全 文 ：似 〔12〕。
　　本研究表明 , 缺血再灌注可引起海马组织神经元持续进行
性损害 , 伴 CalpainI表达持续异常增高 , CalpainI的下游产物
Cdk5的 mRNA表达和蛋白表达亦显著升高 , 提示 CalpainI-
Cdk5通路可能参与了脑缺血再灌注后 VD的发生。分析其可
能的原因:反复脑缺血-再灌注导致神经元钙平衡被破坏 ,使胞
浆内钙离子浓度增加 ,出现钙超载 , 激活 CalpainI, 异常活化的
CalpainI促使 p35向 p25的裂解增多 , p25与 Cdk5相结合使其
活性失调 , 导致 Cdk5不能对突触前 、突触后和 NMDA受体等多
种突触相关物质发挥正常生理作用 , 进而影响学习和记忆功
能 , 引起痴呆的发生。本研究对 VD小鼠海马 CalpainI-Cdk5通
路的表达进行了观察 , 有关这两种激酶活性的改变以及在 VD
中导致细胞死亡的具体机制尚有待进一步阐明。
4　参考文献
1　AngeloM, PlatnerF, GieseKP.Cyclin-dependentkinase5 insynaptic
plasticity, learningandmemory〔J〕.JNeurochem, 2006;99(2):353-70.
2　PatrickGN, ZukerbergL, NikolicM.Conversionofp35top25deregulates
Cdk5 activityandpromotesneurodegeneration〔J〕.Nature, 1999;402
(6762):615-22.
3　MitsiosN, PennucciR, KrupinskiJ, etal.Expressionofcyclin-dependent
kinase5mRNAandproteininthehumanbrainfolowingacuteischemic
stroke〔J〕.BrainPathol, 2007;17(1):11-23.
4　王雪笠 ,胡亚卓 ,吕佩源 ,等.盐酸多奈哌齐对血管性痴呆小鼠海马
ERK2及 p-ERK表达变化的影响 〔J〕.中国老年学杂志 , 2008;28
(5):426-8.
5　HawasliAH, BenavidesDR, NguyenC, etal.Cyclin-dependentkinase5
governslearningandsynapticplasticityviacontrolofNMDAdegradation
〔J〕.NatNeurosci, 2007;10(7):880-6.
6　Crespo-BielN, CanudasAM, CaminsA, etal.KainateinducesAKT, ERK
andcdk5/GSK3β pathwayderegulation, phosphorylatestauproteinin
mousehippocampus〔J〕.NeurochemInt, 2007;50(2):435-42.
7　WlgollDE, ThompsonVF, LIH, etal.Thecalpainsystem〔J〕.Physiol
Rev, 2003;83(16):731-801.
8　NeumarRW, XuYA, GadaH, etal.Cros-talkbetweencalpainand
caspaseproteolyticsystemsduringneuronalapoptosis〔J〕.JBiolChem,
2003;278(16):14162-267.
9　张　红 ,王　粤 ,金丽英 ,等 .肌苷对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡
和卡配因基因表达的影响〔J〕.齐鲁医学杂志 , 2004;19(1):14-9.
10　CruzJC, TsengHC, GoldmanJA, etal.AberrantCdk5activationbyp25
triggerspathologicaleventsleadingtoneurodegenerationandneurofibril-
larytangles〔J〕.Neuron, 2003;40(3):471-83.
11　黄天文 ,陈晓春 ,张　静 ,等 .钙蛋白酶-细胞周期依赖性蛋白激酶 5
通路参与 β淀粉样蛋白 25-35诱导的 tau蛋白过度磷酸化 〔J〕.中
华神经科杂志 , 2006;39(7):477-80.
