈正相关。据此推测 , 增高细胞内去磷酸化
Rb蛋白表达量可能是 LBP发挥抑瘤作用的机制之一。 本实验
研究结果为中药枸杞多糖的开发利用提供了实验依据。
参考文献:
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收稿日期:2009-10-20;　修订日期:2010-05-12
作者简介:薛瑞娟(1983-),女(汉族),山西榆社人 ,现任中国科学院昆明
植物研究所见习研究员 ,硕士学位 ,主要从事木兰科相关研究工作.
粗糠柴花的挥发性化学成分分析
薛瑞娟 , 陈　高 , 孙卫邦
(中国科学院昆明植物研究所植物园 ,云南 昆明　650204)
摘要:目的 分析粗糠柴花的挥发性成分。方法 采用水蒸气蒸馏法提取挥发油;通过毛细管气相色谱 -质谱联用法对粗
糠柴花的挥发性成分进行分析;采用 wiley7n.1谱库检索定性 ,并通过参考文献加以确认粗糠柴花的挥发性化学成分;通
过气相色谱面积归一化法对各成分进行定量分析。结果 分离出 34个化合物 ,定性定量出 26个化合物。结论 挥发性成
分中质量分数最高的是烃类(34.55%), 其次是酯类(25.49%)、酮类(1.05%)、酚类(0.56%)、醛类(0.20%)和酸类
(0.03%)。为进一步研究粗糠柴植物的传粉以及与蛾类的协同进化关系提供了科学依据。
关键词:粗糠柴;　挥发性成分;　气相色谱 -质谱联用法
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.09.133
中图分类号:R284　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2010)09-2406-02
　　粗糠柴 Malotusphilippensis(Lam.)Muell.Arg., 又名香檀 ,
香桂树 ,香楸藤 , 菲岛桐 ,红果果。大戟科(Euphorbiaceae)野桐属
MalotusLour.植物。小乔木或灌木 , 高 2 ～ 18 m;小枝 、嫩叶和花
序均密被黄褐色短星状柔毛 ,产于四川 、云南 、贵州 、湖北 、江西 、
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时珍国医国药 2010年第 21卷第 9期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.9
安徽 、江苏 、浙江 、福建 、台湾 、湖南 、广东 、广西和海南 , 生于海拔
300 ～ 1 600 m山地林中或林缘。亦分布于亚洲南部和东南部 ,大
洋洲热带地区。木柴淡黄色 , 为家具等用材;树皮可提取栲胶;种
子的油可作工业用油;果实的红色颗粒状腺体有时可作染粒 ,但
有毒 , 不能食用 [ 1] 。
粗糠柴的许多化学成分有非常重要的作用。如它含有可以
促进胶原质产生的成分从而可以抗皮肤衰老 ,它的茎皮提取物中
有抗肿瘤增殖的活性成分 [ 2] , 另外 , 粗糠柴还含有抗变性活性 [ 3]
成分以及修复毛发的活性成分 , 还可以作为食品和饮料的着色
剂。粗糠柴酸作为一种水溶性的特征酸 ,富含于大戟科的白背叶
植物中 [ 4] 。关于粗糠柴中挥发性成分的研究尚未有报道。
1　材料与方法
1.1　样品来源及鉴定 材料采自昆明植物园 , 由中国科学院昆明
植物研究所孙卫邦研究员鉴定为大戟科野桐属植物粗糠柴
M.philippensis(Lam.)Muel.Arg.。该植物引自云南金平。
1.2　挥发物的制备 将粉碎的粗糠柴盛花期的鲜花 20.42 g,通
过水蒸气蒸馏法提取挥发油 , 收集蒸馏液 , 无水乙醚萃取 4次 ,得
到黄色透明挥发物 22.6mg,此挥发物用于 GC-MS分析。
1.3　GC-MS分析条件
