全 文 ：第30卷 第6期 浙 江 林 业 科 技 Vol. 30 No.6
2 0 1 0年 11月 JOUR. OF ZHEJIANG FOR. SCI. & TECH. Nov., 2 0 1 0

文章编号：1001-3776（2010）06-0052-03

高速逆流色谱法分离纯化白鲜皮中梣酮的初步研究

张红晶 1,2，王 琦 1*，时东方 2，赵立春 3，王 晶 2，吴桂梅 2，刘春明 2*
（1. 吉林农业大学，吉林 长春 130118；2. 长春师范学院，吉林 长春 130032； 3. 河北大学 药学院，河北 保定 071002）

摘要：利用高速逆流色谱技术分离纯化白鲜皮中的梣酮，结果表明，选择 V（正己烷）：V（乙酸乙酯）：V（乙
醇）：V（水）= 1：1：1：1系统来分离，上相作为固定相，下相作为流动相，流速为 1.5 mL/min，仪器转速 1 000
r/min，分离结果经高效液相色谱（HPLC）检测纯度达到 99%。
关键词：白鲜皮；高速逆流色谱；分离；梣酮
中图分类号：S567.2 文献标识码：B

Preliminary Study on Isolation and Purification of Fraxinellone from
Dictamnus dasycarpus by High-speed Countercurrent Chromatography

ZHANG Hong-jing1,2，WANG Qi1，SHI Dong-fang2，ZHAO Li-chun3，WANG Jing2，WU Gui-mei2，LIU Chun-ming2
（1. Jilin Agriculture University, Changchun 130118, China; 2. Changchun Normal University, Changchun 130032, China; 3. The Pharmaceutical
Sciences College, Hebei University, Baoding 071002, China）

Abstract: High-speed Countercurrent Chromatography (HSCCC) was used to isolate and purify Fraxinellone from Dictamnus dasycarpus. Isolation
was performed with a two-phase solvent system composed of hexane:ethylacetate:ethanol:water = 1:1:1:1:1（V/V）by eluting the lower aqueous phase
at a flow-rate of 1.5 mL/min and a revolution speed of 1 000 r/min. The purified Fraxinellone could reach purity of 99% by high performance liquid
chromatograph (HPLC). HSCCC is recommended to prepare and purify the active constituents from D. dasycarpus.
Key words: Dictamnus dasycarpus; High-speed Countercurrent Chromatography; isolation; Fraxinellone

高效离心分配色谱（HPCPC）技术是高速逆流色谱技术的一种，是利用溶质在两种互不相溶的溶剂系统中
分配系数的不同，从而实现分离的色谱技术。高速逆流色谱法不需要对样品进行复杂处理，与传统柱层析法相
比，它具有分离速度快、样品吸附低、分离重现性好、不会吸附、污染、损失样品等优点[1]。根据紫外吸收色
谱图可良好重复收集样品，若与制备液相色谱结合，则可快速、大量的制得相应纯度的标准品[2]。高速逆流色
谱在生物碱、黄酮、酚类、醌类、苷类、脂肪酸、多肽等化合物分离中得到广泛应用[3~4]。
白鲜皮为芸香科白鲜属植物白鲜（Dictamnus dasycarpus）和狭叶白鲜（D. angus tifolius）的干燥根皮，具
有祛风、燥湿、解毒等功效[5]。近年来的研究表明，白鲜皮中的化学成分主要有两类：生物碱类和内酯类，其
中梣酮（fraxinellone）作为新型的肝病治疗药物，具有良好的保肝降酶及抑制肝纤维化等活性，并具有抑菌、
杀虫等活性[6]。目前，梣酮的药理作用已成为国内外专家学者研究的热点，分离制备梣酮单体对进一步开发新
的天然药物具有十分重要的意义。本文采用 HPCPC分离、纯化、制备中药白鲜皮活性成分梣酮，为制备白鲜皮
有效成分的化学对照品提供了一种简捷实用的新方法。
收稿日期：2010-07-09；修回日期：2010-10-25
作者简介：张红晶（1984－），女，吉林长春人，硕士研究生，从事生药学及天然药化研究；通讯作者。