12　WenY, YangSH, LiuR, etal.Cdk5isinvolvedinNFT-liketauopathy
inducedbytransientcerebralischemiainfemalerats〔J〕.BiochimBio-
physActa, 2007;1772(4):473-83
〔2008-10-15收稿　 2008-12-30修回〕
(编辑　牛铁兵)
刺芒柄花素雌激素样作用及其与血脂相关性研究
幸奠霞　刘志高　薛存宽　许明旺　张　芹　熊　亮　杨琼芳　
(华中科技大学同济医学院附属梨园医院 ,湖北　武汉　430077)
　　〔摘　要〕　目的　探讨刺芒柄花素对去势大鼠的雌激素样作用及其对血脂的影响。方法　雌性大鼠 40只 , 随机分为 5组 ,即假手术组 、模型
组 、尼尔雌醇组 、刺芒柄花素低 、高剂量组。去势成功后 ,予以高脂饮食 ,同时分别灌胃不同剂量的刺芒柄花素 ,并以尼尔雌醇和生理盐水作对照 ,连
续用药 8w,第 8周前 5d连续作阴道冲洗脱落细胞涂片。第 8周末断头处死大鼠 ,取子宫并进行子宫指数的测定 ,同时取血作血脂测定。结果　与
模型组比较 ,高剂量刺芒柄花素组阴道细胞涂片可见动情周期变化 ,促使去势后萎缩的子宫指数回升 ,子宫内膜增生 ,血清总胆固醇(TC)、低密度脂
蛋白胆固醇(LDL-C)降低 ,且这些作用弱于尼尔雌醇;而刺芒柄花素低剂量组无此变化。结论　刺芒柄花素在体内具有雌激素样作用 ,能够改善高
脂饮食大鼠的血脂紊乱。
〔关键词〕　刺芒柄花素;雌激素样作用;血脂
〔中图分类号〕　R282.71　　〔文献标识码〕　A　　〔文章编号〕　1005-9202(2009)18-2340-03
通讯作者:刘志高(1963-),男 ,硕士生导师, 主任医师 ,主要从事心血管
疾病临床研究。
第一作者:幸奠霞(1982-),女 ,硕士 , 主要从事老年心血管疾病基础研
究。
　　动脉粥样硬化(AS)所致心脑血管病变是威胁人类健康的
首位疾病 , 雌激素对心脑血管的保护作用受到国内外学术界的
关注。绝经后妇女应用激素替代疗法(HRT)能显著降低心脑
血管疾病的发病率。 然而 , HRT所带来的不良后果如乳腺癌 、
子宫内膜癌 〔1〕、静脉血栓 〔2 , 3〕等 ,在一定程度上限制其推广应用
并促使人们转而寻求更加安全有效的雌激素替代品。植物雌
激素是一类和雌二醇结构相似 ,具有弱雌激素样作用的非甾体
样的植物成分 , 主要包含异黄酮 、木酚素和香豆雌酚。红车轴
草中含有鹰嘴豆芽素 A、刺芒柄花素 、染料木素和大豆黄素等
多种异黄酮类植物雌激素 〔4〕 , 刺芒柄花素和鹰嘴豆芽素 A及其
甙类占红车轴草总异黄酮的 80%以上。本研究首次以刺芒柄
花素灌胃去势后高脂食饵喂食的大鼠 ,初步观察提纯的刺芒柄
花素在体内是否具有雌激素样效应 ,以及对大鼠血清脂质水平
·2340· 中国老年学杂志 2009年 9月第 29卷
的影响。
1　材料与方法
1.1　主要药品 、试剂及仪器
1.1.1　刺芒柄花素制备　红车轴草经乙醇热回流提取 , 水解
处理 , 活性氧化铝吸附后酸性醋酸乙酯洗脱 , 再经硅胶柱层析
分离 , 高效液相色谱分析刺芒柄花素含量为 82%;尼尔雌醇:上
海医药(集团)有限公司华联制药厂(批号 060501)。
1.1.2　其他试剂与仪器　丙硫氧嘧啶:上海复星朝晖药业有
限公司(批号 060901);胆固醇 、胆盐:武汉亚法生物技术有限
公司;蛋黄粉:浙江长兴艾格生物制品有限公司;猪油:武汉中
百连锁仓储超市有限公司;AU-400全自动生化分析仪:日本 O-
LYMPUS公司。
1.2　实验动物　健康成年雌性 SD大鼠 40只 , 体重在 150 ～
200g之间 ,购于武汉大学实验动物中心 ,合格证号:SCXK(鄂)
2003-2005。
1.3　实验方法
1.3.1　造模及分组　采取随机方法将大鼠分为 5组 , 每组 8
只。第 1组为假手术组 , 打开腹腔切除卵巢周围小块儿脂肪后
关腹。后 4组采取经背双侧卵巢切除术。术后第 5 ～ 10天连
续进行阴道冲洗细胞涂片 ,确定假手术组有正常动情周期变化
而后 4组无变化则为造模成功。第 11天起 ,各组饲以高脂饮
食(含猪油 10%, 蛋黄粉 5%,胆固醇 1.5%, 胆盐 0.2%,丙硫氧
嘧啶 0.2%)。与此同时 , 假手术组及模型组每日灌胃生理盐
水 1 ml/100g,尼尔雌醇组每周一灌胃尼尔雌醇 2.5 mg/kg,刺
芒柄花素低剂量及高剂量组每日分别灌胃刺芒柄花素 20、
100mg· kg-1· d-1 ,连续 8 w。
1.3.2　取材　第 8周周一开始行阴道冲洗脱离细胞涂片 ,第 8
