全 文 ：HPLC法同时测定鬼箭羽药材中 4种有效成分的含量
巴寅颖 ,张兰珍＊ ,石任兵
(北京中医药大学中药学院 , 北京 100102)
摘要　目的:建立高效液相色谱法测定鬼箭羽药材中 4种主要有效成分儿茶素 、去氢双儿茶素 A、香橙素和柚皮素的含量。方
法:采用 DiamonsilTMC18(250mm×4.6mm, 5 μm)色谱柱 ,以甲醇 -乙腈 -0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱(0 ～ 35 min, 9
∶9∶82※17.5∶17.5∶65),流速 1 mL· min-1 ,检测波长 280 nm(儿茶素 、香橙素和柚皮素)、380 nm(去氢双儿茶素 A), 柱温 30
℃。结果:儿茶素 、去氢双儿茶素 A、香橙素和柚皮素线性范围分别为 0.428 ～ 3.424 μg(r=0.9998), 0.255 ～ 1.53 μg(r=
0.9992), 0.0788 ～ 0.630μg(r=0.9996), 0.026 ～ 0.208 μg(r=0.9996);平均加样回收率(n=6)分别为 100.5%(RSD=
3.5%), 101.5%(RSD=2.3%), 97.33%(RSD=1.1%), 97.81%(RSD=2.7%)。 结论:9批样品测定结果表明本法简便 、准
确 , 重复性好 ,可用于鬼箭羽药材中儿茶素等 4种成分的含量测定。
关键词:鬼箭羽;高效液相色谱;儿茶素;去氢双儿茶素 A;香橙素;柚皮素
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254-1793(2010)06-0991-04
HPLCsimultaneousdeterminationoffourbioactive
componentsinEuonymusalatus(Thunb.)Sieb.
BAYin-ying, ZHANGLan-zhen＊ , SHIRen-bing
(BeijingUniversityofTraditionalChineseMedicine, Beijing100102, China)
Abstract　Objective:ToestablishanHPLCmethodforthedeterminationofcatechin, dehydroicateinA, aromaden-
drinandnaringenininEuonymusalatus(Thunb.)Sieb.Methods:ThedeterminationwascariedoutwithDiamon-
silC18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)column, usingmethanol-acetonitrile-0.1% formacidasmobilephasewith
gradientelution(0-35 min, 9∶9∶82※17.5∶17.5∶65), ataflowrateof1.0mL· min-1 anddetectedatthewave-
length280 nm(catechin, aromadendrinandnaringenin), 380 nm(dehydroicatechinA), columntemperature30 ℃.
Results:Thelinearrangesofcatechin, dehydroicatechinA, aromadendrinandnaringeninwere0.428-3.424μg(r
=0.9998), 0.255 -1.53 μg(r=0.9992), 0.0788 -0.630 μg(r=0.9996)and0.026 -0.208 μg(r=
0.9996), withtheaveragerecoveries(n=6)were100.5%(RSD=3.5%), 101.5%(RSD=2.3%), 97.33%
(RSD=1.1%)and97.81%(RSD=2.7%)respectively.Conclusion:Themethodissimple, steadyandreliable
whichcanbeusedtodeterminethecontentsofthefourcompoundsinEuonymusalatus(Thunb.)Sieb.
