全 文 ：【收稿日期】　2003-04-26
【基金项目】　国家“九五”重点科技攻关计划项目基金资助(No.99-
929-01-25)。
【＊通讯作者】　屠鹏飞:教授 ,博导 ,中国高技术产业化研究会理事 ,
中国中医药促进会理事 , Tel/ Fax:010-62092750 E-mail:fangsdu@163.
com
白鲜皮药材指纹图谱研究 CJNM
杜程芳 ,屠鹏飞＊
北京大学药学院天然药物化学系 ,北京大学中医药现代研究中心 ,北京 100083
【摘　要】　目的:采运用反相高效液相色谱法 , 研究并建立白鲜皮药材的指纹图谱。方法:用 Kromasil 100
C18色谱柱 , 乙腈-水梯度洗脱;流速1.0 ml/min;检测波长 228 nm。结果:运用梯度洗脱得到的色谱图各色谱峰分
离较好 ,达到指纹图谱的要求。结论:采用 HPLC指纹图谱可有效控制白鲜皮的质量。
【关键词】　白鲜皮;高效液相色谱;指纹图谱
【中图分类号】　R282.71 , R917　　【文献标识码】　A　　【文章编号】　1672-3651(2003)02-0094-05
　　白鲜皮为芸香科白鲜属植物白鲜 Dictamnus
dasycarpus Turcz.的干燥根皮[ 1] ,是中医临床治疗
皮肤病的常用中药 ,本品主要含生物碱及内酯类化
合物 ,包括白鲜碱(dictamnine)、茵芋碱(skimmian-
ine)、崖椒碱(γ-fagarine)、柠檬苦素(limonin)、黄柏
酮(obacunone)、 酮(fraximellone)等等[ 2] 。由于受
产地 、气候和生态环境等的影响 ,不同白鲜皮药材
所含成分有一定差异 ,仅针对中药材的某个有效成
分进行定性 、定量分析 ,并不能有效地控制中药材
的质量[ 3] 。目前 ,指纹图谱已成为国际公认的控制
中药与天然药物质量的有效手段 ,能从整体上控制
质量[ 4] 。本文对白鲜皮药材的指纹图谱进行了研
究 ,以期对白鲜皮药材的质量控制提供有效的方
法。
1　仪器与药品
1.1　仪　器
高效液相色谱仪-HP1100系列:四元泵 ,在线脱
气机 , 自动进样器 , 柱温箱 ,二极管阵列检测器
(DAD);色谱柱:Kromasil 100 C18 250×4.6 mm ,5μm。
1.2　试　剂
甲醇:色谱纯 ,天津市西华特种试剂厂;乙腈:
HPLC ,美国 Baker公司;水:自制重蒸水 。
1.3　药　品
白鲜皮药材共 15个样品 ,其中 13个为商品药
材 ,2个为自采品 ,另外 ,还有白鲜的根木心样品 1
份。均经作者鉴定。对照品:白鲜碱 、 酮 、黄柏
酮 、茵芋碱均为作者分离并鉴定。
2　实验部分
2.1　对照品溶液的制备
白鲜碱 、 酮 、黄柏酮 、茵芋碱适量溶于甲醇配
成浓度为 1.0 mg/ml的溶液 ,即得。
2.2　供试品溶液的制备
药材样品处理:取白鲜皮药材粉末(100目)1.5
g ,加甲醇 30 ml ,70℃回流 60 min ,滤过 ,用甲醇少
量多次洗涤容器与残渣 ,减压浓缩滤液 , 定容至 25
ml ,再以 0.45μm 微孔滤膜滤过 ,即得 。
2.3　色谱条件
经实验比较 ,用乙腈-水二元梯度系统洗脱比用
甲醇-水梯度洗脱基线较平 ,且耗时较短 ,分析时间
80 min ,样品 2 h图谱显示 ,80 min后无特征峰出现。
检测波长:228 nm;流速:1 ml/min;柱温:25℃;进样
量:20μl。色谱条件如表 1 ,色谱图见图 1。
Tab 1　Composition of mobile phase with gradient elution program
t/min 0 25 30 40 45 55 70
acetonit rile(V/ V)% 5 30 30 50 50 65 100
Water(V/ V)% 95 70 70 50 50 35 0
2.4　方法学考察
为了考察分析方法的可靠性 ,以承德的商品为
例 ,对仪器精密度 、方法重现性以及稳定性做了相
应考察。
94　　Chin J Nat Med　July 2003　Vol.1　No.2
CJNM
中国天然药物　2003年 7月　第 1卷　第 2期
2.4.1　精密度实验　取同一供试品溶液 ,连续进样
5次 ,其相对保留时间 RSD小于3%,主要共有峰面积
的RSD不超过 5%,表明进样的精密度良好。
2.4.2　重复性试验　取同一产地供试品 5份 ,分
别按供试品溶液的制备方法制备供试品并测定 ,其
相对保留时间 RSD 小于 3%, 主要共有峰面积的
RSD不超过 5%,表明其重复性良好 。
2.4.3　稳定性实验　取同一供试品溶液 ,分别在
0 , 2 , 4 , 8 , 12 h 检测 , 其相对保留时间 RSD 小于
3%,主要共有峰面积的 RSD不超过 5%,说明供试
品溶液至少在 12 h内稳定 。
2.5　样品测定
取各产地或购买地的白鲜皮药材 ,分别按供试
品溶液的制备方法制备供试品溶液并测定 ,各产地
或购买地供试品的指纹图谱见图 3。共有峰相对
