全 文 ：2009年 8月　第 11卷　第 8期 中国现代中药 ModernChineseMedicine Aug.2009　Vol.11　No.8
[通讯作者 ] 　＊钟保恒 , E-mail:zhongbaoheng@163.com
HPLC测定飞扬草中槲皮苷的含量
钟保恒＊
(广西柳州食品药品检验所 ,广西　柳州　545001)
[摘要 ] 　目的:建立飞扬草中槲皮苷的含量测定方法。 方法:采用高效液相色谱法 , ZORBAXSB-Aq
(4.6mm×250mm, 5μm)色谱柱 , 柱温 25℃;流动相为乙腈 -0.2%磷酸溶液(23∶77), 检测波长为 256nm, 流
速为 0.8mL·min-1。结果:槲皮苷进样量在 0.1213 ～ 2.426μg呈良好的线性关系 , r=0.999 9, 平均回收率
98.25%, RSD=1.21%(n=6)。结论:该方法快速 , 简便 , 准确 , 为飞扬草药材的质量控制提供参考。
[关键词 ] 　高效液相色谱法;飞扬草;槲皮苷;含量测定
飞扬草 EuphorbiahirtaL.又名大飞扬草 、 大飞
羊 、大乳草 、 金花草等 , 为大戟科(Euphorbiaceae)
植物飞扬草的全草或带根全草 , 为一年生草本植物 ,
广泛分布于广东 、广西 、福建等地区 , 全草含黄酮
苷 、酚类 、 三萜等成分 , 具有清热 , 解毒 , 通乳 ,
渗湿 , 杀虫止痒功效 [ 1] , 可用于治疗肠炎 、 菌痢 、
上呼吸道感染 、 尿路感染 , 还可通乳 , 消肿 , 治疗
各种出血 , 外治皮炎 、 湿疹 、 顽癣等 [ 2-3] 。其酚类
成分中含有没食子酸 、 槲皮苷 、 杨梅苷等多种成
分 [ 4] , 主要有效成分之一的槲皮苷含量测定方法未
见文献报道 , 本文采用高效液相色谱法(HPLC)进
行测定 , 为飞扬草药材的质量控制提供参考。
1　仪器与试药
1.1仪器
Agilentl100高效液相色谱仪 (包括 Agilent紫外
检测器 、色谱工作站和自动进样器;美国 , 安捷伦公
司);UV2550紫外分光光度计(日本岛津);超声波
清洗器(AS7240BT天津奥特赛恩斯仪器有限公司)。
1.2试药
槲皮苷对照品(中国药品生物制品检定所 ,批号
111538-200403, 供含量测定用);乙腈(色谱纯 ,
美国 Fisher);水为自制超纯水;飞扬草药材于 2008
年 10 ～ 11月分别采自广西柳江 、 武宣 、象州 、融水
等地 , 原植物经本所中药室李玲副主任中药师鉴定
为大戟科植物飞扬草 EuphorbiahirtaL.的全草 , 药
材除去杂质 , 切段 , 晒干后置 60℃烘箱中干燥 24h,
粉碎 , 过二号筛备用 。
2　方法与结果
2.1色谱条件
ZORBAXSB-Aq(4.6mm×250mm, 5μm)色谱
柱 , 柱温 25℃, 流动相为乙腈 -0.2%磷酸溶液
(23∶77), 检测波长为 256nm, 流速为 0.8mL·min-1 ,
进样量 10μL。在该条件下 , 供试品中的槲皮苷与其
他杂质峰均达到较好的分离 , 分离度达 4.75, 理论塔
板数达到 9 000以上。供试品及槲皮苷对照品 HPLC
图谱见图 1。
图 1　飞扬草和槲皮苷对照品 HPLC图
2.2对照品溶液的制备
精密称取槲皮苷对照品(使用前置五氧化二磷
减压干燥器中干燥 24h)12.13mg置 100mL量瓶中 ,
加甲醇溶解并定容至刻度 , 摇匀 , 作为对照品溶液 。
2.3线性试验
精密吸取对照品溶液 1, 5 , 10, 15, 20μL进
样测定 , 以对照品峰面积为纵坐标 , 以进样量为横
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DOI :10.13313/j.issn.1673-4890.2009.08.009
2009年 8月　第 11卷　第 8期 中国现代中药 ModernChineseMedicine Aug.2009　Vol.11　No.8
坐标 , 得回归方程 Y=3 327.604 9X+21.979 2, r
=0.999 9, 表明槲皮苷在 0.121 3 ～ 2.426μg与峰面
积呈良好的线性关系 。
2.4供试品溶液的制备
2.4.1超声时间考察　分别取本品粉末 1g, 精密称
定 , 置具塞三角瓶中 , 精密加入甲醇 20mL, 称重 ,
超声提取 10, 20, 30, 40, 50min, 放冷 , 称重 ,
加甲醇补足重量 , 滤过 , 取续滤液用 0.45μL微孔
滤膜滤过 , 取此供试液进行测定 , 结果表明 , 超声
提取 40min时槲皮苷的峰面积最大 , 50min的峰面
积与 40min相比稍有减小 , 所以选择超声提取时
间 40min。
