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金橘胆胃丸质量标准研究



全 文 :·38· 中国药业 China Pharmaceuticals
2011年第 20卷第 2期
批号
011307002
011307003
011307004
011308001
011308002
011308003
011308004
011308005
总含量(mg / g)
1. 491 1
1. 466 9
1. 637 2
1. 541 4
1. 561 3
1. 572 6
1. 538 7
1. 502 9
RSD (% )
0. 85
1. 20
0. 77
0. 56
0. 33
0. 14
0. 11
0. 25
表 5 样品含量测定结果(n = 4)述溶液各 20 μL,注入液相色谱仪,记录色谱图,测定峰面积。以质量
浓度(X)对峰面积(Y)进行线性回归,回归方程为 Y = 90 057 X -
3 625,r = 0. 999 9 ( n = 5 )。结果表明栀子苷质量浓度在 0. 490 4 ~
24. 52 μg /mL范围内与峰面积线性关系良好。
精密度试验:取同一栀子苷对照品溶液,重复进样5 次,记录
色谱图。结果峰面积的 RSD为 0. 88% ( n = 5 )。
稳定性试验:取同一供试品溶液(批号为 011307002),室温下
放置,分别于 0,2,4,6,8 h 时进样,测定峰面积。结果的 RSD 为
0. 86% ( n = 5 )。
重复性试验:取同一批(批号为 011307002)的样品 5 份,依法
测定含量。结果平均含量为 1. 491 1 mg / g,RSD为 1. 54% ( n = 5 ),
表明方法重现性良好。
加样回收试验:取已知含量的样品(批号为 011307002)约 0. 3 g,
精密称定,共 5 份,置具塞锥形瓶中,分别精密加入栀子苷对照品,
按供试品溶液制备方法操作及样品测定项下方法测定含量, 计算
回收率。结果见表 4。
2. 3. 4 样品含量测定
分别吸取 2. 3. 1 项下的对照品混合溶液与供试品溶液各
20 μL,注入液相色谱仪,测定峰面积,用外标法计算含量。结果见
表 5。
3 讨论
用 TLC 法鉴别小儿导赤
片中栀子,斑点清晰,专属性
强,且操作简便。
通常大黄蒽醌类成分的检
测波长为 254 nm,选用该波长
时,其他组分及辅料无干扰。
样品用甲醇超声处理后直
接进样所得色谱基线波动较
大,分离度差,且提取不完全,测得的含量低 [3 - 5 ]。本试验先后用甲
醇、氯仿作溶剂,并采用超声、加热回流、酸水解后提取的方法,大
黄中的蒽醌类成分已基本提取完全,测得的含量高。
方法学考察结果表明,用 HPLC 法测定该复方制剂的大黄中
大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酸、芦荟大黄素总含量,方法及
栀子的栀子苷含量,方法简便可靠,分离度好,结果稳定。
参考文献:
[ 1 ] WS3 - B - 3537 - 98,卫生部药品标准·中药成方制剂 (第十九册 )·小
儿导赤片 [ S ] .
[ 2 ] 国家药典委员会 . 中华人民共和国药典(一部)[M ] . 北京:化学工业出
版社,2005.
[ 3 ] 肖培根 . 新编中药志 (第一卷 ) [M ] . 北京:化学工业出版社,2002.
[ 4 ] 方 彬,吕风莲,刘传玲,等 . 高效液相色谱法测定虎杖中大黄素的含
量 [ J ] . 中国药师,2005,19(2):106 - 107.
[ 5 ] 张玉臣,刘学东,王永平,等 . HPLC测定大黄颗粒中大黄素和大黄酚的
含量 [ J ] . 中国药师,2005,19(3):158 - 159.
