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黑面神水提物抗炎作用实验研究



全 文 :黑面神水提物抗炎作用实验研究
彭伟文,谭泳怡,梅全喜,戴卫波
(广州中医药大学附属中山医院,广东中山 528401)
摘要:目的 探讨黑面神水提物的抗炎作用,为临床用药提供科学的实验依据。方法 通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验及腹腔注射醋酸
致小鼠腹腔毛细血管通透性增高实验,观察黑面神水提物对炎症反应的影响。结果 黑面神水提物高、低剂量组对二甲苯引起的小鼠
耳廓肿胀及由醋酸引起的组织毛细血管的通透性均具有极显著的抑制作用。结论 黑面神水提液具有明显的抗急性炎症作用。
关键词:黑面神;水提物;抗炎作用;耳廓肿胀;毛细血管通透性
中图分类号:R285. 5 文献标志码:A 文章编号:1673 - 4610(2012)03 - 0145 - 03
基金项目:广东省中医药局立项资助项目(编号:No. 2010073) ;
广东省中山市科技局立项资助项目(编号:No. 20102A033)
作者简介:彭伟文,教授,硕士生导师,主要从事中药制剂开发与研究工作,Tel:0760 - 88815106
Experimental Study on Anti-inflammatory Effect of
Water-extract of Breynia fruticosa
PENG Wei-wen,TAN Yong-yi,MEI Quan-xi,DAI Wei-bo
(Zhongshan Hospital,Guangzhou University of TCM,Zhongshan 528401 Guangdong,China)
Abstract:Objective To investigate the anti-inflammatory effect of water-extract of Breynia fruticosa,and to provide
scientific experiment evidence for clinical applications. Methods Various inflammatory models,including the ear edema
induced by xylene in mice,the increase of capillary permeability induced by acetic acid in mice were used to explore the
anti-inflammatory of water-extract of Breynia fruticosa. Results Compared with control group,high and low doses of
Breynia fruticosa could significantly inhibit ear edema,and both doses of Breynia fruticosa could significantly inhibit the
increase of capillary permeability. Conclusion The water-extract of Breynia fruticosa has significant anti-inflammatory
effect.
Key words:Breynia fruticosa;water-extract;anti-inflammatory effect;ear edema;capillary permeability
黑面神为大戟科植物黑面神 Breynia fruticosa(L.)
Hook. f.的干燥地上部分,又名青凡木、钟馗草,主要分
布于广东、广西、海南、云南、福建、浙江、贵州等地,为
广东习用地产药材,具有清热袪湿、活血解毒的功
效[1]。常用于治疗湿疹、皮肤瘙痒、漆过敏等皮肤病以
及支气管炎、跌打损伤等[2]。现代研究表明,本品含有
萜类、生物碱、黄酮、鞣质等类成分,具有抑菌、抗病毒
等药理作用[3]。为进一步开发合理应用本品,本实验
对黑面神水提物进行了抗炎药理作用探讨,现将实验
结果报告如下。
1 实验材料
1. 1 仪器
YLS-Q4 耳肿打耳器(直径 8 mm,山东省医学科学
