全 文 ：第 33卷第 5期 江西师范大学学报(自然科学版) Vol.33No.5
2009年 10月　 JOURNALOFJIANGXINORMALUNIVERSITY(NATURALSCIENCE) 　Oct.2009
收稿日期:2009-08-20
基金项目:国家自然科学基金(30660221)和青海省自然科学基金(2006-N-554)资助项目.
作者简介:宋　萍(1965-), 女 ,山东长岛人 , 教授 ,主要从事天然产物及食品的分析研究.
文章编号:1000-5862(2009)05-0515-03
藏药鬼箭锦鸡儿种子中黄酮含量的测定
宋　萍 , 　赵明德 , 　刘　阳 , 　李　莉
(青海民族大学 化学系 , 青海 西宁 　810007)
摘要:以黄酮含量为考察目的 ,利用藏药鬼箭锦鸡儿中黄酮的最佳提取方法进行提取;并利用分光光度
法 ,以芦丁为对照品 ,对藏药鬼箭锦鸡儿种子中的黄酮含量进行测定.结果表明该药材种子中黄酮的平均
含量为 0.658%.利用分光光度法测定的样品结果准确可靠 、重复性好.
关键词:藏药;鬼箭锦鸡儿;黄酮;分光光度法;芦丁
中图分类号:O657.32　　　　文献标识码:A
鬼箭锦鸡儿(Caraganajubata(Pal.)Poir.)系豆科蝶形花亚科锦鸡儿属植物 ,是一种叶型较小的中生 、
中旱生 、旱生和沙生灌木 ,藏名音译为 “作毛兴 ”[ 1] .分布于西藏 、青海 、四川 、甘肃 、宁夏 、新疆 、辽宁 、内蒙古
等省区 ,主要生长在海拔 3 000 ～ 4 700m的阴坡 、半阴坡地带[ 2-3] .藏医常用其根茎及其干燥红色木质部芯材
材入药 ,其具有活血散淤 、平血压 、凉血 、生肌止痛的功能 ,可用于防治多血症 、高血压 、血热症 、心血管和妇科
疾患等方面的疾病[ 4-5] .到目前为止 ,对藏药鬼箭锦鸡儿中化学成分研究以及对其中所含黄酮的最佳提取方
法的研究已有文献报道 [ 6-9 ] ,同时对该植物的根 、茎 、皮 、花 、叶及干燥红色木质部芯材等部位的黄酮含量也
进行了分析测定 [ 10-14] ,但对鬼箭锦鸡儿种子中的黄酮含量测定目前还未见文献报道.为此 ,本文采用分光光
度法对鬼箭锦鸡儿种子中的黄酮含量进行测定 ,目的是进一步开发鬼箭锦鸡儿植物资源的全面综合利用 ,对
合理选取该药材的用药部位 、充分发挥其药理活性作用给予一定的参考和指导依据.
1　仪器与试剂
1.1　仪器与试剂　UV-2800A型紫外-可见分光光度计(上海元析仪器有限公司);ESJ182-5电子分析天平
(沈阳龙腾电子有限公司);RE52CS旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);SHS-6型电热恒温温水浴锅(黄石
市恒丰医疗器械有限公司);超声清洗仪(昆山超声仪器有限公司);芦丁(中国药品生物品检定所);乙醇 、石
油醚等试剂均为分析纯;常用玻璃仪器等.
1.2　样品采集　鬼箭锦鸡儿种子采自海拔 3 000m以上的青海互助 、大通 、玉树 、果洛等地区(由青海省藏
药研究所多杰研究员鉴定).取干燥的种子放在研钵中研磨 ,研磨后过筛作为实验样品备用.
2　方法与结果
2.1　对照品芦丁标准溶液的制备　精密称取 120 ℃干燥至恒重的芦丁标准样品 0.025 0 g,用 75%乙醇使
其溶解 、摇匀并定容至 100mL容量瓶中稀释至刻度后备用.
