全 文 ：收稿日期:2007-10-29;　修订日期:2008-02-12
基金项目:国家自然科学基金项目(No.30660221);
青海自然科学基金项目(No.2006-N-554)
作者简介:宋　萍(1965-),女(汉族),山东长岛人 ,现任青海民族学院化
学系教授 ,学士学位 ,主要从事食品及药物的分析检测和开发应用研究
工作.
分光光度法测定藏药鬼箭锦鸡儿中总黄酮的含量
宋　萍 ,李存仁 ,于　军
(青海民族学院 , 青海 西宁　810007)
摘要:目的 建立藏药鬼箭锦鸡儿中总黄酮的含量测定方法。方法 采用正交实验设计 ,以总黄酮含量为考察指标 ,研究
藏锦鸡儿总黄酮的最佳提取方法;并利用分光光度法 , 以芦丁为对照品 , 对藏锦鸡儿原药材中的总黄酮含量进行测定。
结果 该药材红色木质部心材中总黄酮的含量为 13.56%。结论 该工艺合理 ,黄酮有效成分提取率高。该方法测定样品
结果准确可靠 、快速 、重复性好。
关键词:藏药;　鬼箭锦鸡儿;　总黄酮;　分光光度法
中图分类号:O657.32　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)09-2076-02
DeterminationoftheTotalFlavonoidContentintheTibetanPatentCaraganajubata
(Pal)PoirbySpectrophotometry
SONGPing, LICun-ren,YUJun
(DepartmentofChemistry, QinghaiInstituteofNationalities, Xining810007, China)
Abstract:ObjectiveTosetupthequantitativemethodfordeterminingthetotalflavonoidinTibetanherbCaraganajubata
(Pall)Poir.MethodsWiththetotalflavonoidcontentofakindofTibetanherbCaragana(pal)poirasanobservedtarget, a
optimumextractingmethodwasobtainedbytheorthogonalexperimentdesign, andtheflavonoidsintherootsandcaudicesofCa-
raganajubata(pal)poirwereanalyzedqualitatively.ResultsInthispaper, thecontentoftotalflavonoidswas13.56% by
spectrophotometicmethodwithrutinasstandardsample.ConclusionTheoptimumpreparationprocedureisreliablewithhigher
extractionratiooftheactivecomponents.Thismethodisreliable, accurate, quickandreproducible.
Keywords:Tibetanpatent;　Caraganajubata(Pall)Poir;　Totalflavonoid;　Spectrophotometry
　　藏锦鸡儿学名鬼箭锦鸡儿 Caraganajubata(Pall)Poir, 藏名
“作毛兴”, 为豆科锦鸡儿属植物 ,是叶型较小的中生 、中旱生 、旱
生和沙生灌木。生长在海拔 3 000 ～ 4 700 m的阴坡 、半阴坡地
带 [ 1～ 3] 。藏医用其根茎及其干燥红色木质部心材入药 , 其味涩 、
性凉。具有活血散瘀 、凉血 、降压 、生肌止痛的功能 , 可用于防治
多血症 、血热症 、高血压病和心血管等方面的疾病 [ 4] 。鬼箭锦鸡
儿中含有黄酮类 、皂苷 、生物碱 、鞣质 、挥发油和糖类等化学成
分 [ 5] 。本文采用正交实验法研究了鬼箭锦鸡儿中总黄酮的最佳
提取条件 , 同时对其总黄酮含量进行了测定 [ 6 ～ 8] 。
1　仪器 、试剂及样品采集
1.1　仪器与试剂 722型可见分光光度计(上海精密科学仪器有
限公司);分析天平;芦丁(中国药品生物品检定所);乙醇等试
剂均为分析纯;常用玻璃仪器等。
