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药理效应法对藏药熏倒牛不同提取工艺的评价



全 文 :△基金项目:甘肃省中药药理与毒理学重点实验室资助项目(2011
- Z - 01)
作者简介:景明(1963 -) ,男,教授,主要从事中藏药资源与产品开
发研究。Tel:(0931)8761250,E - mail:jm@ gszy. edu. cn.
工艺与制备
药理效应法对藏药熏倒牛不同提取工艺的评价△
景 明1,2 李 炀1 王晶晶1 蔺兴遥1,2 刘喜平1 任 远1,2
(1.甘肃中医学院,甘肃 兰州 730000; 2.甘肃省中药药理与毒理学重点实验室,甘肃 兰州 730000)
摘 要:目的:研究藏药熏倒牛的提取工艺。方法:采用小鼠耳廓二甲苯致炎、小鼠热板法致痛实验,观察熏倒牛不同工艺
提取物对抗炎、镇痛作用的影响。结果:熏倒牛传统水煎工艺提取物、传统水煎醇沉工艺提取物、醇提工艺提取物均有抑制
二甲苯致小鼠耳肿胀的作用,均可提高小鼠热板法致痛的痛阈(P < 0. 01) ,但醇提取物的抗炎、镇痛效果明显优于水煎提
取物和水煎醇沉提取物(P < 0. 01)。结论:熏倒牛乙醇提取物的抗炎、镇痛作用显著,其药理效应明显优于水煎和水煎醇
沉工艺。
关键词:药理效应;熏倒牛;提取工艺
中图分类号:R291. 2 文献标识码:B 文章编号:1006 - 6810(2012)05 - 0062 - 02
藏药熏倒牛为蔷薇纲牦牛儿苗亚纲熏倒牛科植物 B.
iebersteiniacea的干燥地上部分,藏名译音为明见赛保,民
间又称臭花椒、狼尾巴。主要分布于甘肃、青海、宁夏和四
川(诺尔盖)等地[1]。具有消炎止痛,清热解毒,清血热,祛
风毒的作用,用于治疗各种炎症、结核症、丹毒、疟疾、咽喉
肿痛、胃痛、全身水肿、中风、虫蛇咬伤等[2]。对熏倒牛化
学成分及药理作用的研究已有报道[3 - 4],但用药理效应法
评价熏倒牛提取工艺的研究尚未见报道。本实验采用药理
效应法评价熏倒牛的提取工艺方法,为其开发和利用提供
参考依据。
1 材料
1. 1 药品与试剂:二甲苯(天津市德恩化学试剂有限公
司,批号 20070914) ;戊巴比妥钠(北京化学试剂公司,批号
060222) ;其余试剂均为分析纯;熏倒牛药材经甘肃农业大
学药用植物教研室陈垣教授鉴定为熏倒牛 B. heteroste-
mon。
1. 2 仪器:RB - 200 智能热板仪(成都泰盟科技有限公
司) ;BT125D 电子分析天平(北京赛多利斯仪器有限公
司) ;KQ -100 超声波清洗器(昆山市超声技术有限公司) ;
R -200 旋转蒸发仪(瑞士 BUCHI 公司) ;HH - 601 恒温水
浴锅(金坛市恒丰仪器公司)。
1. 3 动物:昆明种小鼠,体质量(20 ± 2)g,雌雄兼用,由甘
肃中医学院实验动物中心提供,合格证号 SCXK(甘)2011
- 0001;动物颗粒饲料由北京科奥协力饲料有限公司提供。
2 方法[5 - 6]与结果
2. 1 不同工艺提取物的制备
2. 1. 1 传统水煎工艺提取物的制备:称取熏倒牛药材粉末
200g,加 15倍量水煎煮 1. 5h,滤取药液,药渣再用 12 倍量水
煎煮 1. 5h,合并两次药液,滤过,滤液浓缩至 200mL,备用。
2. 1. 2 传统水煎醇沉工艺提取物的制备:称取熏倒牛药材
粉末 200g,加 15 倍量水煎煮 1. 5h,滤取药液,药渣再用 12
倍量水煎煮 1. 5h,合并两次药液,滤过,滤液浓缩至 1:1(g
·mL -1) ,搅拌下加入乙醇,使含醇度达 70%,滤过,滤液回
收乙醇后浓缩至 200mL,备用。
2. 1. 3 醇提工艺提取物的制备称取熏倒牛药材粉末
200g,加 15 倍量 70%乙醇回流提取 1. 5h,滤取药液,药渣
再用 12 倍量 70%乙醇回流提取 1. 5h,合并两次药液,滤
过,滤液回收乙醇后浓缩至至 200mL,备用。
2. 2 对小鼠热板法致痛的影响:选择痛阈值合格的雌性小
鼠 48 只,随机分为 4 组,分别为空白对照组、水煎提取组、
水煎醇沉组、乙醇提取组。按热板法测定每只小鼠痛阈值
3 次,取其平均值作为给药前痛阈值。各组分别灌胃给药,
每只 0. 2 mL(10g原药材 /kg) ,对照组给予等容量蒸馏水,
连续给药 7d。末次给药后 1h 测定各小鼠痛阈值,并计算
痛阈提高率。各组痛阈值提高率分别为水煎提取物 46.