2.2　供试品溶液制备　鬼箭锦鸡儿种子中黄酮的提取方法参照参考文献 [ 10] ,即准确称取已研磨粉碎过
筛后的藏药鬼箭锦鸡儿种子的粉末 0.950 0 g于 250mL烧瓶中 ,加入 10mL石油醚并在 65 ℃左右回流 60
min进行脱脂 ,抽滤并弃去滤液;再加入 10mL75%的乙醇 ,在 75 ℃左右回流提取 30 min,重复 3次 ,抽滤.
滤渣再用少量 75%乙醇洗涤 ,弃去滤渣 ,合并滤液与洗涤液后用旋转蒸发仪进行减压蒸馏浓缩.用 75%乙醇
DOI :10.16357/j.cnki.issn1000-5862.2009.05.016
定容至 25mL容量瓶中 ,得黄酮提取物供试品溶液 ,可用于鬼箭锦鸡儿种子中黄酮含量的测定.
2.3　最大吸收波长的确定　精密吸取芦丁对照品溶液 5 mL置于 25 mL容量瓶中 ,用移液管移取 1.0 mL
5% NaNO2溶液 ,摇匀放置 5 ～ 6 min,移取 1.5mL10% Al(NO3)3溶液 ,摇匀放置 5 ～ 6 min,再移取 10%的
NaOH溶液 10 mL,然后用 75%乙醇溶液稀释至刻度 ,摇匀放置 10min,以相应试剂作空白 ,在 470 ～ 550 nm
波长范围内测定溶液的吸光度 [ 10-11] ,测定结果见表 1.由表 1可见 ,在 510nm处有最大吸收值 ,所以选择 510
nm作为该实验的检测波长.
表 1　不同波长下芦丁标准溶液对应的吸光度
λ/nm 470 480 490 500 510 520 530 540 550
A 0.545 0.589 0.629 0.656 0.662 0.646 0.607 0.551 0.480
2.4　标准曲线的绘制　精密吸取芦丁对照品溶液 0, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0mL分别置于 25 mL容量瓶
中 ,各加 1.0mL5% NaNO2溶液 ,摇匀放置 5 ～ 6 min,加 1.5mL10% Al(NO3)3溶液 ,摇匀放置 5 ～ 6 min,再
加 10%的 NaOH溶液 10 mL,然后用 75%乙醇溶液稀释至刻度 ,摇匀放置 10 min后 ,分别在 510nm处测定
其吸光度 ,结果见表 2.
表 2　不同芦丁标准样品浓度对应的吸光度
C/(mg· mL-1) 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06
A 0.158 0.272 0.408 0.536 0.675 0.820
　　以浓度 C(mg/mL)为纵坐标 、吸光度 A为横坐标 ,应用最小二乘法进行线性拟合 ,得回归方程 A=
13.28 C+0.013 5,相关系数 r=0.999 4(n=7).
2.5　精密度试验　精密取 3 mL芦丁对照品溶液置于 25mL容量瓶中 ,采用 NaNO2-Al(NO3)3 -NaOH显色 ,
在选定的 2.4项实验条件下重复测定 6次吸光度 A值 ,计算得吸光度值的相对标准偏差 RSD=0.74% (n=
6),表明仪器精密度良好.
2.6　稳定性试验　精密称取已研磨粉碎过筛后的互助鬼箭锦鸡儿种子的粉末 0.950 0g,按 2.2项下方法
操作制备供试品溶液 ,采用 NaNO2 -Al(NO3)3-NaOH显色 ,并按 2.4项实验条件下分别在 1, 3, 5 , 7, 9 h时于
510nm波长处测定其吸光度 A值 ,结果表明 ,样品溶液在 9 h内基本稳定.
2.7　重复性试验　精密称取 6份已研磨粉碎过筛后的互助鬼箭锦鸡儿种子的粉末 1.000 g,按 2.2项下方
法操作制备供试品溶液 ,采用 NaNO2-Al(NO3)3 -NaOH显色 ,并在选定的 2.4项实验条件下下分别测定其吸
光度 A值 , 计算得吸光度值的相对标准偏差分别是 RSD=1.79% (n=6),实验结果表明本方法的重复性满
足要求.