保留时间见表 2 ,相对峰面积见表 3 ,非共有峰面积
百分比见表 4。
Tab 2　Comparison between different Cortex Dictamni samples by relative retention time in fingerprints
Peak
No.Chengdeweichang Chengde Chengdeweichang Changsha Haerbin Mudanjiang Wulumuqi Xi an Kangxian Mudanjiang Shanghai Fengxian Shenzhen Wuhan Renhe ,Jilin Average
1 0.052 0.051 0.052 0.050 0.052 0.052 0.052 0.052 0.052 0.052 0.052 0.052 0.051 0.054 0.051 0.052
2 0.061 0.061 0.061 0.061 0.061 0.061 0.061 0.061 0.061 0.061 0.061 0.061 0.061 0.061 0.061 0.061
3 0.089 0.089 0.089 0.089 0.089 0.089 0.089 0.089 0.089 0.089 0.089 0.089 0.089 0.089 0.089 0.089
4 0.292 0.293 0.292 0.292 0.295 0.291 0.294 0.293 0.292 0.291 0.294 0.293 0.290 0.292 0.294 0.293
5 0.311 0.312 0.311 0.312 0.311 0.310 0.312 0.312 0.311 0.311 0.312 0.311 0.309 0.311 0.312 0.311
6 0.718 0.717 0.716 0.714 0.717 0.715 0.717 0.717 0.717 0.718 0.716 0.717 0.714 0.716 0.717 0.716
7 0.888 0.887 0.887 0.885 0.888 0.886 0.888 0.888 0.887 0.887 0.887 0.887 0.886 0.886 0.887 0.887
8 0.918 0.918 0.918 0.917 0.919 0.918 0.919 0.919 0.917 0.918 0.920 0.918 0.917 0.918 0.920 0.918
9 0.929 0.928 0.928 0.927 0.928 0.928 0.928 0.928 0.928 0.928 0.928 0.929 0.928 0.928 0.928 0.928
S 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000
11 1.033 1.033 1.033 1.033 1.033 1.033 1.033 1.033 1.033 1.033 1.033 1.033 1.033 1.033 1.033 1.033
12 1.166 1.166 1.164 1.163 1.164 1.163 1.164 1.164 1.165 1.167 1.164 1.166 1.164 1.165 1.164 1.165
13 1.186 1.187 1.186 1.184 1.186 1.184 1.186 1.186 1.186 1.186 1.186 1.186 1.184 1.185 1.186 1.185
14 1.251 1.252 1.251 1.249 1.251 1.250 1.251 1.251 1.251 1.251 1.251 1.251 1.250 1.250 1.251 1.251
15 1.334 1.334 1.334 1.328 1.333 1.333 1.335 1.336 1.334 1.335 1.334 1.334 1.327 1.334 1.334 1.333
16 1.347 1.349 1.347 1.343 1.345 1.345 1.343 1.345 1.347 1.347 1.348 1.348 1.334 1.343 1.347 1.345
17 1.431 1.429 1.430 1.427 1.428 1.428 1.427 1.428 1.429 1.430 1.430 1.430 1.425 1.426 1.429 1.428
18 1.457 1.456 1.457 1.451 1.457 1.456 1.457 1.452 1.457 1.457 1.456 1.455 1.457 1.456 1.454 1.456
　　＊Habitat
Tab 3　Relative areas of the common peaks in fingerprints of Cortex Dictamni samples
Peak
No.
