全 文 ：·42· Chinese Journal of Information on TCM May 2006 Vol.13 No.5

·中药研究与开发·
蝉翼藤对小鼠脾细胞体外增殖和
淋巴因子分泌水平的影响
李勇文 1,李 丽 1,李植飞 1,徐 庆 1,李 梅 2,张士军 2
(1.桂林医学院药理教研室,广西 桂林 541001；2.广西医科大学药理教研室,广西 南宁 530021)
摘要：目的 探讨蝉翼藤醇提取物对小鼠淋巴细胞体外增殖和分泌白细胞介素-2(IL-2)与肿瘤坏死因子β(TNF-
β)的影响。方法 向小鼠脾细胞加入刀豆蛋白(ConA)和蝉翼藤醇提取物进行培养,以 MTT 法检测淋巴细胞增殖反应,
用 ELISA 法测定 IL-2 和 TNF-β分泌水平。结果 蝉翼藤醇提取物能增强 ConA 诱导的小鼠脾细胞的体外增殖和分泌
IL-2 和 TNF-β的水平。结论 蝉翼藤醇提取物对小鼠淋巴细胞活性有增强作用。
关键词：蝉翼藤；淋巴细胞增殖反应；白细胞介素-2；肿瘤坏死因子
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2006)05-0042-02
Effects of Extracts of Securidaca Inappendiculata Hassk on Cultured Mouse Spleen Cell
Proliferation and Secretion of Interleukin-2 and Tumor Necrosis Factor-β LI Yong-wen, LI Li, LI
Zhi-fei, et al (Department of Pharmacology, Guilin Medical College,Guilin 541001, China)
Abstract：Objective To study the effects of ethanol extracts of a Chinese medical herb stem and
radix of Securidaca inappendiculata Iassk (CYT), on lymphocyte proliferation and secretion of
interleukin-2 (IL-2) and tumor necrosis factor (TNF-β) of mouse spleen cells in vitro. Methods Different
concentrations of ethanol extracts of CYT were added to mouse spleen cell cultures supplemented
with ConA. Lymphocyte proliferation reaction was detected by MTT assay. IL-2 and TNF-β secreting
level were measured by ELISA. Results Ethanol extract of Securidaca inappendiculata Hassk increased
cultured mouse spleen cell proliferation and secretion of IL-2 and TNF-B in the presence of ConA.
Conclusion Ethanol extracts of CYT could raise mouse lymphocyte activities in vitro.
Key words：CYT；lymphocyte proliferation reaction；interleukin-2；tumor necrosis factor-β
蝉翼藤(Securidaca inappendiculata Hassk.)为远志
科、远志族蝉翼藤属攀援灌木[1]。本文报道蝉翼藤醇提取物
对小鼠脾淋巴细胞体外增殖和分泌白细胞介素-2(IL-2)与肿
瘤坏死因子-β(TNF-β)的影响。
1 实验材料
1.1 动物
昆明种小鼠,6～8 周龄,雌雄兼用,广西医科大学实验动
物中心提供(许可证号：桂动许字 2000 第 001 号)。
1.2 药物
蝉翼藤醇提取物,桂林医学院药理教研室提供。
1.3 试剂
RPMI 1640 培养基,美国 Gibco 公司,Cat №13200-035；
刀豆蛋白(ConA),瑞士 Fluka 公司；四甲基偶氮唑盐(MTT)：
美国 Sigma 公司,lot №3544B04；IL-2 和 TNF-β的 ELISA
