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织黑囊纂
金 柑 组 一 织 培 养 研 究
主秀琴 王润珍 林 荣
犷西植物研究所)
因此 , 植物组织墙养诱导形成芽 , 不仅与外源激素
有关 , 而且因植物材料而异 。 金柑的徽茎和上胚轴
作为快速繁殖是较好的材料 , 对这两种外植休我们
又作进一步试验。
表 1 不同珍拉休砂形成茅的形响
胜.师一30崖Z一护勺ú…诊.八U卜一。/尸01匕n”,J.口一一勺月JnJR口 外 植 体数量 (块 》 形 一 成, } 芽生长情况
U114万302Q0功拓切
金柑为柑桔类果树的优良品种之一 。 果实含有
磅 年富的维生素 , 、 酸甜适中 , 可 生食 , 又可作蜜饯 、
杨俏国内外 , 深受群众欢迎 。
` 国内外对于柑桔类果树的组织培养研究多集中
于柑桔属 (口 l邝砂 , 柑 桔的 胚 和胚乳培养分化植
株〔’ 一幻 , 茎尖、 嫩茎 、 叶片培养的器官分化 , 四季
拮的龙药墙养获得单倍体植株〔 `〕等已有许多报道 ,
但金柑的组织培养仅有零星报澎 ,-即 。 本文报道金
精上肠轴和嫩茎培养形成大量丛生绿芽和完整再生
植株 , 为金柑良种的快速繁殖提供新的途径。
下胚轴
子 叶
上胚轴
片茎尖叶嫩权材 料 和 方 法
丛生
单生
丛生
2一 5
丛生材料 (罗浮 而 r t “ n` I la , a摺 a r i t。 ( L o u r . )
S , 让 g le 歹采自广西阳朔县 , 选择高产植株 ,经选种 ,
种子用 J . 艺%珑 C几消毒20 分钟 , 培养无菌苗 , 当苗
高约 10 厘米时 , 采取胚轴和嫩茎 , 切成长约 5 毫米
的小段 , 子叶和叶片切成约 5 x s 毫米吕的小块 , 每
处理接种2。一 2份块。
培养基以 M s 、 N产〕、 M T及改 良M s⑧作为基
本培养基 。 根据试验要求分别附加不同浓度的 6一带
基氨基嗓吟 (B A ) 、 6一糠基嘿岭 ( K T ) 、 玉米素 (Z T ) 、
蔡乙酸 (N A A ) 、 叫睐 一了酸 (I B A ) 、 水 解 乳 蛋 白
( L H )
。 糖浓度2一 5% , 琼脂 0 . 8% , p H为5 . 8。 以
1公斤 /厘米 2高压蒸汽灭菌2 0分钟。
在约2 0 00勒克司下 , 每日用 日光灯照光 O一 10
小时 , 于 2 0一 30℃静置培养 。
二 、 不伺甚本培养荟时姗官形成的影晌
采用M s 、 姚 、 M , 及改良M s等四个不同的基
本培养基 , 附加 B A I . 。毫克 /升的试验结 果 (见 表
2) , 均能诱导上胚轴和嫩茎形成芽 , 但其形成梢的
能力有很大的差异。 M T和改良M S为前人作为柑桔
类组织培养的主要基本场养基 , 虽然均能诱导其形
成丛生绿芽 , 但形成梢的能力差 , 同时M T 培养基
需要维生素水平较高 ,改良M S培养基需要维生素种
类较多 , 而 N 。和 M S培养基不仅能诱导形成芽 , 而
且形成梢的频率也较高 , 所以 , 我们认为金柑的组
织培养 以叽和M S作为基本培养基较为适宜 。
表 2 不同基本培养基衬 器 官形成的影响
尸合八Unù,曰尸O召ù,上`1n1226渊
结 果 和 讨 论
一 、 不同外植体对形成芽的影晌
采用金柑的下胚轴 、 , 子叶、 上胚轴 、 叶片 、 嫩
茎 (带节茎段和节间) 及根尖等不同外植体。 在附加
有r B A O. 5毫克 /升 和 B人2 . 。毫克/升的 N’ 墙荞基
抓 上 , 其试验结果 (见表 1) 表明 , 不同 外植 体对芽的
形成有明显的差异。 嫩茎和上胶轴 , 形成芽频率较
高「子叶和叶片形成芽频率较低 ,而根尖未形成芽。
外植体 形 成 芽 形 成 梢
数量 (块 ) 块 % t挥碧 块 % 平均梢数(条 /块 )
N 。
M S
M T
改良M S
2 1
。
5
13
。
0
1卜 0
14
。
5
4 . 5
1 , 5
1一 0
2
。 O
三 、 细胞分教家对器官形成的影晌
金柑组织培养诱导芽的形成较容易 , 而使芽发
DOI : 10. 13938 /j . i ssn. 1007 -1431. 1985. 01. 009
育成苗频率较低 。 为了进一步探讨提高形成梢的频
率 , 我们 进行激素对金柑器官形成的影响试验 。
以 M S为基本培养基 , 单独附加 Z T 、 B A , K T
等三种不同细胞分裂素 , 浓度以 。 . 5一 2 . 0 毫克 /升
的试验结果表明 , B A 和 Z T对诱导金柑上胚轴形成
芽的效果较好 , 随着浓度的增加 , 芽的 增 殖 数 由
81
.