1.2　样品采集 鬼箭锦鸡儿采自海拔 4 000 m以上的青藏高原
地区(青海省藏药研究所多杰研究员鉴定), 去掉外皮 ,取红色木
质心材 , 切断 ,阴干 , 粉碎后过 40目筛作为实验药材。
2　方法与结果
2.1 　对照品芦丁标准溶液的制备 精密称取芦丁标准样品
0.025 0 g, 75%乙醇溶解并定容至 100ml容量瓶中稀释到刻度。
2.2　最大吸收波长的确定 取芦丁标准溶液 4ml采用 NaNO2 -Al(NO3)3 -NaOH显色 , 在 470 ～ 560nm波长范围内测定溶液的
吸光度。测定结果见表 1。由此可见 , 在 510nm处有最大吸收
值 , 所以 , 可以选择 510nm作为检测波长。
2.3 　正交实验
2.3.1　正交实验设计方案 选择乙醇浓度(A), 回流时间(B),
药材重量与乙醇体积比(C)为实验 3个考察因素 , 每个因素取 3
个水平(见表 2),应用 L9(34)表安排实验 , 以鬼箭锦鸡儿中总黄
酮的含量为评价指标 ,研究其最佳提取条件。
表 1　不同波长下芦丁标准溶液对应的吸光度
波长 λ/nm 吸光度
470 0.326
480 0.354
490 0.378
500 0.392
510 0.394
520 0.381
530 0.355
540 0.318
550 0.274
560 0.226
表 2　总黄酮提取条件因素水平
水平 A乙醇浓度(%)
B
回流时间 t/min
C
物料比
1 55 30 1∶ 15
2 75 60 1∶ 10
3 95 90 1∶5
2.3.2　正交实验结果 正交实验数据及计算分析见表 3。直观
分析表明 , 影响鬼箭锦鸡儿总黄酮提取率的主要因素依次为:乙
醇浓度 >物料比 >回流时间 ,其中乙醇浓度对总黄酮的提取率有
显著影响 ,最佳提取条件为 A2B1C2。
2.4 　藏锦鸡儿药材中黄酮提取方法的确定 准确称取已粉碎过
筛后的藏锦鸡儿红色木质心材 10 g于烧瓶中 , 加入 100 ml石油
醚回流 40min进行脱脂 ,弃去滤液 , 再加入 100 ml75%的乙醇 ,
回流提取 30 min, 3次 ,弃去滤渣 , 合并滤液后进行蒸馏浓缩 , 用
75%乙醇定容至 250 ml量瓶中 , 得总黄酮提取物 , 用于含量的
测定。
2.5 　实验测定条件的选择
2.5.1　氢氧化钠溶液用量的选择 精密吸取芦丁标准溶液 2 ml
各 4份 , 分别置于 25ml容量瓶中 ,各加 5%亚硝酸钠溶液 1.0ml,
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 9期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.9　
再加 10%硝酸铝 1.0 ml, 然后分别加入 10%氢氧化钠 5, 10, 15,
20 ml,再用 75%乙醇溶液稀释至刻度 , 分别在 510 nm处测定其
吸光度(见表 4)。经实验考察结果 ,选择测定时加入 10% NaOH
10 ml时为最佳。
2.5.2　硝酸铝溶液用量的选择 同以上方法 , 在装有标准溶液的
4份样品中 , 各加 5%亚硝酸钠溶液 1.0ml, 再分别加入 10%硝酸
铝溶液 0.5, 1.0, 1.5, 2.0ml, 然后分别加入 10%氢氧化钠 10ml。
实验结果见表 5。由此可知 , 实验选择 Al(NO3)3 加入量为 1.5ml为最佳。
2.5.3　反应温度的选择 同以上方法 , 取芦丁标准溶液 1份 ,加
1.0ml5%亚硝酸钠溶液 , 1.5 ml10%硝酸铝溶液 , 10%氢氧化钠
10 ml,分别在室温及 20, 30, 40℃时测定溶液吸光度值(见表 6)。
由此可知 , 温度对实验测定没有太大的影响 , 所以选择室温下进
行样品测定。
表 3　正交实验数据及计算分析结果
实验序号 A B C 总黄酮含量(%)
1 1 1 1 4.05
2 1 2 2 6.53
3 1 3 3 4.03
4 2 1 2 9.80
5 2 2 3 6.70
6 2 3 1 5.72
7 3 1 3 4.07
8 3 2 1 4.13
9 3 3 2 5.74
K1 14.61 17.92 13.90
K2 22.22 17.36 22.07K3 13.94 15.49 14.80
R 8.28 2.43 8.17
