全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2012，27(2)∶193 ～ 195
基金项目:国家自然科学基金资助项目(批准号:30772742) ;中央高校基本科研专项(NO:SWJTU11ZT26)
作者简介:魏屹(1966—) ，女，四川西昌，从事生药分析工作。Email:weiyiyxy@ 126． com
HPLC指纹图谱法研究峨眉黄连与三角叶黄连
魏 屹，丁雪娇，宋良科，郑 敬，李 静
(西南交通大学生命科学与工程学院，四川 成都 610031)
摘要:目的 建立三角叶黄连 Coptis deltoidea 和峨眉黄连 Coptis omeinsis 的根茎、根、叶的高效液相指纹图谱。方法 采用
HPLC － DAD法测定峨眉黄连、三角叶黄连及黄连的根茎、根和叶中小檗碱的含量及各部位的指纹图谱，用指纹图谱相似度评
价方法综合比较黄连药材的差异。结果 从化学组分及各组分含量的相似度综合比较，同一分布区域内的 3 种黄连中，峨眉
黄连与三角叶黄连更相似，同为雅连使用有一定的依据。结论 所用方法简便、重复性好，可用于黄连属植物的化学组分与
种间鉴别的比较依据。
关键词:黄连;峨眉黄连;三角叶黄连;HPLC;指纹图谱
中图分类号:R917 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2012)02 － 0193 － 03
Comparative study of Coptis omeiensis and Coptis deltoidea by HPLC fingerprint
WEI Yi，DING Xue － jiao，SONG Liang － ke，ZHENG Jing，LI Jing
(School of Life Science and Engineering，Southwest Jiaotong University，Chengdu，Sichuan，610031 P． R． China)
Abstract:OBJECTIVE To set up the fingerprints of the rhizomes，roots and leaves from Coptis omeiensis(Chen)C． Y． Cheng(CO)
and Coptis deltoidea Cheng et Hsiao(CD)by HPLC． METHODS HPLC － DAD method was applied to determine the berberine
contents in rhizome，roots and leaves from CO and CD． Chromatographic fingerprint of the nine kinds of medicinal materials was deter-
mined by RP － HPLC(DAD)with gradient elution mode． The fingerprint similarity evaluation software was used to analyze the data and
compare the similarity． RESULTS The common model of HPLC fingerprint was established and the similarity of the medicinal plants
from the same area was compared． It showed that CO and CD were more similar than C． chinensis Franch(CC)． CONCLUSION The
HPLC － DAD fingerprint method is simple，stable，applicable to CC，and suitable for the analysis of the rhizomes，roots，leaves and the
fruit clusters of CD and CC．
Key words:Coptis chinensis;Coptis omeiensis;Coptis deltoidea;HPLC;Chromatographic fingerprint
CLC number:R917 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2012)02 － 0193 － 03
峨眉黄连 Coptis omeiensis(Chen)C． Y． Cheng
为多年生宿根性野生常绿草本，三角叶黄连 C． del-
toidea Cheng et Hsiao 已有几百年的栽培历史;两者
均为毛茛科黄连属植物，根据历史用药和实地调查，
其根茎均作为雅连使用［1］;主要分布于四川省峨眉
山市、眉山市洪雅县、雅安市雨城区以及荣经县交界
的潮湿多雾、多雨的高寒山区，为黄连药材中的优质
品［2］，《中国药典》历版均予雅连收载。雅连现因多
种因素导致资源短缺，目前已无商品供应，处于濒危
状态［3］。雅连的研究较黄连 C． chinensis Franch． 滞
后，通过研究峨眉黄连的生活史和繁殖特性认为:生
态环境对其生存与分布至关重要［4］;在对峨眉黄连
与三角叶黄连的内源性激素研究时，发现二者花期
