全 文 ：第 1 2卷 第 l期
1 9 9 4年 3 月
海 南 大 学 学 报 自 然 科 学 版
A N T R UA LS C IE C E N J O UA R N L OF HAI A NI N N UVE RS f Y Y
Vo l
.
1 2, N o
.
1
M a
r e h
, 1 9 94
海刀豆 、 红树 D N A 的提取 ’
邓用川 曾 驰 徐立新 林栖凤 李冠 一
(海南大学生物中心生化研究室 , 海 口 5 7。。 28)
摘要 本文介绍了两种简便 、 快速的 D N A 提取方法 ,它们不需要特殊试剂 、 液氮和 柱层析系
统 、超速离心机等贵重仪器 . 我们以海刀豆和红树两种盐生植物为实验材料 ,所制得的 D N A
样品经紫外分光光度计检测 :其最大吸收波长均为 2 58 n m ; A Z朋 /A 28 0均为 1 . 82 ;与 eS p h ar ose
4 B 柱层析分离结果相近 ;用琼脂糖凝胶电泳检测为均一的谱带 。
关键词 脱氧核糖核酸 ( D N A ) , 提取 , 红树 , 海 刀豆
中图分类号 Q 5 2 3 , Q 9 4 6 . 2 , Q 9 4 9 . 7 2
盐生植物红树具有坚固的细胞壁 , 比陆生植物含有更多的多糖 、 脂类 、 色素及酚类物质 ,因
此按一般植物 D N A 提取方法 ,很难从红树 中提取制得符合要求的 D N A 。 为了构建盐生植物
D N A 物理图谱 、 基因文库和进行遗传转化等研究 , 建立合适 的 D N A 提取方法是十分必要的 。
我们参考 有关文献 〔 ’ 一 ` , 对海刀 豆 、 红树等 植物进行 D N A 提取 ,能较 干净地 除去蛋 白质及
R N A (核糖核酸 ) ,获得较纯净 、 均一的大分子 D N A , 可以满足一般核酸研究和直接 导入植物
的要求 。
1 材料和方法
1
.
1 材料 1 )海刀 豆 ( C a ,。 v a l i a m a r it im a ) , 采 自海 口海滩 ; 2 )红树 ( hR i z o p h o r a a p ic u l a t a ) ,
采 自琼 山东寨港 。
1
.
2 试剂 E DT A (乙二胺四 乙酸钠 ) 、 T r iS (三轻甲基氨基 甲烷 ) 、 琉基乙醇等系国产分析纯试
剂 , 入一 D N A 、 R N a s e ( R N A 酶 ) 、 S D S (十二烷基硫酸钠 ) 系进口 分装产品 。
1
.
3 方法 A
l) 从一 20 O C 冰箱 中取出贮藏的海刀豆幼叶 ( 50 9 以内不限量 ) , 置冷研钵中 (0 一 4 O C 冰
浴 ) , 加入等量 ( W / V ) 的研磨 缓冲液 ( 0 . 4 5 m o l / L N a C I , 0 . 0 4 5 m o l / L 柠檬酸 钠 , 0 . 1 m o l / L
E D T A
, 1% SD S
,
p H 7
.
0 )
, 研磨 3一 5 m i n 。
2) 将匀浆置磨 口三角瓶 , 加等体积饱和酚 (用 1 m ol / L T r i s 一 H CI 饱和重蒸酚 , p H 8 . 0 ) , 温
和摇动 10 m in ,以除去蛋白和使 内源 D N as e ( D N A 酶 )失活 。
3) 室温 ( 25 ’ c ) , 2 50 0 x g 离心 10 m in , 粗 口滴管吸取上层水相 , 加两倍体积氯仿一异戊醇
(2 4
: 1
,
v /v)
,温和摇动 10 m i n 。 2 50 又 g 离心 10 m in , 收集上层水相 ,反复抽提至界面无蛋
白为止 。
4 )加两倍体积一 20 OC 冷乙醇 , 置一 20 O C 冰箱过夜 。 1 0 74 0 x g 离心 10 m in , 沉淀溶于适
辛 国家科委 、 国家海洋局资助项 目 “海洋植物抗性基因研究 ” 的部分工作收稿日期 : 1 99 3一 0 6一 2 9
DOI : 10. 15886 /j . cnki . hdxbzkb. 1994. 01. 006
第 1 2卷 第 l期
1 9 9 4年 3月
海 南 大 学 学 报 自 然 科 学 版
A N TU RA LCS IE C E N JO U A R N LO F HA I A NU I N N VE RSY fY
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海刀豆 、 红树 D N A 的提取 ’
邓用川 曾 驰 徐立新 林栖凤 李冠 一
(海南大学生物中心生化研究室 , 海 口 5 7。。 28)
摘要 本文介绍了两种简便 、 快速的 D N A 提取方法 ,它们不需要特殊试剂 、 液氮和 柱层析系
统 、超速离心机等贵重仪器 . 我们以海刀豆和红树两种盐生植物为实验材料 ,所制得的 D N A
样品经紫外分光光度计检测 :其最大吸收波长均为 2 58 n m ; A Z朋 /A 28 0均为 1 . 82 ;与 eS p h ar ose
4 B 柱层析分离结果相近 ;用琼脂糖凝胶电泳检测为均一的谱带 。
关键词 脱氧核糖核酸 ( D N A ) , 提取 , 红树 , 海 刀豆
中图分类号 Q 5 2 3 , Q 9 4 6 . 2 , Q 9 4 9 . 7 2
盐生植物红树具有坚固的细胞壁 , 比陆生植物含有更多的多糖 、 脂类 、 色素及酚类物质 ,因
此按一般植物 D N A 提取方法 ,很难从红树 中提取制得符合要求的 D N A 。 为了构建盐生植物
D N A 物理图谱 、 基因文库和进行遗传转化等研究 , 建立合适 的 D N A 提取方法是十分必要的 。
我们参考 有关文献 〔 ’ 一 ` , 对海刀 豆 、 红树等 植物进行 D N A 提取 ,能较 干净地 除去蛋 白质及
R N A (核糖核酸 ) ,获得较纯净 、 均一的大分子 D N A , 可以满足一般核酸研究和直接 导入植物
的要求 。
1 材料和方法
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1 材料 1 )海刀 豆 ( C a ,。 v a l i a m a r it im a ) , 采 自海 口海滩 ; 2 )红树 ( hR i z o p h o r a a p ic u l a t a ) ,
采 自琼 山东寨港 。
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2 试剂 E DT A (乙二胺四 乙酸钠 ) 、 T r iS (三轻甲基氨基 甲烷 ) 、 琉基乙醇等系国产分析纯试