Keywords:Euonymusalatus(Thunb.)Sieb.;HPLC;catechin;dehydroicatechinA;aromadendrin;naringenin
　　鬼箭羽系卫矛科植物卫矛 Euonymusalatus
(Thunb.)Sieb.具翅状物的枝条或翅状附属物和嫩
枝 ,又名卫矛 、鬼箭 、神箭 、六月棱树 、四棱锋 、芸杨 、
鬼见愁 、千层皮等 ,始载于 《神农本草经》,被列为中
品 ,分布于我国北部 、中部 、华东以及西南各地 [ 1] ,
资源丰富。其味酸甘涩 ,性微寒。具有破血 、通经 、
杀虫 、散瘀止痛等功效 ,主治闭经 、产后腹痛 、虫积腹
痛 、跌打损伤等症 。药理研究表明其具有降血糖 、调
血脂及延缓动脉粥样硬化等作用[ 3] 。近年来 ,临床
用于治疗糖尿病 、高血脂症 、动脉硬化等 ,效果显著。
鬼箭羽主要含有黄酮类(包括黄烷酮类)、甾体
类 、萜类 、多糖等化学成分 。黄酮类(包括黄烷酮
类)化合物因其具有降低血管脆性及异常的通透
性 、抑制葡萄糖苷酶活性 、抑菌抗炎 、抗动脉硬化和
清除氧自由基等作用 ,被认为是该植物抗炎抑菌 、抗
病毒 、抗肿瘤 、降血糖及活血化瘀作用的有效成
—991—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(6)
＊ 通讯作者　Tel:13699205903;E-mai:zhanglanzhen01@126.com
DOI :10.16155/j.0254-1793.2010.06.009
分 [ 4 ～ 6] ,其中。儿茶素具有抗菌消炎 、降血脂 、抗前
列腺癌 、防治糖尿病 、抗氧化等药理作用 [ 7] ;去氢双
儿茶素 A具有抗氧化 、抑制葡萄糖苷酶活性等药理
作用[ 8] ;柚皮素具有降血脂 、降血糖 、镇静 、抗氧化 、
抗肿瘤 、抗真菌 、抗动脉粥样硬化等药理作用 [ 9] ;香
橙素有抗氧化等药理作用[ 10] 。有关 4种有效成分
的含量测定方法作者未见文献报道 ,本文建立了鬼
箭羽中 4种黄酮类(包括黄烷酮类)成分的含量测
定方法 ,并对不同收集地的鬼箭羽药材进行了含量
测定 ,为有效评价药材的质量提供依据。
1　仪器与试药
Waters1525型高效液相色谱仪;PAD检测器;
Empower软件;25 μL可调进样器(安捷伦公司);
SartoriousBT25S型十万分之一电子分析天平(北京
赛多利斯仪器有限公司);KQ-500 DE超声清洗仪
(昆山超声仪器有限公司)。
药材产自河北 、湖北 、安徽等地 ,经北京中医药
大学生药系阎玉凝老师鉴定为卫矛科卫矛属植物
Euonymusalatus(Thunb.)Sieb.的翅状附形物和嫩
枝;对照品儿茶素 、香橙素 、去氢双儿茶素 A和柚皮
素为自制 ,经 1HNMR和 13CNMR鉴定其化学结构 ,
HPLC检测 、峰面积归一化法测定纯度均大于 98%。
甲醇 、乙腈为色谱纯(Fisher公司),甲酸为分析
纯(北京试剂厂),屈臣氏纯净水 ,其他试剂均为分
析纯。
2　溶液制备
2.1　对照品溶液　精密称取对照品儿茶素 2.14
mg、去氢双儿茶素 A2.55mg,香橙素 3.15mg、柚皮
素 2.08 mg,加甲醇制成每 1 mL分别含 0.214 mg、
0.102 mg、0.0315 mg、0.0104 mg的溶液 , 摇匀 ,即
得。
2.2　供试品溶液　精密称取鬼箭羽药材粉末(过
60目筛)300 mg, 置 50 mL圆底烧瓶中 ,精密加入
50%甲醇 25 mL,称重 ,回流提取 2 h,取出 ,放至室
温后再称重 ,补足至原重量 ,过滤 ,取续滤液 20 mL,
浓缩至近干 ,残渣加 50%甲醇溶解并转移至 5 mL
量瓶中 ,加 50%甲醇定容至刻度 , 0.45 μm微孔滤
膜过滤 ,即得。
3　色谱条件及系统适用性试验
色谱柱:DiamonsilTM C18色谱柱 (250 mm×4.6
mm, 5 μm);流动相:有机相为甲醇 -乙腈(1∶1)混
合液 ,水相为 0.1%甲酸水溶液 ,梯度洗脱 (0 ～ 35
min,有机相 -水相的比例为 18∶82※35∶65);流速:
1mL·min-1;检测波长:280 nm(儿茶素 、香橙素和
柚皮素), 380 nm(去氢双儿茶素 A);柱温:30 ℃。
依照上述色谱条件 ,分别精密吸取儿茶素 、香橙
素 、去氢双儿茶素 A、柚皮素 4种对照品溶液和供试
品溶液各 10μL分别进样。在对照品溶液和供试品
溶液色谱图的相应位置上有相同保留时间的色谱
峰 ,且紫外吸收光谱图一致。样品中 4个成分与其
他成分分离度良好(R>1.5)。理论板数以儿茶素 、
香橙素 、去氢双儿茶素 A、柚皮素峰计均不低于
