全 文 ：葫芦茶乙醇提取物对肝损伤小鼠的保护作用*
唐爱存1，陈兆霓2，梁韬2，卢秋玉3
(1．广西中医药大学第一附属医院药学部，南宁 530023;2．广西医科大学药学院药理教研室，南宁 530021;
3．广西壮族自治区人民医院药学部，南宁 530021)
摘 要 目的 研究葫芦茶乙醇提取物(TTOE)对四氯化碳(CCl4)诱导肝损伤小鼠的保护作用。方法 将昆明种
小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、联苯双酯滴丸组和葫芦茶乙醇提取物小、中、大剂量组，除正常对照组外。其他
各组建立化学性肝损伤模型，观察肝脏指数，脾脏指数和胸腺指数，检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨
基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)活性，血清清蛋白(Alb)含量以及总抗氧化能力(T-AOC) ，检测
肝组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性，并测定还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛
(MDA)和肝微粒体一氧化氮(NO)及肝微粒体细胞色素 P450(Cyt P450)含量。结果 与模型对照组比较，葫芦茶乙醇提
取物各剂量组肝脏指数、脾脏指数和胸腺指数降低，其中葫芦茶乙醇提取物大剂量组分别为 57．13±0．71，32．44±0．24，
27．78±0．16，与对照组比较均差异有统计学意义(P＜0．01) ;葫芦茶乙醇提取物各剂量组血清 ALT、AST、LDH和 ALP 活性
均显著降低，其中葫芦茶乙醇提取物大剂量组分别为 65．59±8．23，141．38±15．52，2 462．4±253．6，172．51±20．64，与对照组
比较均差异有统计学意义(P＜0．01) ;葫芦茶乙醇提取物各剂量组血清 Alb含量及 T-AOC水平升高肝微粒体 NO含量和
MDA含量降低，肝组织 SOD、GSH-PX活性、GSH含量及 Cyt P450含量增加(P＜0．05 或 P＜0．01)。结论 TTOE 对 CCl4所
致肝损伤小鼠具有保护作用，其机制可能与其抗氧自由基、降低肝微粒体 NO含量和抑制脂质过氧化作用有关。
关键词 葫芦茶乙醇提取物;损伤，肝;抗氧自由基;脂质过氧化作用
中图分类号 R286;R965 文献标识码 A 文章编号 1004－0781(2016)03－0242－04
DOI 10．3870 / j．issn．1004-0781．2016．03．006
Protective Effects of Ethanol Extracts of Tadehagi triquetrum on Acute Liver Injury
in Mice
TANG Aicun1，CHEN Zhaoni2，LIANG Tao2，LU Qiuyu3(1．Department of Pharmacy，the First Affiliated Hospi-
tal of Guangxi Traditional Chinese Medical University，Nanning 530023，China;2．Department of Pharmacology，
College of Pharmacy，Guangxi Medical University，Nanning 530021，China;3．Department of Pharmacy，People＇s
Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region，Nanning，530021，China)
ABSTRACT Objective To investigate the protective effects of ethanol extracts of Tadehagi triquetrum (TTOE)on car-
bon tetrachloride (CCl4)-induced acute liver injury in mice． Methods Kunming mice were randomly divided into six groups:
normal control group (NC group) ，model control group，bifendate dropping pill group，low-，medium-and high-dose TTOE groups．