1.3.1　气相色谱条件 仪器为美国 AgilentTechnologies公司
HP5890 30QC2/AC5石英毛细管柱(30 m×0.32 mm);柱温 80 ～
260℃, 程序升温 3℃/min;进样温度 250℃;氢火焰检测温度
250℃;进样量 4.0μl;分流比 50∶1;载气为高纯氮气。
1.3.2　气相色谱 -质谱条件 仪器为美国 AgilentTenchnologies
公司 HP6890GC/5973MS气相色谱 -质谱联用仪。 GC条件:HP
-5MS石英毛细管柱(30×0.25mm, 0.25μm);柱温 80 ～ 260℃,
程序升温 3℃/min;进样温度 250℃;柱前压 100 kPa;进样量 1.0
μl;分流比 15∶1;载气为高纯氦气。 MS条件:电离方式 EI;电子
能量 70 eV;传输线温度 150℃;离子源温度 230℃;质量范围 35 ～
500。
1.4　定性定量分析 采用 Wiley7n.1谱库检索定性 , 并通过查阅
参考文献加以确认粗糠柴的挥发性化学成分。 按照峰面积归一
化法计算出各化学成分的质量分数。
2　结果
本实验通过 GC-MS法对粗糠柴花的挥发性化学成分进行
了分析 ,共分离出 34个化合物 , 定性定量出 26个 , 占总组分的
66.55%, 总峰面积的 64.40%。 粗糠柴花挥发油的总离子流程
图见图 1, 化学成分分析鉴定结果见表 1。
图 1　粗糠柴花中挥发性成分的总离子流程图
3　讨论
挥发性成分中质量分数最高的是烃类(34.55%), 其次是酯
类(25.49%)、酮类(1.05%)、酚类(0.56%)、醛类(0.20%)和酸
类(0.03%)。 质量分 数大 于 1%的分 别是水 杨酸苄 酯
(17.70%)、二十九烷(10.53%)、三十一烷(6.25%)、苯甲酸苄
酯(5.96%)、二十七烷(5.70%)、二十五烷(4.93%)、环二十四
烷(3.58%)、二十三烷(1.09%)。挥发性成分中不少可以用于
医药方面 ,如苯甲醇可以用作抗菌剂;苯乙醇可用于赋形剂 ,抗菌
剂。另外酯类 、醛类可以用作香料或调味剂 ,如水杨酸苄酯广泛
用于日化香精中 ,是合成麝香的良好溶剂与定香剂 ,也可用于化
妆品香精中;苯甲酸苄酯可作为纤维素 , 清漆和 PVC的增塑剂 ,
精品配制香精 , 百日咳 ,气喘药等 ,用于治疗疥螨 , 抗寄生虫 ,也可
作麝香定香剂及樟脑代用品等。
粗糠柴作为一种药用植物可以清热利湿 ,用于急 、慢性痢疾 ,
咽喉肿痛 ,但过量会引起中毒 [ 5] 。原因应该与其化学成分的构
成有一定的关系 ,其作用机制有待进一步研究。
表 1　粗糠柴花的挥发性化学成分分析结果
No. t/min 化合物名称 分子式 相似度 相对含量(%)
1 5.87 苯甲醇 BenzylAlcohol C7H8O 94 0.16
2 7.46 苯甲酸甲酯 Benzoicacid, methylester C8H8O2 91 0.31
3 7.64 壬醛 Noanal C9H18O 87 0.20
4 8.00 苯乙醇 PhenylethylAlcohol C8H10O 94 0.02
5 8.92 2, 6, 6-三甲基 -2-环乙烯 -1, 4-二酮 2, 6, 6-Trimethyl-2-cyclohexene-1, 4-dione C9H11O2 95 0.84
6 9.67 2, 2, 6-三甲基 -1, 4-环己二酮 1, 4-cyclohexanedione, 2, 2, 6-trimethyl- C9H14O2 87 0.17
7 10.62 水杨酸甲酯 MethylSalicylate C8H8O3 91 0.16
8 13.10 壬酸 Nonanoicacid C9H18O2 70 0.03