2.4.2溶剂用量考察　分别取本品粉末 1g, 精密称
定 , 置具塞三角瓶中 , 分别精密加入甲醇 10, 20,
30 , 40mL, 称重 , 超声提取 40min, 放冷 , 称重 ,
加甲醇补足重量 , 滤过 , 取续滤液用 0.45μL微孔
滤膜滤过 , 取此供试液进行测定。结果表明 , 10,
20 , 30, 40倍溶剂用量时测得槲皮苷的含量基本一
致 , 说明溶剂用量对槲皮苷的提出率影响不显著。
为确保槲皮苷活性成分得到充分提取 , 同时便于直
接测定 , 因此选择 30倍量溶剂作为提取溶剂用量。
2.4.3供试品溶液的制备　取本品粉末 1g, 精密称
定 , 置具塞三角瓶中 , 精密加入甲醇 30mL, 称重 ,
超声提取 40min, 放冷 , 称重 , 加甲醇补足重量 ,
滤过 , 取续滤液用 0.45μL微孔滤膜滤过 , 即得。
2.5精密度试验
精密吸取供试品溶液 , 重复进样 6次 , 每次
10μL, 槲皮苷峰面积的 RSD=0.058%, 表明仪器
性能良好。
2.6稳定性试验
取同一供试品溶液 , 分别于 0, 4, 8, 12, 24h
进样 , 测定其峰面积的 RSD=0.099%, 表明该供试
品溶液在 24h内稳定 。
2.7重复性试验
取同一供试品 6份 , 按 2.4.3项下方法操作制
成供试品溶液 , 分别测定含量 , 结果槲皮苷的平均
含量为 2.21mg·g-1 , RSD=0.65%(n=6), 表明方
法重现性良好。
2.8回收率试验
取 6份已知含量的样品 0.5g, 精密称定 , 置具
塞三角瓶中 , 分别准确加入槲皮苷对照品溶液适量 ,
按 2.4.3项下方法操作制成供试品溶液 , 进样 10μL
测定 , 计算回收率 , 结果见表 1。
表 1　槲皮苷加样回收率试验
样品量
/g
槲皮苷含
量 /μg
对照品加
入量 /μg
测得量
/μg
回收率
/%
平均回收
率 /%
RSD
/%
0.510 1.127 0.606 1.720 97.85 98.25 1.21
0.510 1.127 0.606 1.725 98.68
0.502 1.109 1.213 2.292 97.53
0.501 1.107 1.213 2.301 98.43
0.498 1.100 1.820 2.923 100.16
0.503 1.112 1.820 2.874 96.81
2.9样品测定
取 4个产地共 4批飞扬草药材 , 按 2.4.3项制
成供试品溶液 , 按拟定的色谱条件测定其含量 , 结
果见表 2。
表 2　槲皮苷含量测定结果
产地 槲皮苷平均含量 /mg·g-1 RSD/%
广西柳江 2.21 0.65(n=6)
广西武宣 2.51 0.12(n=3)
广西象州 2.52 0.23(n=3)
广西融水 2.31 0.51(n=3)
3　讨论
3.1检测波长的选择
取槲皮苷对照品溶液 , 用 UV2450紫外分光光
度计 (岛津)在 200 ～ 400nm处扫描 , 槲皮苷在
256nm波长处有最大吸收 , 故选择 256nm为测定
波长。
3.2提取方法的选择
由于槲皮苷在弱碱水 , 不同浓度的甲醇 、乙醇中
均有一定的溶解度 , 曾使用上述溶剂进行提取 , 并比
较了超声提取 、 水浴回流提取等不同方法进行药材前
处理 , 结果均可检出槲皮苷成分 , 说明不同方法均可
确保活性成分得到有效提出 。超声波提取具有操作简
单 、不需要加热 、有效成分提取率高等特点;而用甲
醇作为溶剂 , 便于提取溶液直接过滤进样测定 , 减少
操作步骤 , 降低 RSD值 , 确保回收率。因此 , 本实
验选择超声波作为提取方法 、甲醇作为提取溶剂。经
实验测定 , 30倍溶剂用量 、连续超声 40min为最佳提
取条件。该提取方法是否为飞扬草中槲皮苷成分的最
佳提取方法 , 有待进一步研究。
3.3不同产地样品中槲皮苷含量比较
检测了 4个产地各 1个批次的飞扬草中槲皮苷
的含量 , 结果表明各产地飞扬草中槲皮苷的含量差
别不大 。实验结果表明 , 建立的含量测定方法快速 、
简便 、 准确 , 为制定飞扬草药材的质量标准提供了
参考。
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2009年 8月　第 11卷　第 8期 中国现代中药 ModernChineseMedicine Aug.2009　Vol.11　No.8
参考文献
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志 , 1991, 16(1):38.
(收稿日期　2009-04-27)
DeterminationofQuercitrininEuphorbiaHirtaL.byHPLC
ZhongBaoheng