49%、水煎醇沉提取物 36. 99%、乙醇提取物 102. 04%,表
明 70%乙醇提取物镇痛作用最明显。结果见表 1。
痛阈提高率(%)=(给药后平均痛阈值 -给药前平均
痛阈值)/给药前平均痛阈值 × 100%
表 1 熏倒牛提取物对小鼠热板致痛的影响(x ± s,n = 12)
组别 剂量(g /kg)
给药前痛阈
(x ± s)
给药后痛阈
(x ± s)
差值
空白对照组 - 13. 08 ± 2. 87 13. 26 ± 3. 26 0. 18 ± 2. 02
水煎提取组 10. 0 12. 69 ± 3. 76 18. 51 ± 2. 675. 90 ± 2. 30▲*
水提醇沉组 10. 0 13. 11 ± 3. 79 17. 96 ± 2. 594. 85 ± 1. 75▲*
乙醇提取组 10. 0 12. 76 ± 3. 02 25. 78 ± 3. 3213. 02 ± 2. 29▲*
注:各组自身比较,▲ P <0. 01;各组与对照组比较,* P <0. 01。
26 中国民族医药杂志 2012 年 5 月第 5 期
DOI:10.16041/j.cnki.cn15-1175.2012.05.029
2. 3 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响:小鼠 48 只,雌雄各
半,随机分为 4 组,分别为空白对照组、水煎提取组、水煎醇
沉组、乙醇提取组。各组小鼠右耳涂药 1 次,每次 0. 2mL
(10g生药 /kg) ,空白对照组涂以等容量蒸馏水,连续 3d,末
次给药 30min后,各给药组用蒸馏水洗去耳廓上的药物,并
于右耳的内侧均匀涂以二甲苯,每只 0. 05mL,左耳作为对
照。30min后处死动物,用直径 8 mm的打孔器于左右耳对
称处打下耳片,分别称重,计算各组动物的肿胀度,并计算
肿胀抑制率。70%乙醇提取物能够显著抑制小鼠耳肿胀
(P < 0. 01) ,水煎提取物、水煎醇沉提取物能够抑制小鼠
耳肿胀(P < 0. 05)。结果见表 2。
耳片肿胀度 =致炎侧耳片质量(右)-对照侧耳片质
量(左耳)
抑制率(%)=(对照组平均肿胀度 -给药组平均肿胀
度)/对照组平均肿胀度 × 100%
表 2 熏倒牛提取物对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(x ± s,n = 12)
组别 剂量(g /kg) 肿胀度 /mg 抑制率 /%
空白对照组 - 11. 13 ± 1. 77 9. 54 ± 2. 53
水煎提取组 10. 0 9. 05 ± 2. 34 18. 69 ± 3. 09 *
水提醇沉组 10. 0 9. 71 ± 2. 56 12. 77 ± 3. 27 *
乙醇提取组 10. 0 8. 14 ± 2. 78 26. 86 ± 2. 30 **
注:各组与对照组比较,* P <0. 05;** P <0. 01。
3 讨论
熏倒牛植化研究发现其干燥全草含多量鞣质和多糖,
在体外抗菌药效的跟踪研究中分离获得了 β -谷甾醇、伞
形花内脂、槲皮素、木犀草素 - 7 - O - β -葡萄糖苷、山羊
豆碱、反式 - 4 -羟基山羊豆碱、甘露糖醇等 6 个生理活性
物质[3]。虽然熏倒牛在民间的药用价值较大,但有关熏倒
牛的研究报道并不多,并且多局限于成分分析的研究。我
们通过药理效应研究熏倒牛的提取工艺,为其制剂提取工
艺的优选及新产品开发提供科学依据。
参考文献
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卷) [M].北京:科学出版社,2004:415.
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[3]王维恩,张晓峰,沈建伟等. 藏药熏倒牛化学成分研究
[J].天然产物研究与开发,2009,21:199 - 202.
[4]唐荣江,闵照华,党合群. 藏药熏倒牛的实验药理研究
[J].西北药学杂志,1988,3(3) :8 - 9.
[5]陈奇.中药药理研究方法学[M]. 北京:人民卫生出版
社,2006:2942 - 3681.
[6]徐叔云,卞如濂,陈修,等. 药理实验方法学[M]. 第 3
版.北京:人民卫生出版社,2002:8821.
2012 年 3 月 6 日收稿
Pharmacological effect method of different extraction process evaluation
about Tibetan medicine Biebersteinia heterostemon Maxim
Jingming1,2* Liyang1 Wangjingjing1 Linxingyao1,2 Liuxiping1
(1. Gansu College of Traditional Chinese Medicine,Gansu Lanzhou 730000;
2. Gansu Province Key Laboratory of Pharmacology and Toxicology,Gansu Lanzhou 730000)
[Abstract]Objective:Extraction technology research about Tibetan medicine Biebersteinia heterostemon Maxim. Methods:Using
Xylene - induced ear inflammation in mice and induced pain in mice hot plate test to observe the anti - inflammatory and analgesic
effects of Biebersteinia heterostemon Maxim. different process extracts. Results:Process extracts of traditional decoction,traditional
decoction extract and alcohol precipitation,ethanol,have all inhibited xylene - induced ear edema in mice and improved the mouse
hot plate pain threshold (P < 0. 01). But the alcohol extract in anti - inflammatory and analgesic effects was significantly better than
the decoction extract and decoction extract alcohol precipitation(P < 0. 01). Conclusion:Biebersteinia heterostemon Maxim. ethanol
extract in the anti - inflammatory and analgesic effects is remarkable,and its pharmacological effects is significantly superior to the
decoction extract and decoction extract alcohol precipitation process.
[Key words]pharmacological effects;Biebersteinia heterostemon Maxim.;extraction process
362012 年 5 月第 5 期 中国民族医药杂志