优水平 A2B1C2
表 4　不同氢氧化钠用量时芦丁标准溶液的吸光度
氢氧化钠用量 V/ml 吸光度
5 0.215
10 0.259
15 0.184
20 0.158
表 5　不同硝酸铝用量时芦丁标准溶液的吸光度
硝酸铝用量 V/ml 吸光度
0.5 0.216
1.0 0.259
1.5 0.372
2.0 0.238
表 6　不同温度下芦丁标准溶液的吸光度
温度 T/℃ 吸光度
17 0.259
20 0.258
35 0.258
40 0.257
2.6 　标准曲线的绘制 精密吸取芦丁标准溶液 0.0, 1.0, 2.0,
3.0, 4.0, 5.0, 6.0ml分别置于 25 ml容量瓶中 ,各加 1.0ml5%亚
硝酸钠溶液 , 摇匀放置 5min, 加 1.5 ml10%硝酸铝溶液 , 摇匀放
置 5 min, 再加 10%的氢氧化钠溶液 10 ml,然后用 75%乙醇溶液
稀释至刻度 , 摇匀放置 10 min后 , 分别在 510 nm处测定其吸光
度。应用最小二乘法 , 以浓度 C(mg/ml)与吸光度 A进行线性拟
合 , 得回归方程 A=12.737C-0.003 5, 相关系数 r=0.999 6 (n
=7)。
2.7　精密度实验 取浓度为 0.02mg/ml的芦丁对照品溶液 , 在
本实验条件下连续测定 6次 , 测出其吸光度 A值 , 计算得 RSD=
0.98% (n=6)。
2.8　重复性实验 精密称取鬼箭锦鸡儿样品 10 g, 共 6份 , 按上
述方法处理 ,测定其吸光度 A值 , 得 RSD=1.03%(n=6)。实验
结果表明本方法的重复性满足要求。
2.9 　稳定性实验 精密称取鬼箭锦鸡儿样品 10g, 按上述 “ 2.6”
项下方法处理 ,分别在 2, 4, 6, 8, 10h时测定其吸光度 A值 ,表明
样品溶液在 10 h内稳定。
2.10　回收率实验 精密称取 6份已知含量的鬼箭锦鸡儿样品
10 g, 依次加入对照品溶液适量 ,按正文操作方法 , 测得其平均
回收率为 101.4%(n=6), RSD=1.24%。
2.11 　药材中总黄酮含量的测定 准确吸取试样 1ml4份 ,分别
置于 50ml容量瓶中 , 其中 1份用 75%的乙醇定容至刻度 , 作为
参比溶液。其余 3份按 NaNO2 -Al(NO3)3 -NaOH方法进行显
色 , 在波长 510nm处分别测定其吸光度值。代入标准曲线回归
方程可得浓度数据 ,经计算后得藏锦鸡儿原药材中总黄酮含量。
上述 3份溶液的平均吸光度值为 1.378 (见表 7), 相应的浓度为
0.108 5 mg/ml, 则总黄酮的含量为 13.56%。
表 7　藏锦鸡儿中总黄酮含量的测定
测定次数 吸光度 平均吸光度 总黄酮平均含量(%) RSD(%)
1 1.383
2 1.416 1.378 13.56 2.09
3 1.335
3　讨论
根据正交实验结果可知 ,鬼箭锦鸡儿总黄酮的最佳提取条件
为选用 75%的乙醇作为溶剂 , 以 1∶10的物料比 , 回流 30min, 重
复 3次 , 合并滤液 , 浓缩后定容。
经实验表明 ,鬼箭锦鸡儿总黄酮实验测定条件的选择为:加
5%的亚硝酸钠溶液 1.0ml, 10%的硝酸铝溶液 1.5 ml, 10%的
氢氧化钠溶液 10 ml时为最佳。
本实验采用分光光度法测得鬼箭锦鸡儿去皮红色木质心材
中总黄酮平均含量为 13.56%。其药材中黄酮含量高的主要原
因是由于本实验药材选取的是鬼箭锦鸡儿红色木质部心材部分 ,
致使测定的鬼箭锦鸡儿药材中总黄酮含量较高;其次 , 是分光光
度法测定的是药材中所有黄酮苷和苷元的总含量 ,而鬼箭锦鸡儿
药材中可能除此之外 ,还含有其它类型的黄酮类成分;另外 ,本实
验采用碱性介质中加铝盐显色的分光光度方法 ,并且经过优化实
验条件 ,也使测得的总黄酮的含量比较高和准确。
鬼箭锦鸡儿在我国的许多地区都有广泛分布 , 资源丰富 , 且
在民间有很好的用药经验 , 若能再对其根 、茎 、叶 、花的化学成分
和药理活性进行深入的研究 , 将更加有助于促进鬼箭锦鸡儿资
源的综合开发和可持续利用 , 同时对生态环境也有一定的保护
作用。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.9 时珍国医国药 2008年第 19卷第 9期