Average
relative
retention
time
Chengde
weichang
Chengde Chengde
weichang
Changsha Haerbin Mudan
jiang
Wulu
muqi
Xi an Kangxian Mudan＊
jiang
Shanghai Fengxian Shenzhen Wuhan Renhe ,
Jilin
Average
relative
area
1 0.052 0.048 0.136 0.057 0.086 0.136 0.122 0.354 0.543 0.107 0.058 0.103 0.154 0.270 0.171 0.153 0.167
2 0.061 0.149 0.385 0.167 0.225 0.398 0.309 0.503 0.821 0.289 0.296 0.309 0.295 0.339 0.431 0.476 0.359
3 0.089 0.051 0.137 0.062 0.086 0.140 0.109 0.199 0.291 0.093 0.085 0.102 0.083 0.135 0.121 0.196 0.126
4 0.294 0.090 0.117 0.060 0.053 0.147 0.134 0.088 0.144 0.111 0.110 0.123 0.088 0.073 0.084 0.064 0.099
5 0.312 0.141 0.189 0.091 0.077 0.227 0.203 0.131 0.181 0.185 0.159 0.182 0.125 0.140 0.151 0.103 0.152
6 0.716 0.006 0.117 0.017 0.063 0.039 0.028 0.120 0.169 0.031 0.008 0.054 0.067 0.066 0.080 0.129 0.066
7 0.887 0.019 0.073 0.020 0.050 0.025 0.065 0.016 0.025 0.024 0.015 0.042 0.025 0.027 0.072 0.040 0.036
8 0.918 0.006 0.014 0.006 0.015 0.011 0.014 0.015 0.025 0.009 0.024 0.024 0.006 0.011 0.018 0.048 0.016
9 0.928 0.044 0.062 0.034 0.040 0.057 0.066 0.070 0.074 0.068 0.104 0.053 0.052 0.057 0.058 0.043 0.059
S 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000
11 1.033 0.059 0.127 0.058 0.115 0.121 0.096 0.108 0.119 0.130 0.083 0.112 0.130 0.130 0.131 0.120 0.109
12 1.165 0.118 0.085 0.082 0.048 0.058 0.111 0.080 0.083 0.081 0.123 0.059 0.076 0.101 0.106 0.061 0.085
13 1.185 0.528 1.398 0.856 1.197 1.171 1.674 1.209 1.466 1.831 0.930 1.077 1.780 1.904 1.841 0.957 1.321
14 1.251 1.669 1.356 2.221 2.230 1.096 0.958 0.697 1.080 1.038 1.204 1.612 0.685 1.090 1.008 1.449 1.293
15 1.333 0.056 0.178 0.069 0.134 0.216 0.105 0.069 0.160 0.127 0.068 0.158 0.134 0.043 0.083 0.157 0.117
16 1.345 0.017 0.096 0.019 0.058 0.091 0.047 0.030 0.076 0.039 0.017 0.052 0.032 0.082 0.028 0.038 0.048
17 1.428 0.054 0.205 0.054 0.210 0.236 0.165 0.113 0.182 0.137 0.063 0.176 0.132 0.116 0.084 0.153 0.139
18 1.456 0.017 0.069 0.009 0.032 0.063 0.026 0.045 0.062 0.035 0.019 0.042 0.041 0.020 0.029 0.047 0.037
Total area 21478.0 12844.6 21406.4 18571.3 11559.5 15469.4 14513.7 10925.9 15083.2 15088.4 13751.4 18552.7 15762.9 10504.4 14425.8
percent in
total area(%) 88.8 93.7 91.2 96.0 92.6 93.0 94.7 96.1 94.4 88.4 92.2 95.3 96.4 95.8 92.1
　　＊Habitat
中国天然药物　2003年 7月　第 1卷　第 2期
CJNM
Chin J Nat Med　July 2003　Vol.1　No.2　95　
Tab 4　Relative areas of the uncommon peaks in fingerprints of Cortex Dictanmi samples
Average relative
retention time