2.8　回收率实验　精密称取 6份已知黄酮含量的互助鬼箭锦鸡儿种子样品 1.000 g,依次加入芦丁对照品
溶液适量 ,按 2.2项下方法操作制备供试品溶液 ,并在选定的 2.4项实验条件下下分别测定其吸光度 A值 ,
测得该方法的平均回收率为 103.5% (n=6), RSD=2.07%.
2.9　鬼箭锦鸡儿种子中黄酮含量的测定　称取大通 、玉树 、互助 、果洛等地区鬼箭锦鸡儿种子样品按 2.2项
下方法操作分别制备供试品溶液 ,依次准确吸取试样 5mL4份 ,分别置于 50mL容量瓶中 ,其中 1份用75%
的乙醇定容至刻度 ,作为参比溶液.其余 3份在选定的 2.4项实验条件下下分别测定其吸光度 A值 ,代入标
准曲线回归方程即可得浓度数据 ,经计算后可得藏药鬼箭锦鸡儿种子中黄酮的含量 ,实验结果见表 3.
表 3　鬼箭锦鸡儿种子中黄酮含量的测定结果(n=3)
产　地 吸光度平均值 总黄酮含量 /% RSD/%
大通
玉树
互助
果洛
0.343
0.351
0.344
0.346
0.653
0.659
0.655
0.658
1.01
0.57
2.07
1.56
516 江西师范大学学报(自然科学版) 2009年
3　讨论
(1)本实验以芦丁为对照品 ,采用 NaNO2 -Al(NO3)3-NaOH显色法测定鬼箭锦鸡儿种子中黄酮的含量.
实验方法简便可行 ,显色稳定 ,实验数据准确可靠.
(2)从实验测定结果看 ,鬼箭锦鸡儿种子中的黄酮含量比蒙秋霞等对扁刺锦鸡儿种子中黄酮含量的测
定值 0.629%稍高 ,比小叶锦鸡儿种子中黄酮含量的测定值 0.712%稍低[ 14 ] ,这可能是与植物的品种不同 、
植物的生长环境不同 、采集时间不同等因素有关.
(3)本实验测得藏药鬼箭锦鸡儿种子中黄酮的含量较低可能由以下原因所致:首先 ,黄酮类化合物是一
类低分子天然产物 ,其成分和分子结构较复杂 ,而采用在碱性条件下加铝盐的显色法 ,一定程度上会受杂质
的干扰 ,使结果产生误差;另外 ,在对鬼箭锦鸡儿种子的称量 、回流脱脂和提取 、抽滤 、浓缩 、移液等环节的操
作亦会对测量成分造成较小的损失 ,对实验结果也会产生误差.
(4)鬼箭锦鸡儿植物在我国青藏高原等许多地区都有广泛分布 ,资源丰富 ,其药理活性较强 ,民间已有
很好的用药经验.目前据查参考文献已对该植物的根 、茎 、皮 、花 、叶及干燥红色木质部芯材等部位的黄酮含
量进行了分析测定 ,现在本文再对鬼箭锦鸡儿种子中的黄酮含量进行分析测定 ,这将会对该植物的全面综合
研究及开发利用提供科学的参考依据 ,可进一步促进鬼箭锦鸡儿植物的可持续开发与生态资源保护.
参考文献:
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DeterminationofFlavonoidContentintheSeedsof
theTibetanMedicineCaraganaJubata(Pal.)Poir.
SONGPing, 　ZHAOMing-de, 　LIUYang, 　LILi
(DepartmentofChemistry, QinghaiUniversityforNationalities, Xining810007, China)
Abstract:Withtheflavonoidscontentasanobservedtarget, aoptimumextractingmethodwasusedinthisexperi-
ment;andtheflavonoidsintheseedsofCaraganajubata(Pal.)Poir.wereanalyzedqualitatively.Inthispaper,
thecontentofflavonoidswas0.658% byspectrophotometicmethodwithrutinasstandardsample.Areasonable
proceswasusedtoextracttheflavonoids, andthisdeterminationresultsofsamplesbyspectrophotometicmethodis
reliable, accurateandreproducible.
Keywords:tibetanmedicine;Caraganajubata(Pal.)Poir.;flavonoid;spectrophotometry;rutin
(责任编辑:刘显亮)
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