检测试剂,美国 Genzyme 公司产品；小牛血清,美国 Gibco 公
司,Cat №16000-036。
1.4 仪器
自动酶标仪,BIO-RAD 公司,Model 450；IG5031 型酶联免
疫吸附检测仪,华东电子管厂产品。
2 方法及结果
2.1 对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响
2.1.1 小鼠脾细胞悬液制备[2-4] 脱颈椎处死小鼠,用 75%的
酒精浸泡消毒 30 min,无菌条件下取出脾脏,放入盛有适量无
菌 Hanks 液的小平皿中稍清洗,转移至青霉素小瓶中,用眼科
剪将脾脏充分剪碎。经 400 目不锈钢网筛过滤,制成单个细胞
悬液,用完全培养液清洗 3 次(<1 000 r/min 离心 5 min),以
台盼蓝排除法计数活细胞数在 95%以上。用完全培养液,将细
胞浓度调至 2×106/mL。
2.1.2 淋巴细胞增殖试验 将 5 µg/mL ConA 小鼠脾细胞悬
液(2×106细胞/mL)按每孔 160 µL 加入 96 孔培养板,各试验
组分别加入含不同浓度蝉翼藤醇提取物的RBMI 1640液20 µL,
各对照组加入 RBMI1640 液,试验组和对照组均设 8个平行孔
(n =8)。置 CO2孵箱(37 ℃,5% CO2)中培养,连续培养 96 h 后,
培养结束前4 h,每孔加入MTT 20 µL,于 CO2孵箱(37 ℃,5% CO2)
中继续培养。培养结束后,小心吸取上清液 100 µL 弃去,每
孔加二甲亚砜(DMSO)120 µL,微量振荡器振荡 5 min,使结晶
紫完全溶解。在自动酶标仪比色(检测波长 570 nm,参考波长
630 nm)测 OD 值。t 检验比较两组统计数据。结果见表 1。
2006 年 5 月第 13 卷第 5期 中国中医药信息杂志 ·43·

表 1 蝉翼藤醇提物对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响
(—x±s,n =8)
组别 剂量(µg/mL) OD 值
空白对照组 0.216±0.042
蝉翼藤醇提物组 0.064 0.261±0.048**
0.32 0.310±0.060**
1.6 0.388±0.047**
8 0.336±0.038**
40 0.335±0.037**
200 0.364±0.045*
注：与空白对照组比较,*P <0.05,**P <0.01(实验重复 3 次,下同)
在 0.064～200 µg/mL 范围内,蝉翼藤醇提物均能促进
ConA 刺激 T淋巴细胞发生增殖反应,其中 0.32 µg/mL 促增殖
反应的作用最强,其余有下降,与对照组相比较差异显著。
2.2 IL-2 的诱生与测定[5]
将含有 5 µg/mL ConA 的小鼠脾细胞悬液(2×106细胞/mL)
按每孔 500 µL 加入 24 孔培养板,各试验组分别加入含不同
浓度蝉翼藤醇提取物的 RBMI 1640。对照组加入 RBMI 1640
液 500 µL,试验组和对照组均设 6 个平行孔。置培养皿培养
48 h 后,获上清液,用 IL-2 ELISA 试剂检测各孔 IL-2 含量
(按照试剂盒说明操作)。t 检验比较两组统计数据。结果见
表 2。
表 2 蝉翼藤醇提物对小鼠脾细胞体外分泌 IL-2、TNF-β
的影响(—x±s,n =8)
组别 剂量(µg/mL) IL-2 TNF-β
空白对照组 0.751±0.137 27.13±6.14
蝉翼藤醇提物组 0.32 1.291±0.211** 30.84±3.41
1.6 1.413±0.391** 27.10±4.77
8 1.713±0.481** 21.94±5.95
2.3 TNF-β的诱生与测定[5]
方法同IL-2的诱生与测定,结果用TNF-β ELISA试剂检
测。结果见表 2。
3 讨论
蝉翼藤为远志科植物蝉翼藤的干燥根茎或根皮,具有祛
风湿、消肿止痛、活血化瘀、清热利尿之功,用于风湿骨痛、
跌打损伤、急性肠胃炎等症[6],为传统名药云香精、正骨水的
主药之一。有关蝉翼藤的化学成分研究报道不少,而关于其现
代药理学研究的报道却不多见。为了探讨蝉翼藤对免疫功能
的作用,本实验用小鼠脾细胞培养的方法初步研究了蝉翼藤
醇提取物对经 ConA 刺激后的 T 淋巴细胞增殖反应、IL-2 和
TNF-β分泌水平的影响。结果发现,蝉翼藤的醇提取物能促进
小鼠T淋巴细胞增殖反应,对 IL-2和 TNF-β分泌水平均有增
强作用,其机制有待进一步深入研究。
参考文献：
[1] 中国科学院昆明植物所.云南植物志[M].北京：科学出版社,1983.