8 % 增至 1 0 % , 但梢的形成反而 由 84 %下降到
20 %
, 且茎叶生长受到抑制 , 当 B A 浓度提高到 2 . 。
毫克 /升时 , 形成许多绿芽 , 但大部分不能发育成
苗 ; K T不仅形成芽频率低 , 而且形成单生芽 , 而
对照 (基本培养基 )无芽形成 。 可见 , 金柑 _ L胚轴培
养诱导器官的形成 , 细胞分裂素是必需的 , 以 B A
。 . 5一 1 . 。毫克 /升和 Z T I . 。一 2 . 。毫克 /升为宜 。 金柑
的嫩茎培养亦获得相似的结果 。
四 、 不同激素组合对器官形成的影响
在 M S和N 。 的基本培养基中 , 附加不 同浓度的
B A 〔 0 . 5一 2 . 。毫克 /升 ) 和 IB A (0 . 1一 。 . 5 毫克 /升 )
的各种组合对上胚轴形成器官 的影响表明 , 不同基
本培养基 。 要求附加激素的浓度是不同的 。 以M S
为基本培养基 , 在 I B A O . 1毫克 /升存在的情况 下 ,
6 A 浓度从 0 . 5毫克 /升至 2 . 。毫克 /升 , 形成芽的频率
均达到 1 0 0% , 而且芽的密度随着 B A浓度的增加而
增多 , 但当 B A 浓度增至 2 。 。毫克 /升时 , 梢的形成
却明显下降 ,且苗小 , 这与单独附加 B A的结果相似 。
而在工B人和 B A 的浓度同时增加时 , 虽然形成芽数
较多 , 但多数不能发育成苗。 因此 , 以 M S为基本
培养基 , 附加 IB A o . 1毫克 /升和 BA o . 5一 2 . 0毫克 /
升配合使用 , 对形成芽和梢的生长亦有促进作用 。
以 N 。 为基本培养基 , 则 以附加 工B A o . 5 毫克 /升与
B A I
.
0一 2 . 。毫克 /升配合使用 , 效果较好 。
五 、 有机附加物的作用
在附加相同激素的培养基中 , 再添加不 同浓度
的 L` H , 以不添加 L H作对照 , 其试验结果 (见表 3 )
表明 , 添加适量的L H可促进上胚轴形 成 芽和梢的
生长 , 以附加 2 0 一 40 。毫克 /升效果较好 。 随着 L H
浓度的增加 , 形成芽的频率反而下降 , 梢的生长也
受抑制 , 这可能由于浓度高致使产生 有 毒 物 质所
致 。
六 、 糖份对器官形成的影响
植物组织和细胞培养 , 一 般以蔗糖作为碳源 。
为了探讨不同碳源对器官分化的影响 , 我 们进行了
白糖和蔗糖的比较试验 。 在附加相 同激素 的 N 。 和
M S培养基中 , 按原培养基的糖份含量 , 分别加入
等量的 白糖和蔗糖 , 其试验结果 (见表 4 )表明 , 金
柑组织培养完全可以用白糖代替蔗糖 , 其不论对芽
的形成和梢的生长均获得相似的结果 , 这 样可大大
地降低成本 。
表 4 不 同碳源对 器官形成 的影响
糖 份 基本 外植体 } 形 成 芽 形 成 梢
`克 /升 , 培养基 数量 而} 一万几平巧、穿濒(块 ) 板 { 邢 { (个 /块 》均芽数 块 % 平均稍炎
(个 /块 》 (条 /块 )
白糖 5 0 N乡
::
20 10 0
。 0
:::
一
:::: :::蔗糖
5 0 9 0
。
0 16 .
1 8 23一
白松 3 0 八1 5
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}
4
. 。
蔗糖 3 0 10 .仑 `魂…。。 . 3…; 4 · 。
表 3 水解礼蛋 白行金桔上胚
轴形成 器官的影响
~一一产 .一水 解 } 外植体乳蛋自 {
(毫克 /升 ’ }数最 (块 )
形 成 芽 成 稍
块 {% {释 )万刁平i闭窄i觅止兰卫丛步二维全
ǔ Jnùné
.…作匕óhn八OCn乙乃o口é合户32 0 04 0 0
6 0 0
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1 5
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2 5
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0
1
.