Chengde＊
weichang
Chengde Chengde
weichang
Changsha Haerbin Mudan
jiang
Wulumuqi Xi an Kangxian Mudan
jiang
Shanghai Fengxian Shenzhen Wuhan Renhe ,
Jilin
0.120 0.014 0.020 0.018
0.137 0.040
0.198 0.012
0.223 0.098 0.063 0.115 0.115 0.145 0.010 0.135 0.165 0.064 0.048 0.058
0.248 0.004
0.276 0.003 0.037 0.012
0.280 0.005 0.009 0.006
0.324 0.009 0.011 0.028 0.042 0.036 0.020 0.011 0.005 0.008 0.009
0.336 0.013
0.373 0.010 0.010
0.414 0.014 0.005 0.011 0.022
0.422 0.009
0.428 0.012 0.023 0.021 0.011
0.474 0.021 0.009 0.017 0.027
0.486 0.071 0.005 0.123
0.502 0.008
0.530 0.038 0.019 0.011 0.022 0.015 0.028 0.029
0.540 0.005
0.576 0.008 0.094 0.027 0.038 0.036 0.016 0.010 0.062 0.012 0.014 0.028 0.044
0.593 0.003 0.047
0.600 0.018 0.032 0.063 0.024 0.026 0.030 0.028
0.618 0.005 0.011
0.645 0.007 0.007 0.017 0.009 0.011 0.040
0.813 0.035
0.828 0.034 0.047 0.045 0.045 0.124
0.844 0.008 0.026 0.022 0.023 0.033 0.023 0.016 0.017 0.013 0.026 0.024 0.016
0.942 0.017 0.019 0.018 0.026 0.053
0.957 0.023 0.021 0.012
0.968 0.028
0.983 0.009
1.072 0.004 0.024 0.027 0.006 0.015 0.014 0.011 0.010 0.021 0.016 0.013
1.107 0.008
1.202 0.005 0.030 0.006 0.043 0.014 0.031 0.016 0.007 0.041
1.237 0.008 0.007 0.008 0.013
1.266 0.182 0.108 0.283 0.040 0.092 0.071 0.064 0.071 0.136 0.040 0.020
1.276 0.013 0.021 0.011 0.015 0.015 0.014 0.015 0.016 0.004 0.011 0.032 0.006
1.289 0.008
1.314 0.006 0.007 0.009
1.533 0.014 0.014 0.015
1.540 0.026 0.007 0.013 0.010
Total area of
ungernera l area
2700.4 865.3 2053.1 777.6 925.2 1160.4 806.0 444.2 889.2 1971.7 1163.1 924.4 590.2 460.8 1243.0
Percent(%) 11.17 6.31 8.75 4.02 7.41 6.98 5.26 3.91 5.64 11.56 7.80 4.75 3.61 4.20 7.93
　　＊Habitat
3　结果与讨论
1)采用二极管阵列检测器对指纹图谱的检测
波长进行了选择 ,结果表明检测波长为 228 nm ,色
谱图所包含的信息量较大 ,各色谱峰分离较好 。
2)在色谱条件的选择过程中 ,曾试用甲醇-水
梯度洗脱 ,但基线不平 ,改用乙腈-水后 ,基线平直
且分离度良好。
3)色谱指纹图谱的建立:经比较所有测定和
记录的指纹图谱 ,确定 18个峰组成其指纹图谱 ,峰
位如图1所示。
4)色谱指纹图谱的分析 、比较与鉴别应建立
在有足够样品观察的基础上 ,比较这 15 个不同来
源的白鲜皮样品的指纹图谱 ,可以看出 , 其 HPLC
Fig 1　The typical HPLC fingerprint of Cortex Dictamni
图谱很相似 ,为了便于比较 ,可将图谱分为两个区:
如图 3所示 ,在种内指纹区(Ⅰ),不同来源的白鲜
皮样品的图谱有较大的差别 ,如峰 a、b 、e 、f 、g 、h 等
都不是在所有的白鲜皮样品中出现 ,峰 c、d仅出现
96　　Chin J Nat Med　July 2003　Vol.1　No.2
CJNM
中国天然药物　2003年 7月　第 1卷　第 2期
在样品 B 、G 中。而样品 B 、G为自采品 ,其余均为
商品 ,造成这种差别的原因可能与炮制过程或放置
时间的长短或采收季节有关。在特征区(Ⅱ),不同
的白鲜皮样品的图谱很相似 ,其差别在于峰的丰
度:有些峰的含量可能较低 ,但在每个指纹图谱中
均出现 ,特征明显 ,如 7号与 9号峰 、11号与 12号
峰。当然 ,峰位较高的峰更应加以注意 ,如 S 、13
号 、14号峰。6号峰在商品药材中均可明显见到 ,
而在自采品含量则较低 ,怀疑亦与药材炮制过程或
放置时间的长短或采收季节有关 ,具体影响因素如
何 ,有待进一步的研究。