院设备站) ;UV-754 型紫外可见分光光度计(上海第三
分析仪器厂) ;微量移液器(上海求精生化试剂仪器有
限公司) ;TD25-WS 48 孔多管架自动平衡离心机(长沙
湘仪离心机仪器有限公司) ;JA1203 电子天平(上海天
平仪器厂)。
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·2012 年 03 月第 22 卷第 3 期· 今日药学
1. 2 试药
黑面神(广州致信中药饮片有限公司;经广东省中
山市中医院曾聪彦主任中药师鉴定为植物 Breynia fru-
ticosa(L.)Hook. f. 的干燥地上部分) ;伊文思兰(Ev-
ans’s blue) (中国医药公司;批号:871225) ;消炎痛(吲
哚美辛肠溶片,广东华南药业股份有限公司;批号:
110401) ;冰醋酸(广州化学试剂厂;批号:20070902 -
2) ;二甲苯(广州化学试剂厂;批号:970302 - 2)。
1. 3 动物
SPF级昆明小鼠,(20 ± 1)g,均雌雄各半,购于广
东省医学实验动物中心,动物生产许可证号:SCXK
(粤)2008 - 0002。饲养于广东省中山市中医院中药药
理实验室。
2 实验方法及结果
2. 1 黑面神水提物的制备
取黑面神药材粗粉 500 g,用冷水浸泡 1 h,第 1 次
煎煮用 5 L水煮沸 1 h,过滤。第 2、3 次用 2. 5 L 水煎
煮沸 30 min,过滤。合并 3 次滤液,4 ℃冷藏 24 h 后抽
滤,旋转蒸发仪中浓缩滤液至 1 000 ml,保存于冰箱中,
临用前配制成所需浓度。
2. 2 统计学处理
采用 SPSS 13. 0 for Windows软件处理。数据用珋x ± s
表示,采用单因素方差分析,进行 Dunnet-t或 t’检验。
2. 3 黑面神水提物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影
响[4]
取体重(20 ± 1)g小鼠 40 只,按体重随机分为空白
对照组、消炎痛对照组和黑面神水提物高、低剂量组,
各组 10 只,雌雄各半。空白对照组灌予生理盐水 10
ml /kg体重。黑面神水提物高、低剂量组分别灌予 2. 7
g生药 /ml、0. 9 g 生药 /ml,灌胃体积为 10 ml /kg 体重。
每天 1 次,连续给药 5 d。第 5 天消炎痛组灌予 0. 65
mg /ml消炎痛混悬液 20 ml /kg体重 1 次。末次给药 60
min后,各组小鼠右耳用精密移液器均匀涂以二甲苯
30 μl /只双面致炎,左耳对照。20 min后脱颈椎处死动
物,沿耳廓基线剪下两耳,剪去毛,叠加完整,用直径为
8 mm打孔器在同一部位打下两圆耳片,精确称重。以
左右耳片重量之差为肿胀度,计算肿胀抑制率,肿胀抑
制率(%)=[(空白对照组平均肿胀度 -给药组平均肿
胀度)÷空白对照组平均肿胀度]× 100%,结果见表 1。
实验结果表明,消炎痛对照组、黑面神水提物高剂量
组及低剂量组与空白对照组比较,对二甲苯致小鼠耳廓
肿胀度在统计学上均具有极显著性差异(P < 0. 01) ,由
此提示黑面神水提物对二甲苯致小鼠耳廓急性炎性肿胀
具有明显抑制作用,并呈一定剂量依赖关系。
表 1 黑面神水提物对小鼠二甲苯耳廓肿胀的影响
(珔x ± s,n =10)
组别
剂量
(g生药 /kg)
肿胀度
(mg)
肿胀抑制率
(%)
空白对照组 - 14. 9 ± 5. 6 -
消炎痛对照组 0. 013 6. 3 ± 3. 3** 57. 72
黑面神水提物组(高) 27 5. 7 ± 4. 4** 61. 74
黑面神水提物组(低) 9 7. 0 ± 4. 9** 53. 02
注:与空白对照组比较:**P < 0. 01
2. 4 黑面神水提物对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透
性的影响[5,6]
取体重(20 ± 1)g小鼠 40 只,按体重随机分为空白
对照组、消炎痛对照组和黑面神水提物高、低剂量组,
各组 10 只,雌雄各半。空白对照组灌予生理盐水 10
ml /kg体重。黑面神水提物高、低剂量组分别灌予 2. 7
g生药 /ml、0. 9 g 生药 /ml,灌胃体积为 10 ml /kg 体重。
每天 1 次,连续给药 5 d。第 5 天消炎痛组灌予 0. 65