The liver injury model was established by administration of CCl4 in all the groups except the NC group．The indexes of the liver，
spleen and thymus were obtained．The activities of serum ALT，AST，ALP，LDH，albumin and T-AOC were measured．The activi-
ties of SOD and GSH-PX and the contents of MDA，NO and GSH and Cyt P450 were also detected in hepatic tissues． Results
TTOE at different doses could obviously reduce the indexes of the liver，thymus and spleen，which were (57．13±0．71) ，(32．44±
0．24) ，and (27． 78 ± 0． 16) ，respectively，in high-dose TTOE group，and there were significant differences between the TTOE
groups and model control group (P＜0．01)． The activities of ALT，AST，ALP and LDH were obviously decreased in high-dose
TTOE groups，which were (65．59±8．23) ，(141．38±15．52) ，(2 462．4±253．6) ，(172．51±20．64) ，respectively，in the TTOE high-
dose group (P＜0．01)．The serum levels of Alb and T-AOC were obviously increased，the contents of NO and MDA significantly
decreased and the activities of SOD and GSH-PX and the contents of GSH Cyt P450 in liver tissues profoundly increased in TTOE
groups when compared with those in model control group (P＜0．05 or P＜0．01)． Conclusion TTOE could protect against acute
hepatic injury induced by CCl4 in mice，which may be associated with the decrease in the activities of liver enzymes，anti-oxide free
radical effect，decreased NO content and inhibited lipid peroxidation．
KEY WORDS Ethanol extracts of Tadehagi triquetrum;Injury，liver;Free radical scavenging effect;Lipid peroxidation
急性肝损伤是多种肝病发生发展的共同病理基
础，严重或持续损伤最终可能导致肝纤维化、肝硬化甚
至发展为肝癌［1］。葫芦茶为豆科植物葫芦茶［Tadeha-
gi triquetrum(L．)Ohashi］的枝叶。研究表明，葫芦茶
提取物具有破坏乙型肝炎病毒表面抗原(Hepatitis B
surface antigen，HBsAg)作用［2-4］，同时葫芦茶水提取液
对细菌和真菌都有一定的抑制作用。笔者在本实验中
通过四氯化碳(CCl4)诱导建立化学性肝损伤模型，从
降低转氨酶、抗氧自由基、抑制脂质过氧化以及催化药
物代谢关键酶 Cyt P450等方面探讨葫芦茶乙醇提取物
·242· Herald of Medicine Vol. 35 No. 3 March 2016
(ethanol extracts of Tadehagi triquetrum，TTOE)对肝损
伤小鼠的保护作用。
1 材料与方法
1．1 试药 葫芦茶购自广西万宝堂药业有限公司，批
号:20130909，经广西中医药大学田辉教授鉴定为豆科
