全 文 ：第 23卷　第 2期　　　　　　　　　　　　　　　　西　南　林　学　院　学　报　　　　　　 Vo1.23　No.2
　2003年 6月　　　　　　　　　　　　　　JOURNAL OF SOUTHWEST FORESTRY COLLEGE　　　　 Jun.2003　
永椿香槐组织培养研究
邓莉兰1 ,陶仕珍2 ,袁留富1
(1.西南林学院资源学院 ,云南昆明 650224;2.云南省林业学校 ,云南昆明 650224)
摘要:经过愈伤组织的诱导 ,不定芽和根系的培养 ,最终培养形成永椿香槐完整植株.经过筛
选 ,使用新长出的茎段作为外植体培养材料 ,在MS+6-BA 1.50 mg/L+NAA 0.20 mg/L+3%
蔗糖培养基中培养愈伤组织和不定芽 ,在White+IBA 1.00 mg/L+1.5%蔗糖培养基中诱导根
突 ,在 1/2 MS+IBA 1.00 mg/L +1.5%蔗糖培养基中培养根 ,是永椿香槐组织培养最适宜的
组合.
关键词:永椿香槐;组织培养;愈伤组织
中图分类号:S722.37　文献标识码:A　文章编号:1003-7179(2003)02-0019-02
　　永椿香槐(Cladrastis yunchunii X.W.Li et G.S.
Fan)为蝶形花科香槐属植物 ,是近年来发表的新
种[ 1] ,以纪念我国著名树木分类学家徐永椿教授
而命名.永椿香槐目前发现生长于云南省泸西县
石灰岩地区的阔叶林中 ,分布面积较小 ,具有树形
高大美观的特点 ,宜作石灰岩地区的造林和城市
绿化树种.
1 　材料与方法[ 2～ 5]
1.1 　材料
采集野生环境中引种的永椿香槐茎段 、幼叶
作为离体培养外植体材料 ,采集后用洗衣粉水清
洗 ,然后在自来水下漂洗.
1.2 　方法
1.2.1 　消毒　把漂洗好的茎段用 0.1%的 HgCl2
溶液浸泡 5 min ,重复 2次;叶用 0.1%HgCl2 溶液
浸泡 3 min ,同样重复 2次.第 1次浸泡后用无菌水
冲洗材料 ,再进行第 2次消毒.消毒过的材料用无
菌水冲洗 4 ～ 6次.再将茎段剪成约 3 cm长(留 1 ～
2个节),叶剪成约 0.5 cm2 的小块 , 接种于培养
基上.
1.2.2 　培养基的制备　培养基采用MS 培养基为
基本培养基 ,少量采用White 培养基并进行如下配
置 ,以便从中筛出最佳培养基配方和培养组合.
(1)MS+6-BA 0.50mg/L+NAA 0.20mg/L+3%蔗糖;
(2)MS+6-BA 1.50mg/L+NAA 0.20mg/L +3%蔗糖;
(3)MS+6-BA 2.50mg/L+NAA 0.20mg/L+3%蔗糖;
(4)MS+KT 0.50mg/L+NAA 0.20 mg/L+3%蔗糖;
(5)MS+KT 1.50mg/L+NAA 0.20mg/L +3%蔗糖;
(6)MS+KT 2.50mg/L+NAA 0.20mg/L +3%蔗糖;
(7)1/2MS+IBA 1.00mg/L+1.5%蔗糖;
(8)White+ IBA 1.00mg/L+1.5%蔗糖.
1.2.3 　培养条件　培养室温度为 25 ～ 28 ℃,光照
2 000 ～ 3 000 lx ,每天照射 10 ～ 12 h.
2 　结果与分析
2.1 　不同外植体对愈伤组织培养的影响
1年生茎段在(1)至(6)号培养基上均能很快
长出愈伤组织 ,且柄下芽生长迅速 ,基部有膨胀现
象.但叶子在各种培养基中培养 30天后仍不能生
长愈伤组织 ,见表 1.