5
1
,
5
3
。
0
1
。
5
糖类物质在培养基中 , 作为碳源和提高渗透压
的作用 。 为 了进一步探索适宜的白糖浓度 . 我们进
行了不同浓度的白糖试验 , 其结果表明 , 金柑上胚
轴诱 导器官分化 , 以 N。 作为基本 培养基 , 白糖浓
度以 5%为宜 ; 而 M S培养基 ,则以 3一 4%自糖为宜 。
糖浓度对器官分化的影响 , 可能与改变培养基渗透
压有关 。
在试验中还发现 , 在附加相同激素的从 和M S
基本培养基中 , 金柑叶组织均在 4% 的白糖浓度中 ,
形成芽频率较高 , 分别为 76 %和 48 % , 而且也有利
于梢的生长。 可见 , 植物组织培养诱导器官发生 , 不
仅与外源激素有关 , 而且与糖份浓度也有一定的关
系 。
金柑的嫩茎和上胚轴在适宜的培养基中 , 培养
后约 l 周 , 组织开始膨大 , 颜色逐渐转为 淡绿色 ,
培养约 2 周开始形成愈伤组织 , 培养约 i 个月 , 在
愈伤组织开始形成许多丛生绿芽 , 随后长出梢 , 将
无根苗转入生根培养荃 , 获得完整再 生植株 (照片
l一 3) 。 将丛生芽分开转到新鲜培养基继续培养 , 可
促进芽的增殖 , 培养约 2个月 , 可 长出粗壮 的绿芽 、
梢和密集的小芽 , 又可将密集小芽分开进行继代培
养 , 能繁殖大量绿苗 。
4功5U65n山乃六U八曰né六口q匕n八ēUc乙nù八Uù刁q口合序硬Ré线a只8186
壮的根 , 有利于移栽成活 。 在不含生 长素的 N 。 培
养基 , 亦有个别长根 , 而含有较高浓度的 N A A 的
培养基 , 则形成大量愈伤组织 , 然后长出根系 , 移
栽洗根时容易脱落 , 影碑移栽成活。
一 补金柑的试 ;看苗 , 移裁劝揭开试看棉花塞 , 让幼
苗在自然光或培养室光照下锻炼两天 , 取出幼苗 、
洗净根部硒弃基 , ` 栽植于营养箩或盆中 , 基土用三
分之二草皮泥和兰分之一的砂棍合 , 移栽后盖上玻
璃罩 2一 3周 , 待幼苗长出新叶后揭盖 , 让幼苗在自
然条件卞生长 , 幼苗移栽获得成活 (照片 4 ) 。 苗高
2一 4厘米 , 叶片较大 、 具 4一 6枚 , 从茎基部长出粗
壮根 l 条 , 根长月卜 4厘米的壮苗 , 移栽成活率可达
90 % 似上 , 而根细多 、 苗搔、 叶小伪弱苗 , 成活率
仅 5住%左右 。 一般成活率在孚a% 左右 , 幼苗生长 良
乐 -
主 要 参 考 文 献
照 片一 ` t 。 一茎段簿天带舟成愈舫奴织 娜 2 。 、形
成如椒衣长皮枕; 乳 再生完整小植
林 , 4。 移栽成活植株 。
专、 :娜协铆娜奔声举金柑组织培养涛导形库芽、 长出梢在原培养基贰熬蒸撇:薰
活。 经附衅种生长 , 的试脸。 表。一以合M”
基本培养塞 , 附加N A A以 2毫克 /升效某最好 ,生根
率达90 % 以上 , 且根系生长校好 , 从茎基部长出格
〔 1 ) 王大元等 : 用组织墙养法繁殖柑桔 , 《遗传学
报 》 , 1 9 7 8年一 第 5志 , 第 2期, 1 3 3一 1 3了页
〔 2 〕 王大元等` 从胚乳培养再生三倍体柑桔植株 ,
欢甲国科瓢 , 1铆 8年 , 第 4 期 , 寸” 一“ 。页〔 3 〕 二陈振光今 柑格花粉植株 的诱导 , 《遗传学
孩眺 一 : 。云件 , 第必卷 , 一第 : 期扩 1 89一 19 1页口 j 林条辱: 金括组织诗养的初步研究 , 护西桩物分, 1 0 8 2牟 , 第 2 卷 , 第 ,初 , n 一 13 页
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· 单通讯勿, , 985 年 , 第 ,栩; 第盯页
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一 生理学短讯万, 19 鸽年 ` 章 6 期 , 了33一 3 7贡
口 〕 朱至清等 . 通过氮源比较建立一种较好 的水
稻花药培养基 , 《中国科孚今 , 19 75 年 , 第 5期 ,
、
48 4一 4弱页
〔 色j C五妞t返,分记称
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《中国农业文梅一植物保护》 (双月衬 )征求 1 9 85 年仃户- 「 一 f
; 本刊集中乓咚钾内埠物保护学发犀本平 , 动态、 趋势那成就 ,
杂草 、 鸟兽害等的生态学 、 生理生化学 , 病理学及其防治方法等 ,
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