Fig 2　HPLC chromatogram of control solution
a:skimmianine;b:dictamnine;c:obacunone;d:fraximellone
Fig 3　The overlapping plot of HPLC fingerprints of Cortex Dictamni
samples from different resources
A:Renhe , Jilin province;B:Mudanjiang(habitat);C:Mudanjiang;D:
Haerbin;E:Changsha;F:Chengdeweichang;G:Chengdeweichang (habi-
tat);H:Chengde;I:Xi an;J:Wulumuqi;K:Wuhan;L:Shenzhen;M:
Fengxian;N:Shanghai;O:Kangxian
　　5)通过对不同产地的药材的指纹图谱的研
究 ,可以看出不同产地的药材虽然出现了相应的主
成分峰 ,但峰面积比值不尽相同;即使是同一地点 ,
如“承德”(承德市区商品)、“承德围场”(承德市围
场县药材股商品)、“承德围场(采)”(承德市围场县
城外自采品),因为来源或加工方法的不同 ,峰面积
比值也有区别 。如果要进一步控制制剂的质量 ,使
制剂质量稳定 ,至少要固定产地及产地加工方法 ,
并且在确定产地时 ,范围不能确定太大[ 5] ,减少因
药材产地不同而导致的影响 。
　　6)本文用 4个标准品标定了指纹图谱中的几
个峰位 ,分别如图 2所示 ,如在以后的实验中从白
鲜皮中分离鉴定了更多的化合物 ,可继续标定其余
的峰位 ,并结合活性成分的含量测定 ,更好地控制
白鲜皮药材的质量 。
　　7)样品根皮与心材的指纹谱比较:在市场上
存在着用干燥根而非根皮作为白鲜皮药用以及白
鲜皮药材中混有心材的情况[ 6] ,为此 ,我们对白鲜
皮根皮与心材的 HPLC 图谱进行了比较。如图 4
所示 ,样品 H为在承德围场自采样品的根皮部分 ,
Fig 4　Fingerprint comparison of different parts of the sample
H:Chengdeweichang (habitat , root bark);P:Chengdeweichang (habi-
tat , lignum of root)
样品 P 为在承德围场自采样品的根木心部分 。从
图中可以看出两者有很大的差别 。心材部分的指
纹图谱共有峰的丰度都低于根皮部分 ,尤其是三个
主成分峰 ,而有些在心材样品图谱中出现的峰在根
皮样品谱中没有出现 ,说明根皮与木心部分的化学
成分不尽相同 。如果要更好的控制白鲜皮药材的
质量 ,必须规范药用部位 。
参 考 文 献
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版).二部[ Z] .北京:化学工业出版社 , 2000.81.
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北京医科大学 、中国协和医科大学联合出版社 , 1996.332-339.
The HPLC/UV Fingerprint Analysis of Cortex Dictamni
DU Cheng-Fang , TU Peng-Fei
Department of natural medicines , School of Pharmaceutical Sciences , Peking University .Modern Research Center for
Traditional Chinese Medicine , Peking University Health Science Center , Beijing 100083
【ABSTRACT】　AIM:To study and establish the fingerprint of raw Cortex Dictamni by reversed phased high performance liquid chro-
matography.METHOD:The chromatographic conditions were as follows:a Kromasil 100 C18 column was used;the mobile phase was com-
posed of acetontrile and water with gradient elution;the flow rate was 1.0 ml/min and the UV absorbance detection was set at 228 nm.RE-
SULT:Under the selected chromatographic conditions , good HPLC fingerprints of Cortex Dictamni were obtained .CONCLUSION:Quality
of raw Cortex Dictamni can be controlled effectively by HPLC-UV fingerprint.
【KEY WORDS】　Cortex Dictamni;HPLC;Fingerprint
【Foundation Item】　This project was supported by 9th Five-Years National Key Technologies Program Foundation(No.99-929-01-25).
98　　Chin J Nat Med　July 2003　Vol.1　No.2
CJNM
中国天然药物　2003年 7月　第 1卷　第 2期