2.2 　不同取材时间对愈伤组织和不定芽培养的影响
不同时间采取的茎段材料 ,对愈伤组织形成
也产生较大影响.此次试验所取材料为:(1)多年生
茎段;(2)当年生 3月 15日茎段;(3)当年生 3月 31
日茎段;(4)当年生 4月15日茎段.并选择表 1中 3
收稿日期:2003-01-17
　基金项目:云南省自然科学基金资助项目(2000C0055M);云南省省级重点建设专业西南林学院林学专业资助.
　作者简介:邓莉兰(1962-),女 ,贵州安顺人 ,副教授 ,主要从事植物分类学和植物快繁技术的教学与研究.
种培养基.试验结果表明:随着茎段材料生长年龄
的增加 ,其诱导出愈伤组织和生长不定芽的难度
加大 ,培养时间增长 ,见表 2.
表 1　不同外植物体形成愈伤组织状况
培　　养　　基 培　　　养　　　情　　　况茎　段 叶　片
MS+6-BA 0.50+
NAA 0.20+3%蔗糖
接种 5天后从节处开裂, 有白色愈伤组织形成
接种 20天后微皱,仍不见愈伤组织
MS+6-BA 1.50+
NAA 0.20+3%蔗糖 接种 4天愈伤组织形成
接种 20天微皱 ,
30天仍不见愈伤组织
MS+6-BA 2.50+
NAA 0.20+3%蔗糖
接种 7天后开始出现白色愈伤组织 ,根部膨大
接种 25天微皱 ,
30天仍不见愈伤组织
MS+KT 1.50+
NAA 0.20+3%蔗糖 接种 9天后愈伤组织形成
接种 20天微皱 ,
30天仍不见愈伤组织
MS+KT 2.50+
NAA 0.20+3%蔗糖 接种 6天后愈伤组织形成
接种 20天微皱 ,
30天仍不见愈伤组织
MS+KT 0.50+
NAA 0.20+3%蔗糖
接种 7天后开始出现白色愈伤组织 ,根部膨大
接种 25天微皱 ,
30天仍不见愈伤组织
1/2 MS+IBA 1.00 mg/ L+1.5%蔗糖;
接种 30天后仍不见愈伤组织形成
接种 20天微皱 ,
30天仍不见愈伤组织
White+ IBA 1.00mg/L+1.5%蔗糖.
接种 30天后仍不见愈伤组织形成
接种 20天微皱 ,
30天仍不见愈伤组织
表 2　不同取材时间对愈伤组织诱导的影响
培 养基 不同取材时间培养情况(1) (2) (3) (4)
MS+KT 1.50+NAA 0.20+3%蔗糖
17 天后茎 段 上的 休 眠芽长出.
5天后长出 愈 伤组织
7天长愈伤组织 9天长愈伤组织
MS+KT 2.50+NAA 0.20+3%蔗糖
15 天后茎 段 上的 休 眠芽长出
3天后长出 愈 伤组织
5天后长愈 伤 组织
6天长出愈 伤 组织
MS+KT 0.50+NAA 0.20+3%蔗糖
15 天后茎 段 上的 休 眠芽长出
5天后长出 愈 伤组织
6天长出愈 伤 组织
7天后长愈 伤 组织
2.3 　细胞分裂素对愈伤组织和不定芽培养的影响
试验中采用薄壁组织丰富 ,具有更强脱分化能
力的 1年生茎段 ,以MS培养基为基本培养基 ,以 6
-BA和KT 为细胞分裂素 ,浓度分别取 0.50 ,1.50 ,
2.50 mg/L , 保持 NAA为 0.20 mg/L 恒定.结果表
明:在NAA相同的情况下 ,6-BA与KT 相同浓度对
比 ,6-BA比 KT 易诱导出不定芽 ,而 KT 比 6-BA
易诱导出白色颗粒状的愈伤组织.相比之下 ,6-BA
更适合永椿香槐 ,而且可使愈伤组织长得更多 ,最适
合的浓度为 6-BA 1.50 mg/L ,见表 3.