周末断头处死大鼠 , 取血 0.2 ml, 待其自然凝固后采用全自动
生化分析仪测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂
蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量。
同时立即取出子宫并剥离周围结缔组织 , 称重后将标本置于
10%甲醛中固定 , 石蜡包埋切片后进行 HE染色 ,光镜下观察子
宫内膜上皮变化。
1.4　统计学分析　数据以 x±s表示 , 采用 SPSS14.0统计软
件 , 用单因素方差分析进行多组均数比较 , 再用最小有意义差
异法(LSD法)进行两两比较。
2　结　果
2.1　大鼠阴道细胞涂片　假手术组和尼尔雌醇组呈现正常的
动情周期变化 , 可见动情期大量无核角化上皮细胞;模型组及
刺芒柄花素低剂量组无动情周期变化 ,表现为动情间期的大量
白细胞。刺芒柄花素高剂量组亦可见动情期变化 ,镜下见无核
角化上皮 , 且互相融合。见图 1。
2.2　各组子宫系数比较　按照公式子宫系数 =子宫重量 /体
重 (g/kg)各组大鼠子宫指数的均值比较中 , 假手术组最高 ,
尼尔雌醇组和刺芒柄花素高剂量组其次 , 刺芒柄花素低剂量
组和模型组最低。模型组与假手术组子宫指数比较 , 差异有
统计学意义 (P<0.01);尼尔雌醇组子宫指数较模型组明显
升高 (P<0.01), 与假手术组差异无统计学意义 (P>
0.05);低剂量刺芒柄花素使子宫指数有所提高 , 但与模型组
比较 , 差异无统计学意义 (P>0.05);高剂量刺芒柄花素可
提高去势大鼠的子宫指数 (P<0.01), 但该作用弱于尼尔雌
醇组 (P<0.01)。见表 1。
表 1　各组子宫指数比较(x±s)
组别 n 子宫重量(g) 体重(g) 子宫指数(g/kg)
假手术组 8 0.281 4±0.029 1 255.00±14.72 1.354 7±0.227 5
模型组 8 0.080 0±0.025 3 306.67±13.663 0.260 9±0.227 81)
尼尔雌醇组 8 0.283 0±0.093 8 263.00±25.841 1.097 0±0.227 72)
刺芒柄花素低剂量组 8 0.115 0±0.025 1 291.25±23.414 0.397 2±0.226 3
刺芒柄花素高剂量组 8 0.195 6±0.024 6 271.67±24.622 0.710 1±0.240 32)3)
　与假手术组比较:1)P<0.01;与模型组比较:2)P<0.01;与尼尔雌醇组比较:3)P<0.01
2.3　对子宫内膜的影响　假手术组子宫内膜上皮呈柱状 , 细
胞核位于基底部。模型组子宫内膜上皮细胞萎缩呈扁平状。
尼尔雌醇组内膜增生形成假复层 , 内膜上皮细胞呈高柱状 , 核
浆比例增大 , 可见大量核下空泡 , 腺体上皮增生 , 亦可见核下空
泡。刺芒柄花素低剂量组内膜上皮较模型组无明显差异 ,高剂
量组的增生程度介于低剂量组和尼尔雌醇组之间 , 可见内膜上
皮呈立方形 , 未见核下空泡及假复层增生。见图 2。
2.4　各组血脂水平的比较　模型组 TC和 LDL-C分别较假手
术组升高 1.74倍和 1.52倍(P<0.01), 表明去势手术后由于
缺乏内源性雌激素可导致 TC和 LDL-C升高 , 形成高脂血症。
在该模型的基础上补充尼尔雌醇和高剂量刺芒柄花素后 , TC和
LDL-C较模型组分别降低 45.39%和 40.90%(P<0.01)。
HDL-C和 TG在各组之间差异无统计学意义。见表 2。
表 2　各组血脂水平比较(x±s, mmol/L)
组别 TC LDL-C HDL-C TG
假手术组 7.78±1.03 2.79±0.71 0.76±0.12 0.63±0.23
模型组 13.57±3.321) 4.24±0.781) 0.76±0.10 0.68±0.16
尼尔雌醇组 7.41±0.882) 2.28±0.452) 0.80±0.11 0.71±0.14
刺芒柄花素低剂量组 12.74±1.56 4.55±0.75 0.75±0.05 0.69±0.11
刺芒柄花素高剂量组 8.02±0.892) 2.64±0.552) 0.80±0.11 0.69±0.10
　与假手术组比较:P<0.01;与模型组比较:2)P<0.01
·2341·幸奠霞等　刺芒柄花素雌激素样作用及其与血脂相关性研究　第 18期
3　讨　论
　　绝经后女性由于卵巢功能减退 , 体内雌激素水平逐渐降
低 , 随之出现阴道 、子宫萎缩 , 血脂代谢紊乱 , 骨密度降低等改
变。红车轴草总异黄酮与内源性雌激素一样具有具有促进子