mg /ml消炎痛混悬液 20 ml /kg 体重 1 次。最后一次给
药后 60 min,每只小鼠尾静脉注射 0. 5%伊文思兰溶液
0. 1 ml /10 g体重,随即腹腔注射 0. 6%冰醋酸溶液 0. 1
ml /10 g体重致炎,20 min 后脱颈椎处死小鼠,打开动
物腹腔用 5 ml冰生理盐水冲洗腹腔,并将冲洗液转移
至 10 ml容量瓶中加生理盐水定容至 10 ml,所得定容
液转移至试管中并用 3 000 r /min 离心 10 min,取上清
液,在紫外可见分光光度计 590 nm波长处测 OD值,以
OD值表示腹腔液中的伊文思兰含量。计算抑制率
(%)=[(空白对照组平均光密度 -给药组平均光密
度)÷空白对照组平均光密度]× 100%,结果见表 2。
表 2 黑面神水提物对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响
(珔x ± s,n =10)
组别
剂量
(g生药 /kg)
OD值
抑制率
(%)
空白对照组 - 0. 364 ± 0. 152 -
消炎痛对照组 0. 013 0. 218 ± 0. 105**40. 11
黑面神水提物组(高) 27 0. 179 ± 0. 125**50. 82
黑面神水提物组(低) 9 0. 187 ± 0. 088**48. 63
注:与空白对照组比较,**P < 0. 01
实验结果表明,消炎痛对照组和黑面神水提物高、
低剂量组腹腔洗液的 OD值与空白对照组比较,在统计
学上均有极显著性差异 (P < 0. 01)。说明黑面神水提
物组能明显抑制醋酸致小鼠毛细血管通透性增高,提
示黑面神水提取物对炎性过程中毛细血管通透性增高
具有一定的抑制作用。
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Pharmacy Today ·2012 03 Vol. 22 No. 3·
3 讨论
炎症是机体对损伤所产生的防御反应。这种反应
主要由血管与细胞的应答所构成,其本质是清除与消
灭引起损伤的各种致炎因子和促进损伤的修复[4,7]。
二甲苯的作用使组织中肥大细胞释放组织胺、5 -羟色
胺等血管活性胺类,引起局部组织中微血管扩张和通
透性升高,以及来自其它细胞和血浆中的炎症介质(如
白细胞三烯、激肽、前列腺素、补体成分等)继续维持或
强化对血管的活性作用,使组织液外渗,引起水肿;另
外,还有炎症过程中血管内皮细胞自身的损伤引起组
织液和部分血液的外渗等因素造成[8]。而给小鼠腹腔
注射稀醋酸溶液,在 H +的刺激下,腹腔内毛细血管通
透性增高,血液内体液成分从血管内向腹腔渗出,当静
脉内注射伊文思兰,该染料可与血浆蛋白瞬间结合,而
随体液成分渗入腹腔,测量腹腔内的染料量,即可代表
炎性渗出的多少[5]。
本实验通过建立二甲苯致小鼠耳廓肿胀和醋酸致
小鼠毛细血管通透性增高两种实验性炎症模型,观察了
黑面神水提物的抗炎作用,结果表明,黑面神水提物对炎
症早期的毛细血管扩张、通透性亢进、渗出和水肿等表现
有抑制作用,表现出明显抗炎作用。至于其何种成分通
过何种途径发挥抗炎作用,尚有待于进一步研究。
参考文献
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(收稿日期:2012 - 02 - 14
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图 8 B厂制剂在磷酸盐缓冲液中的溶出曲线
图 9 C厂制剂在磷酸盐缓冲液中的溶出曲线
4 讨论
以上研究显示在 0. 1 mol /L 盐酸溶液和磷酸盐缓
冲液(pH6. 8)中 C厂家制剂与原研制剂的溶出曲线一
致,B厂家制剂与原研制剂的溶出曲线有明显差异,但
在水中仿制制剂与原研制剂的溶出曲线有明显差异,
表明作为氟康唑胶囊的溶出介质,水比 0. 1 mol /L盐酸
溶液和磷酸盐缓冲液(pH6. 8)对制剂质量具有更好的
分辨能力,建议修订该溶出度检验方法的溶出介质。
氟康唑仿制制剂和原研制剂的质量存在差异,与
原料药的晶型、制剂处方和工艺有密切关系,与原研药
溶出曲线不一致的厂家,建议研究原料药的晶型或并
改进处方工艺。
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·2012 年 03 月第 22 卷第 3 期· 今日药学