(收稿日期:2009 - 06 - 29;修回日期:2010 - 05 - 24 )
金橘胆胃丸质量标准研究
张 艳
(江苏省连云港药品检验所,江苏 连云港 222006)
摘要:目的 探讨金橘胆胃丸的质量标准。方法 采用薄层色谱法鉴别金橘胆胃丸中柴胡、木香、香附,用高效液相色谱法对制剂中橙皮苷进
行定量分析。结果 薄层色谱图中,供试品溶液色谱在与对照药材溶液色谱相应位置上出现相同颜色的斑点。在选定的色谱条件下,橙
皮苷进样质量浓度在 19. 84 ~ 158. 72 μg /mL范围内与峰面积线性关系良好,r = 0. 999 7,平均回收率为 99. 45%,RSD为 0. 64%(n = 6)。
结论 所用方法可靠、准确,专属性强,可有效控制金橘胆胃丸的质量。
关键词:金橘胆胃丸;薄层色谱法;高效液相色谱法;质量标准
中图分类号:R284. 1;R286 文献标识码:A 文章编号:1006 - 4931 (2011 )02 - 0038 - 02
金橘胆胃丸为连云港中医院制剂,由生鸡内金、橘皮、柴胡、木
香、香附等 13味中药组方,具有利胆和胃、消食化石的作用,临床上
主要用于治疗胆囊炎、慢性胃炎、胆囊结石、肝内外胆管结石等,效
果显著。本研究提高并完善了该药的质量标准 [1 ],增加了柴胡、木
香、香附的薄层色谱鉴别和橘皮中橙皮苷的含量测定,现报道如下。
1 仪器与试药
Agilent 1200 型高效液相色谱仪。橙皮苷对照品(批号为
110721 - 200613)、柴胡对照药材(批号为 120992 - 200504)、木香
对照药材(批号为 120921 - 200506)均来自中国药品生物制品检定
所; 金橘胆胃丸(批号为 20091113,由连云港市中医院制剂室提
供);薄层层析用硅胶G板;乙腈(色谱纯),水(重蒸水),其他试剂
(分析纯)。
2 方法与结果
2.1 定性鉴别(薄层色谱法)
柴胡 [ 2 ]: 取本品3 g,研细,加甲醇 20 mL,超声处理 20 min,滤
过,滤液蒸干,加 2% NaOH 溶液 10 mL,置水浴上加热 30 min,放
冷,加正丁醇 10 mL,振摇提取,分取正丁醇溶液,蒸干,残渣加甲醇
2 mL使溶解,作为供试品溶液。另取柴胡对照药材 0. 5 g,同法制成
对照药材溶液。按处方配制除去柴胡制成阴性对照品,按照供试品
溶液的制备方法制备,作为阴性对照品溶液。吸取上述 3 种溶液各
5 μL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板
上,以三氯甲烷 -甲醇 -水(30 ∶ 10 ∶ 1)为展开剂,展开,取出,晾干,
喷以 2%对二甲氨基苯甲醛 10%的硫酸乙醇溶液,在 105 ℃加热约
5 min。供试品溶液色谱中,在与对照药材溶液色谱相应位置上显相
同颜色的斑点,而阴性对照品溶液色谱则无此斑点,见图 1 A。
木香:取本品3 g,研细,加乙醚 30 mL,加热回流 30 min,滤过,
滤液挥干,残渣加乙酸乙酯 1 mL使溶解,作为供试品溶液。另取木
香对照药材 0. 5 g,同法制成对照药材溶液。按处方配制除去木香
制成阴性对照品,按照供试品溶液的制备方法制备,作为阴性对照
品溶液。吸取上述 3 种溶液各 3 μL,分别点于同一以羧甲基纤维素
表 4 栀子苷加样回收试验结果 ( n = 5 )
样品含量(μg)
149. 17
149. 11
149. 06
149. 20
149. 01
加入量 (μg )
150. 10
150. 14
150. 08
150. 19
150. 15
测得量 (μg )
301. 50
302. 25
301. 89
303. 34
302. 07
回收率 (% )
100. 75
101. 00
100. 92
101. 32
100. 97
X (% )
100. 99
RSD (% )
0. 21
檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨
药物鉴定
中国药业 China Pharmaceuticals ·39·
2011年第 20卷第 2期
A B
1. 供试品溶液 2. 对照药材溶液 3. 阴性对照品溶液
A. 柴胡 B. 木香
图 1 薄层色谱图
取样量(g)
1. 010 0
1. 001 7
1. 021 6
1. 022 6
1. 021 1
1. 011 7
样品含量(μg /mL)
29. 97
29. 82
30. 26
30. 30
30. 26
30. 01
加入量(μg /mL)
20. 11
20. 11
40. 20
40. 20
60. 31
60. 31
测得量(μg /mL)
50. 01
49. 62
70. 01
70. 51
90. 35
90. 34
回收率(%)
99. 65
98. 46
98. 88
100. 02
99. 64
100. 03
X(%)
99. 45
RSD(%)
0. 64
表 1 橙皮苷加样回收试验结果(n = 6)
A. 对照品溶液
B. 供试品溶液
C. 阴性对照品溶液
图 2 高效液相色谱图
表 2 样品含量测定结果(n = 6)
批号
20090401
20090705
20091013
含量 (mg / g )
4. 42
4. 51
4. 59
RSD (% )
0. 9
0. 7
1. 1
钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板上,以环己烷 -丙酮(10 ∶ 3)为展开
剂,展开,取出,晾干,喷以 5%香草醛硫酸溶液,加热至斑点显色清
晰。供试品溶液色谱中,在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同
颜色的斑点,而阴性对照品溶液色谱则无此斑点,见图 1 B。