4000。结果见图 1。
图 1　对照品及样品(河北明光饮片厂)色谱图
Fig1　HPLCchromatogramsofreferencesubstancesandsamplesfromHebeiMingguangdecoctionpiecesfactory
A.儿茶素(catechin, 280nm)　B.去氢双儿茶素A(dehydroicatechinA, 380nm)　C.香橙素(aromadendrin, 280nm)　D.柚皮素(naringenin, 280
nm)　E.样品(sample, 280nm)　F.样品(sample, 380nm)
1.儿茶素(catechin) 2.去氢双儿茶素 A(dehydroicatechinA)　3.香橙素(aromadendrin)　4.柚皮素(naringenin)
—992— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(6)
4　方法学考察
4.1　线性关系考察　分别精密吸取儿茶素对照品
溶液(浓度为 0.214mg· mL-1)2 , 4, 8, 12, 16μL,去
氢双儿茶素 A对照品溶液 (浓度为 0.102 mg·
mL-1)2.5, 5 , 7.5, 10, 15 μL,香橙素对照品溶液(浓
度为 0.0315mg· mL-1)和柚皮素对照品溶液(浓度
为 0.0104 mg·mL-1)对照品溶液各 2.5, 5, 10, 15,
20 μL,注入液相色谱仪 ,测定色谱峰面积 ,以对照品
量 X(μg)为横坐标 ,色谱峰峰面积 Y为纵坐标绘制
标准曲线。结果儿茶素 、去氢双儿茶素 A、香橙素 、
柚皮素回归方程分别为:
Y=6.961×105X+7.352×103　r=0.9998
Y=1.863×106X+2.217×104　r=0.9992
Y=3.035X×106 +1.503×104　r=0.9996
Y=2.822×106X+9.108×103　r=0.9996
线性范围分别为 0.428 ～ 3.424 μg、 0.255 ～ 1.53
μg、0.0788 ～ 0.630 μg、0.026 ～ 0.208 μg。
4.2　精密度考察　精密吸取供试品溶液 20 μL,连
续进样 6次 ,测定儿茶素 、去氢双儿茶素 A、香橙素
和柚皮素色谱峰峰面积 ,计算 RSD(n=6)分别为
1.2%, 1.4%, 0.68%, 0.78%,表明精密度良好 。
4.3　稳定性考察　精密吸取供试品溶液 20 μL,分
别于制备后 0, 2, 4, 6, 8, 12, 24 h进样 ,测定儿茶素 、
去氢双儿茶素 A、香橙素和柚皮素色谱峰峰面积 ,计
算 RSD(n=7)分别为 1.6%, 0.97%, 0.84%,
0.59%。表明供试品溶液在 24 h内基本稳定 。
4.4　重复性考察　取同一批鬼箭羽药材 ,按 “2.2”
项下方法平行制备 6份供试品溶液 ,进样 20 μL,测
定含量 。计算儿茶素平均含量为 0.144%, RSD=
0.99%;去氢双儿茶素 A平均含量为 0.0738%,
RSD=1.6%;香橙素平均含量为 0.0331%, RSD=
1.1%;柚皮素平均含量为 0.0105%, RSD=0.8%。
表明该方法重复性良好 。
4.5　回收率考察 　精密称取对照品儿茶素 2.15
mg、去氢双儿茶素 A3.25mg、香橙素 2.56mg、柚皮
素 2.96 mg,加甲醇制成每 1 mL分别含 0.215 mg、
0.130 mg、0.0502mg、0.148mg的溶液 ,摇匀 ,即得。
精密称取已知含量的鬼箭羽药材粉末(过 60目筛 ,
儿茶素 、去氢双儿茶素 A、香橙素和柚皮素的含量分
别为 0.144%, 0.0738%, 0.0331%, 0.0105%)6份 ,
每份约 150 mg,置 50 mL圆底烧瓶中 ,分别精密加
入上述儿茶素 、去氢双儿茶素 A、香橙素和柚皮素的
对照品溶液各 1 mL,再分别加入 50%甲醇 21 mL,
称重 ,按 “ 2.2”项下方法自 “回流提取 2 h, ……”起
操作 ,制备供试液。分别精密吸取上述供试液各 20
μL,注入液相色谱仪 ,测定各色谱峰峰面积 ,计算儿
茶素 、去氢双儿茶素 A、香橙素和柚皮素的平均回收
率(n=6)分别为 100.5%(RSD=3.5%), 101.5%
(RSD=2.3%), 97.33%(RSD=1.1%), 97.81%
(RSD=2.7%)。
5　样品含量测定
精密称取 8个产地 9批次鬼箭羽药材粉末(过
60目筛)各 3份 ,每份约 300 mg,置 50 mL圆底烧瓶
中 ,分别按 “2.2”项下方法制备供试品溶液。分别精