9 14.64 4-羟基 -3, 5, 5-三甲基 -2-环己烯 -1-酮
4-Hydroxy-3, 5, 5-trimethylcyclohex-2-enone C9H14O2 87 0.04
10 15.90 2-甲氧基苯甲酸甲酯 Benzoicacid, 2-methoxy-, methylester C9H10O3 95 0.49
11 22.66 2, 6-二叔丁基 -4-甲基苯酚 ButylatedHydroxytoluene C13H24O 97 0.56
12 31.96 苯甲酸苄酯 BenzylBenzoate C14H12O2 96 5.96
13 35.57 水杨酸苄酯 Benzoicacid, 2-hydroxy-, phenylmethylester C14H12O3 91 17.70
14 38.46 邻苯二甲酸二丁酯 Dibutylphthalate C16H22O4 86 0.62
15 44.05 9, 12, 15-十八碳三烯 -1-醇 9, 12, 15-Octadecatrien-1-ol, (z, z, z)- C18H32O 94 0.31
16 48.46 二十三烷 Tricosane C23H48 95 1.09
17 51.18 二十四烷 Tetracosane C24H50 98 0.72
18 51.89 二十二碳二烯 1, 21-Docosadiene C22H42 99 0.63
19 53.86 二十五烷 Pentacosane C25H52 87 4.93
20 55.19 邻苯二甲酸二 2-乙基己酯 Bis(2-ethylhexyl)phthalate C24H38O4 91 0.25
21 56.78 二十六烷 Hexacosane C26H54 97 0.70
22 57.94 二十四碳二烯 1, 21-Docosadiene C24H46 83 0.42
23 60.40 环二十四烷Cyclotetracosane C24H48 99 3.58
24 60.65 二十七烷 Heptacosane C27H56 97 5.70
25 71.77 二十九烷 Nonacosane C29H60 99 10.53
26 90.52 三十一烷 Nonacosane C31H64 97 6.25
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.9 时珍国医国药 2010年第 21卷第 9期
　　协同进化(co-evolution)的观点是探讨生物多样性形成机制
的一个重要理论基础 。在已知的昆虫与植物所形成的专性授粉
互惠共生体系中 , 榕树 -榕小蜂 、丝兰 -丝兰蛾体系是经典实例 ,
国内外学者已经从不同角度进行了大量的研究 ,为我们理解植物
一传粉者互惠共生体系协同进化的机理和历史积累了宝贵的资
料。近些年的研究发现鳞翅目细蛾科头细蛾属昆虫与大戟科植
物之间也存在相似的协同进化关系 [ 6] 。粗糠柴植物的花白色 ,细
长 , 适合蛾类传粉。笔者在野外发现有蛾类在粗糠柴的花上停留
吸蜜。本研究利用气相色谱 -质谱联用技术对粗糠柴花的挥发
性成分进行定性定量研究 ,为进一步地研究该植物的传粉以及与
蛾类的协同进化关系提供了科学依据。
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制剂与炮制
收稿日期:2010-01-29;　修订日期:2010-05-30
作者简介:金　勇(1980-),男(朝鲜族), 吉林延吉人, 现任延边大学药学
院讲师 ,硕士学位 ,主要从事药物制剂新技术与新剂型研究工作.
＊通讯作者简介:尹寿玉(1960-), 女(朝鲜族), 吉林延吉人 ,现任延边大
学药学院教授 ,博士学位 ,主要从事药物制剂新技术与新剂型研究工作.