的内源性激素差异明显［5］;峨眉黄连中总生物碱和
小檗碱含量较高，而三角叶黄连与黄连基本一
致［6］;针对三角叶黄连和黄连 HPLC 指纹图谱的研
究方面主要局限在药用部位的根茎［7 － 9］，峨眉黄连
的 HPLC指纹图谱研究还未见报道。现以黄连为参
照，比较在同一分布区域内峨眉黄连与三角叶黄连
的根、根茎、叶中小檗碱含量和 HPLC指纹性状的差
异，为雅连药材的质量评价与鉴别以及进一步研究
黄连属植物的亲缘关系与化学组分的相关性奠定良
好的基础。
1 实验部分
1． 1 仪器与试药
高效液相色谱仪(日本岛津)。盐酸小檗碱(批
号:110713 － 200208)、盐酸药根碱(批号:0733 －
200005)、盐酸巴马汀(批号:110732 － 200306) (中
国药品生物制品检定所) ;黄连碱(自制，纯度大于
70%) ;三角叶黄连采于四川省峨眉山市黄湾乡茶
地(保种栽培，海拔 1． 12 km、东经 103°21． 332、北
纬 29°35． 428)和四川省雅安市望鱼乡 20 年前栽培
地(逸为野生，海拔 1． 71 km、东经 103°0． 583、北纬
DOI:10.13375/j.cnki.wcjps.2012.02.022
29°45. 033) ;黄连采于四川省峨眉山市茶地村(栽
培) ;峨眉黄连采于四川省峨眉山市黄湾乡茶地(海
拔 1． 21 km、东经 103°21. 308、北纬 29°35． 382)和
峨眉山人棚子沟(海拔 1． 4 km、东经 103°20． 531、
北纬 29°34． 334) ;乙睛、甲醇均为色谱纯;水为超纯
水;其余试剂为分析纯。
1． 2 方法与结果
1． 2． 1 样品的制备 实验所用植株均为开花后同
一时期采挖者，每份样品按照不同地点各采集 3 批，
均经宋良科鉴定无误。分别取各黄连植株用水迅速
冲淋、晾至表面无水分，剪下根、根茎、叶(带叶柄)
编号，分别在 35 ℃下烘干，粉碎，过 60 目筛，备用。
1． 2． 2 色谱条件 采用 Shimadzu VP － ODS C18色
谱柱(250 mm × 4． 6 mm，5 μm)。流动相为 A(乙
腈)－ B(0． 05%的磷酸二氢钾溶液)系统，梯度洗
脱:0 ～ 15 min、10% ～ 25% A，15 ～ 20 min、25% ～
30% A，20 ～ 25 min、30% ～ 34% A，25 ～ 40 min、
34% ～48% A，40 ～ 50 min、48% ～ 60% A，50 ～ 60
min、60% ～ 75% A。检测波长 305 nm，柱温 25 ℃，
流速 0． 7 mL·min －1，进样量 10 μL。
1． 2． 3 溶液的制备 精密称取适量 105 ℃干燥至
恒重的盐酸小檗碱、盐酸药根碱、巴马汀及黄连碱对
照品，加甲醇溶解并定容，制成 0． 4 mg·mL －1盐酸小
檗碱、0． 2 mg·mL －1盐酸药根碱、0． 2 mg·mL －1巴马
汀、0． 2 mg·mL －1黄连碱的对照品混合溶液。分别
取 3 种黄连的 3 个不同部位样品粉末各 0． 2 g，精密
称定，置 50 mL 量瓶中，加入 45 mL 盐酸 － 甲醇
(1∶100)溶液，密塞，于 60 ℃水浴中加热 15 min，
超声处理 30 min，室温下静置过夜，加甲醇定容，用
0． 45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。
1． 2． 4 精密度的考察 取三角叶黄连根茎粉末，精
密称定，按“1． 2． 3”项方法制备供试品溶液，按
“1. 2. 2”项色谱条件连续进样 5 次，记录指纹图谱。
结果表明:各主要色谱峰的相对保留时间和峰面积
无明显差异，通过《中药色谱指纹图谱评价系统
2004A版》考察，其全谱相似度(平均数相关系数，
多点校正、时间窗宽度 0． 1 min，下同)大于 0． 98，符
合指纹图谱要求。
1． 2． 5 重复性考察 取同批的三角叶黄连根茎粉
末 5 份，按“1． 2． 3”项方法制备供试品溶液，按
“1. 2. 2”项色谱条件分别进样，记录指纹图谱。各
主要色谱峰的相对保留时间和峰面积无明显差异，
通过《中药色谱指纹图谱评价系统 2004A版》考察，
其全谱相似度大于 0． 96，符合指纹图谱要求。
1． 2． 6 稳定性考察 取三角叶黄连根茎粉末，精密
称定，按“1． 2． 3”项方法制备供试品溶液，按
“1. 2. 2”项色谱条件分别于 0、2、4、8、12、24 h 时进
样 10 μL，记录指纹图谱。结果表明:各主要色谱峰
的相对保留时间和峰面积无明显差异，通过《中药
色谱指纹图谱评价系统 2004A 版》考察，其全谱相
似度大于 0． 96，符合指纹图谱要求。
1． 2． 7 样品指纹图谱的测定 精密吸取“1． 2． 3”
项制备的对照品溶液及供试品溶液各 10 μL，分别
进样，按照“1． 2． 2”项色谱条件进行检测，记录 60
min的色谱图，混合对照品的色谱图见图 1。用《中
药色谱指纹图谱评价系统 2004A 版》软件进行色谱
峰的匹配后，合成指纹图谱(图 2)。图 2 中，S1、S2、
8. jatrorrhizine hydrochloride
9. coptisine
11. palmatine
12. berberine hydrochloride
5 15 25 35 45 55
8
9
11
12
t/min
图 1 混合对照品溶液的 HPLC色谱图