密吸取上述各供试品溶液 20μL,注入液相色谱仪 ,测
定各色谱峰峰面积 ,外标一点法计算儿茶素 、去氢双
儿茶素 A、香橙素和柚皮素含量 。结果见表 1。
表 1　9批样品含量测定结果(%, n=3)
Tab1　Contentofdifferentcompoundsfor9 batchesEuonymusalatus
来源
(sourcse)
儿茶素
(catechin)
去氢双儿茶素 A
(dehydroicatechinA)
香橙素
(aromadendrin)
柚皮素
(naringenin)
安徽(Anhui) 0.089(1.4) 0.087(2.3) 0.00785(2.1) 0.00191(2.1)
广西(Guangxi) 0.148(2.7) 0.090(1.6) 0.00650(1.5) 0.00266(2.1)
浙江(Zhejiang) 0.405(1.9) 0.132(1.4) 0.0123(1.8) 0.00407(2.6)
江苏(Jiangsu) 0.128(1.2) 0.060(1.6) 0.0261(1.2) 0.00987(2.1)
湖北(Hubei) 0.323(2.3) 0.130(1.6) 0.0105(1.3) 0.00265(0.58)
贵州(Guizhou) 0.240(1.5) 0.078(2.5) 0.0328(2.2) 0.00857(0.78)
辽宁(Liaoning) 0.438(1.8) 0.130(2.1) 0.0123(2.3) 0.00285(1.5)
河北(同仁堂)[ Hebei(Tongrentang)] 0.370(1.2) 0.086(2.2) 0.0284(2.4) 0.0116(0.57)
河北(明光饮片厂)[ Hebei(Mingguangdecoctionpiecesfactory)] 0.144(0.99) 0.078(1.6) 0.0331(1.1) 0.0105(0.80)
注(note):括号内为 RSD(RSDintheparenthesis, %)
—993—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(6)
6　讨论
6.1　对 9批鬼箭羽药材中儿茶素 、去氢双儿茶素
A、香橙素和柚皮素 4种成分含量测定的结果表明 ,
不同产地鬼箭羽药材中上述 4种成分的含量变化较
大 ,儿茶素含量范围为 0.089% ～ 0.438%,去氢双
儿茶素 A含量范围为 0.060% ～ 0.132%,香橙素含
量范围为 0.00650% ～ 0.0331%,柚皮素含量范围
为 0.00191% ～ 0.0116%,因此需要建立鬼箭羽药
材质量控制和评价标准保证鬼箭羽的用药安全与有
效 。
6.2　在建立儿茶素等 4种成分含量测定的方法中 ,
曾采用乙腈 -0.1%甲酸系统(0 ～ 35 min, 12∶82※
35∶65)作为流动相 ,发现儿茶素 、香橙素和柚皮素 3
个化合物色谱峰的峰形较好 ,与其他色谱峰分离良
好 ,但是去氢双儿茶素 A与其后面的 1个小色谱峰
无法完全分离 ,且改变有机相和水的比例不能改善
分离效果;后采用甲醇 -0.1%甲酸系统 (0 ～ 35
min, 25∶75※ 75∶35),发现去氢双儿茶素 A与其后
面的小色谱峰分离良好(R>1.5),但是儿茶素的峰
形不好 ,且与其前面的色谱峰无法完全分离;故又将
甲醇改为甲醇 -乙腈(1∶1),能使 4个峰峰形均较
好 ,且与其他色谱峰都能良好分离。
6.3　经 PDA检测器检测 ,对比不同检测波长下色
谱峰的强度和分离度 ,确认儿茶素在 280nm检测波
长下有最大吸收 ,香橙素和柚皮素在 290nm检测波
长下有最大吸收 ,去氢双儿茶素 A在 380 nm检测
波长下有最大吸收 ,且干扰峰少 。因儿茶素在 290
nm处吸收较弱 ,香橙素和柚皮素在 280 nm处依然
有较大吸收 ,因此选择 280 nm作为测定儿茶素 、香
橙素和柚皮素的检测波长 , 380 nm作为测定去氢双
儿茶素 A的检测波长。
6.4　分别考察了提取溶剂 (30%甲醇 , 50%甲醇 ,
70%甲醇 、甲醇)、提取方式(超声提取和加热回流
提取)、提取时间(超声 40, 50, 60 min;回流 1h, 2h,
4 h, 6 h)等对 4种成分提取的影响 , 最终优选出
50%甲醇回流提取 2h的方法 。
6.5　9批次鬼箭羽药材中儿茶素 、去氢双儿茶素
A、香橙素和柚皮素 4种成分的含量测定结果显示
本文方法简便 、可靠 ,可作为鬼箭羽药材中儿茶素等
4种成分的含量测定方法。
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