剂 , 入一 D N A 、 R N a s e ( R N A 酶 ) 、 S D S (十二烷基硫酸钠 ) 系进口 分装产品 。
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3 方法 A
l) 从一 20 O C 冰箱 中取出贮藏的海刀豆幼叶 ( 50 9 以内不限量 ) , 置冷研钵中 (0 一 4 O C 冰
浴 ) , 加入等量 ( W / V ) 的研磨 缓冲液 ( 0 . 4 5 m o l / L N a C I , 0 . 0 4 5 m o l / L 柠檬酸 钠 , 0 . 1 m o l / L
E D T A
, 1% SD S
,
p H 7
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0 )
, 研磨 3一 5 m i n 。
2) 将匀浆置磨 口三角瓶 , 加等体积饱和酚 (用 1 m ol / L T r i s 一 H CI 饱和重蒸酚 , p H 8 . 0 ) , 温
和摇动 10 m in ,以除去蛋白和使 内源 D N as e ( D N A 酶 )失活 。
3) 室温 ( 25 ’ c ) , 2 50 0 x g 离心 10 m in , 粗 口滴管吸取上层水相 , 加两倍体积氯仿一异戊醇
(2 4
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v /v)
,温和摇动 10 m i n 。 2 50 又 g 离心 10 m in , 收集上层水相 ,反复抽提至界面无蛋
白为止 。
4 )加两倍体积一 20 OC 冷乙醇 , 置一 20 O C 冰箱过夜 。 1 0 74 0 x g 离心 10 m in , 沉淀溶于适
辛 国家科委 、 国家海洋局资助项 目 “海洋植物抗性基因研究 ” 的部分工作收稿日期 : 1 99 3一 0 6一 2 9
第 12 卷 第 l 期
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海 南 大 学 学 报 自 然 科 学 版
N T AR UL A S C IEN C EJ O UR N L A OF H AN I AN N U IV R E Sf Y Y
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邓用川 曾 驰 徐立新 林栖凤 李冠 一
(海南大学生物中心生化研究室 , 海 口 5 7。。 28)
摘要 本文介绍了两种简便 、 快速的 D N A 提取方法 ,它们不需要特殊试剂 、 液氮和 柱层析系
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样品经紫外分光光度计检测 :其最大吸收波长均为 2 58 n m ; A Z朋 /A 28 0均为 1 . 82 ;与 eS p h ar ose
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关键词 脱氧核糖核酸 ( D N A ) , 提取 , 红树 , 海 刀豆
中图分类号 Q 5 2 3 , Q 9 4 6 . 2 , Q 9 4 9 . 7 2
盐生植物红树具有坚固的细胞壁 , 比陆生植物含有更多的多糖 、 脂类 、 色素及酚类物质 ,因
此按一般植物 D N A 提取方法 ,很难从红树 中提取制得符合要求的 D N A 。 为了构建盐生植物
D N A 物理图谱 、 基因文库和进行遗传转化等研究 , 建立合适 的 D N A 提取方法是十分必要的 。
我们参考 有关文献 〔 ’ 一 ` , 对海刀 豆 、 红树等 植物进行 D N A 提取 ,能较 干净地 除去蛋 白质及
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1 材料和方法
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1 材料 1 )海刀 豆 ( C a ,。 v a l i a m a r it im a ) , 采 自海 口海滩 ; 2 )红树 ( hR i z o p h o r a a p ic u l a t a ) ,
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2 试剂 E DT A (乙二胺四 乙酸钠 ) 、 T r iS (三轻甲基氨基 甲烷 ) 、 琉基乙醇等系国产分析纯试
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3 方法 A
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浴 ) , 加入等量 ( W / V ) 的研磨 缓冲液 ( 0 . 4 5 m o l / L N a C I , 0 . 0 4 5 m o l / L 柠檬酸 钠 , 0 . 1 m o l / L
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, 1% SD S
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2) 将匀浆置磨 口三角瓶 , 加等体积饱和酚 (用 1 m ol / L T r i s 一 H CI 饱和重蒸酚 , p H 8 . 0 ) , 温
和摇动 10 m in ,以除去蛋白和使 内源 D N as e ( D N A 酶 )失活 。
3) 室温 ( 25 ’ c ) , 2 50 0 x g 离心 10 m in , 粗 口滴管吸取上层水相 , 加两倍体积氯仿一异戊醇
(2 4
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,温和摇动 10 m i n 。 2 50 又 g 离心 10 m in , 收集上层水相 ,反复抽提至界面无蛋
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4 )加两倍体积一 20 OC 冷乙醇 , 置一 20 O C 冰箱过夜 。 1 0 74 0 x g 离心 10 m in , 沉淀溶于适
辛 国家科委 、 国家海洋局资助项 目 “海洋植物抗性基因研究 ” 的部分工作收稿日期 : 1 99 3一 0 6一 2 9