6期 张红晶，等：高速逆流色谱法分离纯化白鲜皮中梣酮的初步研究 53

1 材料与方法
1.1 材料与试剂
白鲜皮，购于北京同仁堂药店（长春分店）；梣酮标准品（中国药品生物制品检定所）；正己烷、乙酸乙酯、
无水乙醇、甲醇、正丁醇及乙醇（分析纯，北京化工厂）；甲醇（色谱纯，美国 Fisher公司）；超纯水（18.2ΩPa）。
1.2 仪器与设备
HPCPC-80型高效离心分配色谱仪（日本），检测器为 UV检测器；Waters 2695-2998型高效液相色谱仪（美
国），PDA检测器，C18色谱柱（150×4.6 mm，5μm）和 C18保护柱；S180H超声波提取仪（德国 Elma公司）；
BS-124S型电子天平（Sartorius德国）；HS-Z11-Ⅱ电热蒸馏水器（上海跃进医疗器械厂）；纯水器（法国Milli
Q公司）。
1.3 白鲜皮粗提物的制备
白鲜皮粉碎后精确称取 50 g，用 85%乙醇溶液，料液比 1：20，在 80℃水浴中提取 2次，每次提取 1 h，合
并滤液，用旋转蒸发仪减压浓缩回收乙醇，浓缩液置真空干燥箱中干燥保存备用。
1.4 高速逆流色谱
1.4.1 溶剂系统选择 应用高速逆流色谱仪分离样品时，溶剂系统的选择是最关键的问题。选择溶剂系统一般
遵循以下原则：①形成稳定的两相溶剂体系，沉降时间小于 30 s，保留率大于 50%；②不造成样品的分解与变
性，避免选择毒性大的溶剂；③样品在系统中有合适的分配系数，一般在 0.5 ~ 2.0[7]。选用正丁醇-乙酸乙酯-水、
正丁醇-乙酸乙酯-乙醇-水、正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水 3个系统作为分离梣酮的溶剂系统。
1.4.2 沉降时间的测定方法 在 10 mL刻度试管中按溶剂系统的比例加入混合溶剂，充分振荡后静置，分层的
时间记为沉降时间。
1.4.3 分配系数 K 的测定方法 在 10 mL试管中按照选定的比例分别加入各种溶剂，充分振摇，静置分层，分
取上、下层溶液各 1 mL，加入少量白鲜皮乙醇提取物，再经过充分振荡，静置分层，然后分别取上下层溶液各
500μL，过 0.45μm 微孔滤膜，利用高效液相色谱法测定溶剂体系上、下相所含样品的浓度，以下相中组分峰
面积与上相中组分峰面积的比来求得样品中各类成分在该溶剂系统中的分配系数（K）。流动相为甲醇：水 = 58：
42（V/V），柱温 25℃，流速为 0.80 mL/min，检测波长 228 nm。
1.4.4 HPCPC 分离 将按比例配置的溶剂系统在分液漏斗中混合，充分振荡，静置约 20 min，分离后超声脱气
20 min。将上相（固定相）以 3.0 mL/min的流速泵入并确定充满分离螺线管后暂停泵的工作，同时按选定的转
速启动主机、开启检测器，以 228 nm波长进行检测。等待主机转动稳定后将下相(流动相)以选定的流速泵入，
待流动相从管柱出口流出且基线稳定后将样品溶液由进样圈注入（样品为白鲜皮乙醇提取物分别用 1 mL溶剂系
统的上下层溶解）。管柱出口处的流出物经紫外检测器检测，将各峰对应的收集液分别浓缩，待测。
1.5 HPLC 纯度检测 对白鲜皮样品和经 HPCPC 分离纯化所收集的纯化液进行 HPLC 图谱分析。液相条件如
下：流动相为甲醇：水 = 58：42（V/V），柱温 25℃，流速 0.8 mL/min，检测波长 228 nm；色谱柱为：SunFireTMC18
（4.6×150 mm，5μm）；进样量为 10μL。
2 结果与分析
2.1 HPCPC 溶剂系统的选择结果
由表 1可以看出，梣酮在溶剂系统 1和 2中的分配系数远
大于 5，而系统 3和 4的分配系数远小于 1，都不适合；结合实
际上机实验结果分析，我们选择 HPCPC溶剂系统为正己烷-乙
酸乙酯-乙醇-水（1:1:1:1，V/V），进行对白鲜皮中梣酮的分离。
2.2 HPCPC 分离结果
白鲜皮粗提物的高速逆流色谱分离图谱见图 1。由图 1可见，在本实验条件下经 HPCPC分离纯化 150 min
表 1 不同溶剂体系的分配系数比较
Table 1 Comparison among isolation parameters of
different solvent systems
系统组成 比例（V/V） K
正丁醇-乙酸乙酯-水 3：2：5 10.48
正丁醇-乙酸乙酯-乙醇-水 3：2：0.5：4 8.33
正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水 3：5：3：5 －
正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水 2：1：2：1 0.49
正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水 1：1：1：1 1.90
注：“－”代表在上层或下层溶液中没有溶解。

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后，得到 2个较明显的峰。分别收集这 2个峰，经浓缩干燥并采用 HPLC对它们的纯度进行检测。
2.3 HPLC 纯度分析结果
样品及各分离峰色谱图如图 2、图 3所示。经HPLC检测，用峰面积归一法测得峰 2接收液纯度达到 99%以上。
3 结论
本实验应用高速逆流色谱法对白鲜皮粗提物进行了分离纯化，在溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水
（1:1:1:1，V/V）时分离得到一个单体化合物和两个混合物组分（分别占 40%和 60%）。通过与标准品及已知
文献[8]对比，初步确定峰 2为单体化合物梣酮，按照 HPLC色谱峰面积计算，其含量高于 99%。应用 HPCPC 分
离白鲜皮中的化学成分，由于不用固态载体作固定相，避免了载体填充所形成的不可逆吸附，减少了样品的损
耗，具有简便、快速、分离效率高等特点，对于有效的分离纯化内酯类物质具有较好的实际应用价值；另外，
样品可以作为标准品用于药物分析或药理与毒理实验，为梣酮的进一步定性和结构鉴定提供一定的帮助。
参考文献：
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时间/min
0
图 1 白鲜皮粗提物的高速逆流色谱分离图
Figure 1 HPCPC of extract from D. dasycarpus
1
2
10 90 30 110 50 70 130 150 170
0
100
200
300
400
500
600
700
800
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ts 1
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A
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32
5 10 15 20 25 30 40 45
图 2 白鲜皮样品 HPLC 色谱图
Figure 2 HPLC chromatogram of extract from D. dasycarpus
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图 3 分离得 2 号峰接收液 HPLC 色谱图
Figure 3 HPLC chromatogram of fraction No.2 obtained by HPCPC
3
4 20 8 24 12 16 28 32 36
A
U

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0.10
0.20
0.30A
U

4 8 12 16 20 24 28 32
图 4 梣酮标准品 HPLC 色谱图
Figure 4 HPLC chromatogram of standard Fraxinellone
0.00
0.10
0.20
0.30
0.40
0.50
40 36
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