261.
[2] 刘大基,刘解生,徐继勋,等.金疮止血消炎药抗炎作用机理的实验研
究[J].时珍国医国药,2001,12(7)：577.
[3] Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and
survival ： application to proliferation and cytotoxicity
assays[J].J Immunol Methods,1983,65(1-2)：55－63.
[4] 郑永唐,贲昆仑.测定细胞存活和增殖的 MTT 方法的建立[J].免疫学
杂志,1992,8(4)：266.
[5] 刘晓斌,刘永仙,符兆英,等.南柴胡提取物对小鼠脾细胞体外增殖和
淋巴因子分泌水平的影响[J].中国中医药信息杂志,2001,8(7)：38.
[6] 江苏植物研究所.新华本草纲要(第一册)[M].上海：上海科学技术出
版社,1988.292.
(收稿日期：2005-09-23,编辑：华强)

(上接第19页) 且肝肺两经均循行在人之胸胁,临床辨治必须
要知常达变,时刻把握证候的动态变化,注意燮理肝肺、活血
行气。邪痹肢节证多见于本病的早期患者,年龄较小,病程
短,sICAM-1 表达增高明显。sVCAM-1 虽与对照组无显著差异,
但也表现出了增高趋势,说明 AS 早期即可表现出急性免疫炎
症,髋、膝、踝、足跟、足趾等下肢关节疼痛肿胀；可有或无
腰背胯尻疼痛、晨僵,痛处见畏寒喜暖或无明显畏寒,反喜凉
爽、发热等,中医辨证为邪郁化热或湿热蕴结,脉络瘀阻,痹于
肢节,临证辨治务必要急则治标,标本兼顾,活血通络,利节强
督。肾虚督寒证 sICAM-1 水平在三证型中增高最显著,说明该
指标可能是 AS 慢性免疫炎症过程中重要的致炎因子,与病程
年龄等无关,临床以腰背、颈项、臀胯疼痛,活动屈伸不利,
甚至脊柱强直,畏寒喜暖,得热则舒等多见。因此治病求本,
补肾强督,调节免疫功能,则为 AS 的基本治法。
参考文献：
[1] 郑攸萸.中药新药临床研究指导原则(试行)[S].北京：中国医药科技
出版社,2002.120.
[2] 许杰洲,曾庆馀.强直性脊柱炎的疾病活动性、功能状态及预后评
价[J].中华风湿病学杂志,1998,2(4)：229.
[3] 马 骁,阎小萍,王 昊,等.HLA-B27 亚型与强直性脊柱炎中医辨证分
型[J].中华现代中西医杂志,2003,1(6)：527－530.
[4] 唐可京,李幼姬,谢灿茂.ICAM-1 和 VCAM-1 的结构与表达调控[J].国
外医学·分子生物学分册,2002,24(3)：173－177.
[5] Klimiuk PA,Sierakowski S,Lalosiewicz R,et al.Soluble adhesion
molecules (ICAM-1,VCAM-1 and E-Selectin) and vascular
endothelial growth factor(VEGF) in patients with distincts of
rheumataoid synovitis[J].Ann Rheum Dis,2002,61：804－809.
[6] 孙铁铮,吕厚山.IL-1β和 TNF-α在 RA 成纤维样滑膜细胞 ICAM-1 和
VCAM-1表达调控的机制研究[J].中华风湿病学杂志,2005,9(3)：133－137.
[7] 古洁若,黄 烽,颜光美,等.Remicade 调节强直性脊柱炎患者滑膜细
胞基因表达谱的初步研究[J].中华风湿病学杂志,2003,(7)10：527－
531.
[8] 王晓非,蒋 莉,张洪峰,等.伴有关节外表现的强直性脊柱炎患者血
中 sCD40L 和几种细胞因子的变化[J].中国医科大学学报,2005,34
(1)：57－59.
(收稿日期：2006-01-24,编辑：陈静)