Fig 1 HPLC chromatogram of mixed reference solution
8. jatrorrhizine hydrochloride
9. coptisine
11. palmatine
12. berberine hydrochloride
S1.Coptis deltaidea
S2.Coptis omeiensis
S3.Coptis Chimesis
A B C
1 2
3
4
5
6
7
8
11
10
12
1
2
3 4
5
67
8
9
11
12
1
3 4
5678
9
10
12
0 8.70 17.39 26.09 34.78 43.48 52.17 60 0 8.70 17.39 26.09 34.78 43.48 52.17 60 0 8.70 17.39 26.09 34.78 43.48 52.17 60
S3
S2
S1
S3
S2
S1
S3
S2
S1
t/min
9
图 2 3 种黄连的根茎(A)、根(B)和叶(C)的指纹图谱
Fig 2 The HPLC fingerprint comparison of three kinds of Coptidis Rhizoma in rhizomes(A)，roots(B)and leaves(include petiole)(C)
491 华 西 药 学 杂 志 第 27 卷
华西药学杂志
W C J·P S 2012，27(2)∶195 ～ 197
S3 分别为 3 批三角叶黄连、峨眉黄连、黄连的根茎、
根、叶的色谱图合成的指纹图谱。
1． 2． 8 3 种黄连的全谱相似度比较 从化学成分
角度考察，以黄连指纹图谱为标准图谱进行全谱比
较，结果见表 1。
表 1 3 种黄连的全谱相似度比较
Table 1 The full spectrum similarity of three kinds of Coptidis
Rhizoma
Sample Rhizome Root Leave
Coptis chinensis 1． 00 1． 00 1． 00
Coptis omeiensis 0． 89 0． 83 0． 61
Coptis deltoidea 0． 84 0． 49 0． 57
1． 2． 9 盐酸小檗碱的含量测定 按文献［6］方法测定
3种黄连各部位中盐酸小檗碱的含量，结果见表 2。
表 2 3 种黄连中盐酸小檗碱的含量(%，n =3)
Table 2 The contents of berberine hydrochloride in three kinds of
Coptidis Rhizoma(%，n =3)
Sample Rhizome Root Leave
Coptis chinensis 6． 9 1． 45 0． 39
Coptis omeiensis 5． 8 0． 81 0． 76
Coptis deltoidea 4． 1 0． 26 0． 11
2 讨论
黄连根茎中有 12 个明显特征峰，三角叶黄连和
峨眉黄连的 3 号、6 号及 10 号峰不明显或缺失，只
有 9 个明显特征峰(图 2A)。黄连根中有 12 个特征
峰，但 10 号峰不明显，而 12 号峰后有一个明显的特
征峰;峨眉黄连与三角叶黄连中有 10 个特征峰，但
峨眉黄连在 4 号与 5 号峰之间出现了 1 个特征峰，
而 6 号峰缺失;三角叶黄连中 6 号峰则明显(图
2B)。黄连叶中有 18 个特征峰，峨眉黄连中有 12
个，而三角叶黄连中有 7 个(图 2C)。在同一条件
下，3 种黄连的化学峰指纹性状表明:峨眉黄连与三
角叶黄连所含化学组分与黄连比较更为相似，说明
古代将三角叶黄连与峨眉黄连作为雅连使用是有一
定依据的;而叶中的化学组分分析可见三者的差异
显著，可用于黄连属植物的化学组分与种间鉴别的
比较依据。3 种黄连根茎和根中的盐酸小檗碱含量
依次为黄连 ＞峨眉黄连 ＞三角叶黄连，与相关报道
有较大差异，推测小檗碱的含量可能与生长条件、生
长年限及测定的方法有关。
参考文献:
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药研究与实践，2005，19(3) :22 － 24．
收稿日期:2011 － 06 － 21
基金项目:“十一五”国家科技支撑计划(2006BAI08B03 － 04)
作者简介:徐冬艳(1984—) ，女，正攻读中药化学专业的硕士学位。
* 通信作者(Corresponding author) ，Email:liubinyn67@ 163． com
HPLC测定降脂宁胶囊中的红镰霉素龙胆二糖苷
徐冬艳，姜艳艳，刘 斌*
(北京中医药大学，北京 100102)
摘要:目的 采用 HPLC法测定降脂宁胶囊中红镰霉素龙胆二糖苷的含量。方法 采用 SunFire C18色谱柱(150 mm × 4． 6
mm，5 μm) ，柱温 35 ℃，流动相为乙腈 － 0． 1%磷酸溶液(18∶82) ，流速 1． 0 mL·min －1，检测波长 278 nm。结果 红镰霉素龙
胆二糖苷的平均回收率为 99． 42%，RSD = 2． 99%。结论 所用方法简便、准确，可用于降脂宁胶囊的质量控制。
关键词:降脂宁;红镰霉素龙胆二糖苷;含量测定
中图分类号:R917 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2012)02 － 0195 － 03