宫增重和阴道上皮细胞角化作用。本研究结果表明 , 补充高剂
量的刺芒柄花素后 , 阴道冲洗脱落细胞涂片可见大量角化上
皮 , 表明该剂量的刺芒柄花素能够模拟雌激素在体内的作用 ,
促使阴道上皮发生周期性改变。通过各组的子宫指数比较 , 发
现高剂量刺芒柄花素使去势大鼠子宫指数回升 , 但是这一作用
明显弱于尼尔雌醇 , 病理切片进一步表明 , 刺芒柄花素使去势
后萎缩子宫内膜及肌层增厚 , 内膜上皮恢复至立方形 , 但程度
较轻 , 不会出现过度增生形成的假复层改变及核下空泡。但低
剂量刺芒柄花素无此作用。因此 ,初步推断高剂量刺芒柄花素
具有雌激素样作用及对生殖系统具有一定的安全性。
　　TC、LDL-C、TG及 HDL-C与冠心病(CHD)的发病风险密切
相关 〔5〕 , 因此调节血脂是防治 CHD的重要切入点。本研究证
实 , 高剂量刺芒柄花素(100 mg· kg-1 · d-1)能够有效降低高
脂血症大鼠的 TC、LDL-C水平 ,对 TG和 HDL-C则无明显影响。
研究表明 , 植物雌激素能够与雌激素受体(ER)结合 , 上调肝脏
LDL受体的表达 〔6〕 , 还可直接抑制胆固醇合成限速酶 HMG-
CoA还原酶 〔7〕 ,因此 , 推测刺芒柄花素对血脂的影响可能主要
是通过这两方面来发挥作用的。植物雌激素对 TG和 HDL-C
水平的改善 , 目前各种实验的结果尚不一致 ,可能用药时间 、与
物种及同一物种的不同遗传因素有关。
4　参考文献
1　RossouwJE, AndersonGL, PrenticeRL, etal.Risksandbenefitsofestro-
genplusprogestininhealthypostmenopausalwomen:principalresults
fromthewomen′shealthinitiativerandomizedcontrolledtrial〔J〕.
JAMA, 2002;288(3):321-33.
2　HuleyS, GradyD, BushT, etal.Randomizedtrialofestrogenpluspro-
gestinforsecondaryofpreventioncoronaryheartdiseaseinpostmenopaus-
alwomen.HeartandEstrogen/progestinReplacementStudy(HERS)
ResearchGroup〔J〕.JAMA, 1998;280(7):605-13.
3　GradyD, HerringtonD, BitnerV, etal.Cardiovasculardiseaseoutcomes
during6.8yearsofhormonetherapy:HeartandEstrogen/progestinRe-
placementStudyfolow-up(HERSⅡ )〔J〕.JAMA, 2002;288(1):49-
57.
4　ChenHQ, JinZY, TaoGJ, etal.Determinationofisoflavonesindiferent
partsofTrifoliumpratensebyhighperformanceliquidchromatography
〔J〕.FoodSci, 2004;25:150-3.
5　李悦梅 ,陈慧芳 ,杨永宗 .国际动脉粥样硬化学会预防动脉粥样硬化
性心血管疾病临床指南(摘要)〔J〕.中国动脉硬化杂志 , 2003;11
(5):484-92.
6　AsakuraL, CazitaPM, HaradaLM, etal.Soyproteincontainingisofla-
vonesfavorablyinfluencesmacrophagelipoproteinmetabolismbutnotthe
developmentofatherosclerosisinCETPtransgenicmice〔J〕.Lipids,
2006;41(7):655-62.
7　YiP, DriscolMD, HuangJ, etal.Theeffectsofestrogen-responsiveele-
mentandligand-inducedstructuralchangesontherecruitmentofcofactors
andtranscriptionalresponsesbyERalphaandERbeta〔J〕.MolEndocr,
2002;16(4):674-93.
〔2008-10-31收稿　 2009-04-26修回〕
(编辑　袁左鸣)
·2342· 中国老年学杂志 2009年 9月第 29卷