2.2 含量测定(高效液相色谱法)
2. 2. 1 色谱条件
色谱柱:Agilent Eclipse XDB
C18柱(150 mm × 4. 6 mm,5 μm); 流
速:1. 0 mL /min; 柱温:25 ℃; 流动
相:乙腈- 0. 3%磷酸溶液(17 ∶ 83);
检测波长:284 nm;进样量:10 μL。
在此条件下,色谱图见图 2。
2. 2. 2 溶液制备 [3 ]
精 密 称 取 橙 皮 苷 对 照 品
9. 92 mg,置 50 mL 量瓶中,用甲醇
溶解(必要时超声处理)并定容至刻
度,制成质量浓度为 198. 4 μg /mL
的贮备液; 分别精密量取1. 0,
2. 0,4. 0,6. 0,8. 0 mL,各置 10 mL
量瓶中,加甲醇稀释至刻度,分别
制成质量浓度为 19. 84,39. 68,
79. 36,119. 04,158. 72 μg /mL 的
溶液,即得对照品溶液。取本品适
量,研细,取约 2 g,精密称定,精密
加入甲醇 50 mL,称定质量,置水
浴上加热回流 1 h,放冷,再称定质
量,用甲醇补足减失的质量,摇匀,
滤过,精密量取 5 mL,置 25 mL 量
瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得供试品溶液。按处方比例配制缺橘
皮的阴性样品,按供试品溶液制备方法制备,即得阴性对照品溶
液。
2. 2. 3 方法学考察
标准曲线绘制:分别精密量取2. 2. 2项下的对照品溶液各 10μL,
注入高效液相色谱仪测定峰面积。以对照品质量浓度(μg)为横坐
标、峰面积为纵坐标进行线性回归,回归方程为 Y = 27. 777 +
14. 803 X,r = 0. 999 7 ( n = 5 )。结 果 表 明 橙 皮 苷 质 量 浓 度 在
19. 84 ~ 158. 72 μg /mL范围内与峰面积线性关系良好。
精密度试验:精密吸取对照品溶液10 μL,重复进样 6 次,测定
峰面积。结果的 RSD = 0. 72%(n = 6),表明仪器精密度良好。
稳定性试验:吸取同一供试品溶液,每隔2 h测定 1次,12 h内
连续测定 6 次。结果橙皮苷含量的 RSD = 0. 51%,表明供试品溶液
在 12 h内稳定。
重现性试验: 取同一批(批号为 20091113)样品,按样品含量
测定项下方法平行操作 6 份,依法测定。结果橙皮苷平均含量为
4. 52 mg / g,RSD = 1. 1%,表明方法重现性较好。
加样回收试验:取已知含量的样品6 份,每份 1 g,分别加入橙
皮苷对照品适量,按供试品溶液制备方法制备溶液并测定含量,计
算回收率。结果见表 1。
2. 2. 4 样品含量测定
取 3 批不同批号的金橘胆胃
丸,依法制备供试品溶液,分别精
密吸取对照品溶液和供试品试液
10 μL,按拟订的色谱条件测定并
计算含量。结果见表 2。
3 讨论
2005 年版《中国药典 (一部 )》中,柴胡薄层色谱鉴别中采用的
展开剂为乙酸乙酯 -乙醇 -水(8 ∶ 2 ∶ 1),木香采用的展开剂为三
氯甲烷 -环己烷(5 ∶ 1),对于该制剂,展开速度均较慢,且分离度
较小; 而柴胡改用三氯甲烷-甲醇 -水(30 ∶ 10 ∶ 1)、木香改用环
己烷 -丙酮(10 ∶ 3)后展开速度快,分离度好。供试品溶液在与对照
药材溶液色谱对应位置上显相同颜色的斑点; 该制剂在与柴胡对
照药材溶液色谱相应的位置上至少显 5 个相同颜色的斑点,与木
香对照药材溶液色谱相应的位置上至少显 2 个相同颜色的斑点,
阴性对照品溶液无干扰,表明方法可行。
为取得更好的分离效果,对色谱柱和流动相进行了选择,分别
比较了 Agilent Eclipse XDB - C18 柱(150 mm × 4. 6 mm,5 μm),
Lichrospher C18柱(200 mm × 4. 6 mm,5 μm),Water C18 柱(150 mm ×
4. 6 mm,5 μm),发现前一种流动相效果较好。分别比较了流动相乙
腈 - 0. 3%磷酸溶液(21 ∶ 79)[ 4 ]、乙腈 - 0. 3%磷酸溶液(19 ∶ 81)、乙
腈 -0. 3%磷酸溶液(17 ∶ 83)、结果发现乙腈 -0. 3%磷酸溶液(21 ∶ 79)
未使橙皮苷达到完全分离,乙腈 - 0. 3%磷酸溶液(19 ∶ 81)虽使橙
皮苷完全分离但效果不是很好,而乙腈 - 0. 3%磷酸溶液(17 ∶ 83)
能使橙皮苷达到充分完全的基线分离,与其他成分之间也能达到
完全的基线分离,且色谱峰形较对称。故选择乙腈 - 0. 3%磷酸溶
液(17 ∶ 83)为流动相。
作者简介:张艳(1975 -),女,主管中药师,主要从事药物分析
工作,(电话)0518 - 82093762。
参考文献:
[ 1 ] 国家药典委员会 . 中华人民共和国药典(一部)[M ] . 北京:化学工业出
版社,2005:525.
[ 2 ] 吴成立,王小龙,张培奇.双清口服液中桔梗、柴胡的薄层鉴别方法 [ J ] .
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[ 4 ] 郑国平,陈 翔 . HPLC法测定金果饮中橙皮苷的含量 [ J ] . 中国中医药
科技,2009,16 (5 ):384 - 385.
(收稿日期:2010 - 04 - 08 )
药物鉴定
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A
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B
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