植物葫芦茶［Tadehagi triquetrum(L．)Ohashi］。将葫芦
茶粉碎成粗粉，取适量干燥粗粉，加 10倍量 70%乙醇冷
浸 24 h，水浴回流提取 2 h，滤过得滤液，再加入 8倍量
70%乙醇，回流提取 2 h，滤过得滤液，第 3次加入 8倍量
70%乙醇，回流提取 1．5 h，滤过得滤液。合并 3次滤液，
于水浴冷却装置回收乙醇。收集提取液并减压浓缩，得
浓缩物，再分别配成所需浓度。四氯化碳(CCl4，广东合
山化工厂，分析纯，批号:20111109) ，联苯双酯滴丸(浙
江万邦药业有限公司，批号:110916)。丙氨酸氨基转移
酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒(批号:
20131121) ，碱性磷酸酶(ALP)、血清清蛋白(Alb)、总抗
氧化能力(total antioxide capacity，T-AOC)试剂盒(批
号:20131010) ，乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶
(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，
GSH-PX)、还原型谷胱甘肽(glutathione，GSH)、丙二醛
(MDA)、一氧化氮(nitric oxide，NO)试剂盒(批号:
20140110) ，均购自南京建成生物工程研究所。其余试
剂均为分析纯。
1．2 实验动物 SPF级昆明种小鼠，雌雄各半，体质量
(20±2)g，由广西医科大学实验动物中心提供。动物生
产许可证号:SCXK(桂)2009-0002，动物使用许可证号:
SYXK(桂)2009-0004。饲养条件:温度(25±2)℃，相对
湿度 75%，光照、黑暗各 12 h，普通饲料喂养。
1．3 仪器 WA-812 型微波提取仪;DZF-250 型微波
真空干燥箱;TDL-5型台式低速大容量离心机(上海安
亭科学仪器厂，离心半径:200 mm) ;722S 型可见分光
光度计(上海精密科学仪器有限公司) ;TGL-16G-A 型
高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂，离心半径:
220 mm) ;BP190S 型电子天平(Startorius 公司) ;FJ-
200型高速分散匀质机(上海标本模型厂)。
收稿日期 2014－12－06 修回日期 2015－01－22
基金项目 * 广西中医药大学校级科研项目(P2012092)
作者简介 唐爱存(1983－) ，男，广西全州人，主管中药师，
硕士，研究方向:中药民族药防治肝病。电话:0771－5840015，
E-mail:tangaicun321@ 126．com。
通信作者 卢秋玉(1984－) ，女，广西南宁人，主管药师，学
士，研究方向:医院药学。电话:0771－2186525，E-mail:luqiuyu
@ 126．com。
1．4 动物分组及造模 根据前期预实验结果，取昆明
种小鼠 60 只，采用随机数字表法分成 6 组，每组 10
只，即正常对照组、模型对照组、联苯双酯滴丸组(联
苯双酯滴丸，0． 15 g·kg－1) ，TTOE 小、中、大剂量组
(分别给予相当于生药 15，30，60 g·kg－1)。给药组小
鼠灌胃相应药物，0．02 mL·g－1，1 次·d－1，共14 d，正
常对照组和模型对照组灌胃等量 0．9%氯化钠溶液。
末次给药后 1 h，除正常对照组外，其余各组均皮下注
射 0．1% CCl4花生油，0．01 mL·g
－1，禁食不禁水 18 h，
取血及脏器测定指标［5］。
1．5 血清生化指标测定 小鼠摘眼球取血，分离血
清，按试剂盒说明书测定血清 ALT、AST、ALP 和 LDH
活性，检测血清 Alb含量及 T-AOC水平。
1．6 脏器指数的计算 取血后处死小鼠，快速剖腹取
出肝脏、脾脏和胸腺，用冰 0．9%氯化钠溶液漂洗去除积
血，滤纸拭净后称重并记录，计算肝脏、脾脏和胸腺指
数。脏器指数(%)= 脏器湿质量 /体质量×100%。
1．7 肝组织生化指标测定 处死小鼠，剖取肝脏并称
重，在肝脏右叶相同部位取肝组织约 0．1 g，精密称重
后放入置有 0．9%氯化钠溶液的匀浆器，冰浴中制备成
10%肝匀浆，分别按试剂盒说明书测定 SOD、GSH、
MDA及 GSH-Px，肝组织蛋白含量用考马斯亮兰法测
定。另外在肝脏左叶相同部位取部分肝组织，加入预
冷磷酸盐缓冲液(PBS) ，在冰浴中制备成肝匀浆液，先
以 8 000～ 10 000 r · min－1 转速离心 15 min，再