(GuangxiLiuzhouInstituteforDrugControl, LiuzhouGuangxi545001, China)
[ Abstract] 　Objective:ToestablishaHPLCmethodforthedeterminationofquercitrininEuphorbiahirta
L.Methods:UsingZORBAXSB-Aq(4.6mm×250mm, 5μm)Column, at25℃, acetonitrile-0.2%(23∶77)
wasusedasthemobilephase, thedetectionwavelengthwas256nmandtheflowratewas0.8 mL·min-1.Results:
Thequercitrinhadagoodlinearityrelationshipbetween0.121 3μgand2.426μg, r=0.9999, theaveragerecovery
ratewas98.25% withRSD=1.21%(n=6).Conclusion:Themethodissimple, rapidandaccurate, andissuit-
ableforthequalitycontrolofEuphorbiahirtaL.
[ Keywords] 　HPLC;EuphorbiahirtaL.;Quercitrin;Contentdetermination
(上接第 29页)
[ 4] C.M.Teng, W.Y.Chen, W.C.Ko, etal.Antiplatelet
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ofHealth, 2005:45-47.
(收稿日期　2008-08-08)
QualityEvaluationofRadixAngelicaSinensisfromDifferentHabitatsbyHPLC-DAD
DuanRan1 , XueRunguang2 , LiJun1 , YangShaohua2 , DongTingxia1 , TSIMWah-keungKarl1
(1.CenterforChineseMedicineR＆DandDepartmentofBiology, TheHongKongUniversityof
ScienceandTechnology, HongKong, China.2.AlpineEconomicPlantsResearchInstitute,
YunnanAcademyofAgriculturalSciences, Lijiang;Yunnan674100 China)
[ Abstract] 　Objective:TodeterminethecontentsofferulicacidandligustilideinRadixAngelicaSinensis
(RAS)fromDiferentHabitats.Methods:ThesampleswereseparatedbyanAltimaC18 column(4.6mm×250mm,
5μm)usingacetonitrile-0.5% aceticacidwatergradientsystemasmobilephase.Thewavelengthforquantitative
determinationwassetat325nm.Results:Thecontentsofferulicacidandligustilidewerehigherintailpartthan
thoseinheadpartofalRASsamples.RASsamplesfromYunnanprovincehadalitlehigheramountofligustilide
thanthosefromGansuprovince, whiletherewasnosignificantdiferenceforthecontentofferulicacidinthesamples
fromdiferenthabitats.Conclusion:ThecontentofligustilidevariedsignificantlyinRASwithdiferentgrades, which
suggestedthatmoreatentionshouldbepaidtoclinicaluseofdiferentgradsofRASinpractice.
[ Keywords] 　 RadixAngelicaSinensis;HPLC;Ferulicacid;Ligustilide;Qualityevaluation
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