清热达郁颗粒中挥发油包合工艺研究
金　勇 1 ,尚丽霞 2 ,张英俊3 ,尹寿玉 1＊
(1.延边大学药学院 ,吉林 延吉　133000;
2.北京德众万全药物技术开发有限公司 ,北京　100097;　3.吉化集团公司总医院 ,吉林 吉林　132022)
摘要:目的 采用超声波法研究清热达郁颗粒中挥发油的 β -环糊精包合物制备工艺。方法 用正交设计实验考察最佳
包合工艺。结果 最佳包合工艺为 β -环糊精与混合挥发油比例为 9∶1,包合温度 20℃, 包合时间 20 min, 超声波频率为
30kHz。结论 此包合工艺合理 ,可行。
关键词:β -环糊精;　挥发油;　包合物;　清热达郁颗粒
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.09.134
中图分类号:R283　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2010)09-2408-02
　　清热达郁颗粒由清热达郁汤改制而成。清热达郁汤收载于
《现代名中医内科绝技》(修订版)[ 1] ,由生地 , 知母 、丁香 、桂枝等
10味药材组成 ,具有平调阴阳 、清热达郁之功效 , 用于治疗各种
血液病 、肝硬化 、腹水 、水肿 、水毒证 、妇女月经不调 、不孕等症。
方中丁香和桂枝所含挥发油 , 易挥发 ,对光和热不稳定 ,用量不易
控制。为此 , 本实验研究 β -CD包合工艺。
1　仪器与材料
AS3120A超声波清洗器(天津奥特赛恩斯仪器有限公司),
挥发油提取器(上海玻璃仪器厂), 丁香 、桂枝购至吉林省延吉市
成大药材公司(经鉴定为樟科植物桂枝和桃金娘科植物丁香), β
-CD(国药集团化学试剂有限公司),其它试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　清热达郁颗粒挥发油溶液的制备 按处方称取丁香和桂枝
药材适量 , 加 8倍量水 ,安装挥发油装置 , 提取 6 h, 收集挥发油 ,
配制成挥发油无水乙醇(1∶1)的溶液备用。
2.2　挥发油包合工艺的研究
2.2.1　包合物制备 称取干燥后的 β -CD适量置具塞三角瓶
中 , 加适量蒸馏水 , 加热溶解 , 自然放置至规定温度。 精密量取
“ 2.1”项的备用液适量 , 充分振摇后 ,超声处理 , 冷藏(4℃)24 h
以上 , 抽滤 ,滤饼用少量水和石油醚清洗 , 40℃恒温干燥 4 h, 得白
色粉末状 β -CD包合物。
2.2.2　包合物中挥发油量的测定 将所得包合物按 2005年版
《中国药典》[ 2]附录 “挥发油测定法”项下甲法进行提取 , 至油量
不再增加时停止加热 ,放置 1 h后读取挥发油量。
2.2.3　挥发油空白回收率的测定 精密量取 2 ml挥发油置圆底
烧瓶中 ,加水 250 ml, 连接挥发油提取器 , 加热 , 至油量不再增加
时停止加热 , 放置 1 h后读取所收集挥发油毫升数 ,按下式计算 ,
得空白回收率为 90%(n=3)。
空白回收率(%)=收集挥发油的量加入挥发油的量 ×100%
2.2.4　包合物工艺因素及水平的选择 根据预试验选择 β -CD
与油比例(A)、包合时间(B)、包合温度(C)、频率(D)为考察因
素 , 每个因素设 3个水平 ,以挥发油的包合率 、包合物收率为评价
指标 [ 3, 4](权重系数分别为 0.7, 0.3), 进行 L9(34)正交实验 。其
包合率 、收率 、综合评分计算方法如下 ,各因素水平见表 1。
包合物收率(%)= 挥发油包合物重量β -环糊精重量 +挥发油重量 ×100%
挥发油包封率(%)= 包合物中挥发油回收量加入挥发油量 ×空白回收率 ×100%
综合评分 =0.7×(包合率 /包合率max)+0.3 ×(包合物收
率 /包合物收率max)
表 1　L9(34)正交实验因素水平
水平 Aβ -CD∶挥发油
B
包合时间 /min
C
包合温度 /℃
D
频率 /kHz
1 3∶1 20 20 25
2 6∶1 30 30 30
3 9∶1 40 40 35
2.2.5　正交实验结果与方差分析 结果见表 2 ～ 3。由表 2、3直
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