40 000 r·min－1离心 35 min，所得沉淀即为肝微粒体
(heptatomic rosome，HMS) ，加入冰浴匀浆介质制备成
混悬液，超声粉碎肝微粒体 15 min，按试剂盒说明测定
肝微粒 NO含量。
1．8 肝微粒体细胞色素 P450(Cyt P450)的测定 取上述
HMS混悬液 100 μL，在冰浴上加 PBS 2 mL混匀，紫外-
可见分光光度计于波长 400～500 nm做基线扫描，然后
向比色皿内通入适量一氧化碳，扫描得到 Cyt P450的吸
收曲线，记录 420 nm和 490 nm处吸光度值。按如下公
式计算 Cyt P450含量:Cyt P450 含量(nmol·mg
－1)=
(A420 nm－A490 nm)×1 000 /(91×蛋白质终浓度)
［6］。
1．9 统计学方法 应用 SPSS 19．0版统计软件进行统
计学处理，资料均采用均数±标准差(x±s)表示，多组
均数比较采用方差分析，组间差异显著性采用 t检验，
以 P＜0．05表示差异有统计学意义。
2 实验结果
2．1 TTOE 对小鼠血清 AST、ALT、LDH、ALP、Alb、T-
AOC的影响 与正常对照组比较，模型对照组血清
AST、ALT、LDH 和 ALP 活性升高，Alb 含量和 T-AOC
·342·医药导报 2016年 3月第 35卷第 3期
水平降低，提示 CCl4能诱导小鼠急性肝损伤;与模型
对照组比较，TTOE各剂量组小鼠血清 ALT、AST、LDH
和 ALP 活性均显著降低，血清 Alb含量及 T-AOC水平
增加(P＜0．01 或 P＜0．05) ，其中 TTOE 大剂量组最明
显，结果见表 1，2。
表 1 6组小鼠血清 AST、ALT和 LDH活性测定结果
Tab． 1 Determination results of the serum activity of
AST，ALT and LDH in six groups of mice
U·L－1，n= 10，x±s
组别
剂量 /
(g·kg－1)
AST ALT LDH
正常对照组 － 126．32±10．51 49．80±6．49 2 045．6±199．4
模型对照组 － 186．64±29．09* 1 116．28±11．34* 1 3 995．7±354．2* 1
联苯双酯 0．15 143．55±16．48* 2 67．14±9．01* 2 2 327．5±242．1* 2
滴丸组
TTOE
小剂量组 15 169．49±24．05* 3 90．08±12．04* 2 3 017．7±362．8* 2
中剂量组 30 158．37±20．27* 2 79．46±9．02* 2 2 857．6±301．4* 2
大剂量组 60 141．38±15．52* 2 65．59±8．23* 2 2 462．4±253．6* 2
F 36．582 26．470 47．521
P ＜0．05 ＜0．05 ＜0．05
与正常对照组比较，* 1P＜0．01;与模型对照组比较，* 2P＜
0．01，* 3P＜0．05
Compared with normal control group，* 1 P ＜ 0． 01;Compared
with model control group，* 2P＜0．01，* 3P＜0．05
表 2 6组小鼠血清 ALP、Alb和 T-AOC测定结果
Tab． 2 Determination results of the serum activity of
ALP，Alb and T-AOC in six groups of mice n= 10，x±s
组别
剂量 /
(g·kg－1)
ALP /
(U·L－1)
Alb /
(g·L－1)
T-AOC /
(U·mL－1)
正常对照组 － 156．27±22．94 0．85±0．11 2．07±0．02
模型对照组 － 300．83±46．57* 1 0．28±0．03* 1 0．98±0．10* 1
联苯双酯滴丸组 0．15 182．04±27．74* 2 0．62±0．08* 2 1．86±0．16* 2
TTOE
小剂量组 15 215．58±31．87* 3 0．40±0．05* 3 1．27±0．12* 3
中剂量组 30 190．14±28．43* 2 0．51±0．07* 2 1．59±0．17* 2
大剂量组 60 172．51±20．64* 2 0．63±0．09* 2 1．82±0．21* 2
F 29．013 1．004 2．385
P ＜0．05 ＜0．05 ＜0．05
与正常对照组比较，* 1P＜0．01;与模型对照组比较，* 2P＜
0．01，* 3P＜0．05