表3　细胞分裂素对愈伤组织形成和不定芽的培养状况
培　　养　　基 培　养　情　况愈伤组织生长情况 不定芽生长情况
MS+NAA 0.20+6-BA 0.50+3%蔗糖 8天长出愈伤组织 12天生 1不定芽
MS+NAA 0.20+6-BA 1.50+3%蔗糖 7天长出愈伤组织 8天生 2不定芽
MS+NAA 0.20+6-BA 2.50+3%蔗糖 7天长出愈伤组织 9天生 3不定芽
MS+NAA 0.20+KT 0.50+3%蔗糖 6天长出愈伤组织 20天生 3不定芽
MS+NAA 0.20+KT 1.50+3%蔗糖 6天长出愈伤组织 17天生 1不定芽
MS+NAA 0.20+KT 2.50+3%蔗糖 6天长出愈伤组织 25天生 1不定芽
2.4 　根的培养
将培养出的不定芽接种到(7)和(8)培养基中 ,
10天后均可见不定芽基部长出根的小突起 ,20天
后长出 3 ～ 20条不定根 ,再继代 1次 ,成完整的植
株.结果表明:不定芽接种到White 培养基上(第 8
号培养基)更易形成根状突起 ,继代到 1/2 MS培养
基(第 7号培养基)上易长出较多的不定根.
3 　结　论
根据以上分析 ,在永椿香槐组织培养中 ,使用
新长出的茎段作外植体培养材料 ,在 MS+6-BA
1.50 mg/L+NAA 0.20 mg/L+3%蔗糖培养基中培
养愈伤组织和不定芽 ,White + IBA 1.00 mg/L+
1.5%蔗糖培养基中诱导根突 ,在 1/2 MS +IBA
1.00 mg/L +1.50%蔗糖培养基中培养根效果最
好.
[ 参　考　文　献]
[ 1] 　李乡旺 , 樊国盛.香槐属一新种[ J] .植物研究 , 1995 ,
14(4):347～ 348.
[ 2] 　李俊明.植物组织培养教程[ M] .北京:中国农业大学
出版社 , 2001.
[ 3] 　曹孜义 , 刘国民.实用植物组织培养技术教程[ M] .兰
州:甘肃科学技术出版社 , 1999.
[ 4] 　沈惠娟.木本植物组织培养技术[ M] .北京:中国农业
科学技术出版社 , 1992.
[ 5] 　樊国盛 , 邓莉兰.西南桦组织培养研究[ J] .西南林学
院学报 , 2000 , 20(3):147～ 151.
(英文摘要下转第 25页)
20 西　南　林　学　院　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　　　　第 23卷
A Study on the Technology for Extracting Pure β -Ecdysone
from Cyanotis arachnoidea
ZHU Xiang-dong ,AN Yin-ling
(Faculty of Resources ,Southwest Forestry College , Kunming Yunnan 650224 , China)
Abstract:Cyanotis arachnoidea is extracted with alcohol and water and a compund has been isolated by crystal-
lization.The structure is identified as β-ecdysone by spectroscopic evidemce and physicochemical constants.
Key words:Cyanotis arachnoidea;β-ecdysterone;clear agent;factory prodnction
(上接第 20 页)
A Study on Tissue Culture of Cladrastis yunchunii
DENG Li-lan1 , TAO Shi-zhen2 , YUN liu-fu1
(1.Faculty of Resources , Southwest Forest ry College , Kunming Yunnan 650224 , China;
2.Forestry School of Yunnan Province , Kunming Yunnan 650224 ,China)
Abstract:Full plants of Cladrastis yunchunii are obtained by tissue culture through inducement of callus as well
as culture of adventitious buds and roots.It is the best combination during this tissue culture of Cladrastis yunchunii
that selecting new stem segments as explants ,MS+6-BA 1.50 mg/L+NAA 0.20 mg/L+3% sucrose as culture
medium for culturing callus and adventitious buds , White+IBA 1.00 mg/L+1.5% sucrose as culture medium for
inducing root tips ,1/2 MS+IBA 1.00 mg/L+1.5% sucrose as culture medium for culturing roots.
Key words:Cladrastis yunchunii;tissue culture;callus
25第 2期　　　　　　　　　　　　　　朱向东等:从露水草中提取纯化 β-蜕皮激素工艺研究