Compared with normal control group，* 1 P ＜ 0． 01;Compared
with model control group，* 2P＜0．01，* 3P＜0．05
2．2 TTOE 对小鼠脏器指数的影响 与正常对照组
比较，模型对照组肝脏指数、脾脏指数和胸腺指数均显
著升高(P＜0．01) ，提示 CCl4对脏器具有不同程度损
伤;与模型对照组比较，TTOE 中、大剂量组肝脏指数、
脾脏指数和胸腺指数均显著降低，小剂量组肝脏指数
降低，脾脏指数与胸腺指数无明显变化，结果见表 3。
表 3 6组小鼠肝脏指数、脾脏指数和胸腺指数测定结果
Tab． 3 Determination results of the indices of liver，
spleen and thymus in six groups of mice
x±s，n= 10，mg·(10 g)－1
组别
剂量 /
(g·kg－1)
肝脏指数 脾脏指数 胸腺指数
正常对照组 50．61±0．54 28．09±0．25 22．33±0．19
模型对照组 77．93±0．99* 1 50．82±0．46* 1 41．57±0．27* 1
联苯双酯滴丸组 0．15 56．38±0．67* 2 33．46±0．31* 2 27．41±0．31 * 2
TTOE
小剂量组 15 71．50±0．84* 3 48．73±0．35 40．33±0．23
中剂量组 30 63．71±0．76* 3 41．54±0．29* 3 30．57±0．22* 3
大剂量组 60 57．13±0．71* 2 32．44±0．24* 2 27．78±0．16* 2
F 9．996 7．843 6．654
P ＜0．05 ＜0．05 ＜0．05
与正常对照组比较，* 1P＜0．01;与模型对照组比较，* 2P＜
0．01，* 3P＜0．05
Compared with normal control group，* 1 P ＜ 0． 01;Compared
with model control group，* 2P＜0．01，* 3P＜0．05
2．3 TTOE对小鼠肝匀浆 SOD、GSH-Px、MDA、GSH的
影响 与正常对照组比较，模型对照组肝组织 MDA
含量升高，GSH 含量降低 SOD、GSH-Px 活性降低(P＜
0．01)。给药后，与模型组比较，TTOE 中、大剂量组
MDA含量均降低，肝组织 GSH 含量及 SOD、GSH-Px
活性增加，小剂量组 SOD 与 GSH－PX 活性增加(P＜
0．01或 P＜0．05) ，MDA与 GSH含量无明显变化。结果
见表 4。
2．4 TTOE对小鼠肝微粒体 Cyt P450和 NO 的影响
与正常对照组比较，模型对照组肝组织 NO 含量升高，
Cyt P450含量降低(P ＜ 0． 01)。与模型对照组比较，
TTOE各剂量组肝微粒体 NO 含量均降低，肝微粒体
CytP450含量明显提高(P＜0．01或 P＜0．05) ，见表 5。
3 讨论
肝细胞损伤时氧自由基随之增加，而机体产生清
除氧自由基酶，这种关键酶就是 SOD，因此其活性高
低是衡量机体抗氧化能力的重要因素［7］。GSH-Px 是
一种重要的催化过氧化氢分解的酶，对催化 GSH对过
氧化氢的还原反应具有很强的特异性，GSH-Px活性高
低直接影响 GSH解毒功能。NO是细胞重要的信使物
质，在肝损伤情况下，产生过量 NO，不仅没有清除 O2-
·442· Herald of Medicine Vol. 35 No. 3 March 2016
表 4 6组小鼠肝匀浆 SOD、MDA、GSH 和 GSH-Px 测定
结果
Tab．4 Determination results of SOD，MDA，GSH and
GSH-Px in liver homogenate of six groups of mice
x±s，n= 10
组别
剂量 /
(g·kg－1)
SOD /
(U·mg－1)
MDA /
(nmol·mg－1)
正常对照组 － 157．54±22．13 8．92±0．99
模型对照组 － 70．25±10．02* 1 21．04±2．83* 1
联苯双酯滴丸组 0．15 148．26±17．99* 2 13．25±1．38* 2
TTOE
小剂量组 15 96．28±16．31* 3 18．07±2．99
中剂量组 30 123．89±15．76* 2 15．77±1．98* 3
大剂量组 60 142．48±18．69* 2 13．66±1．82* 2
F 12．764 4．790
P ＜0．05 ＜0．05
组别
GSH /
(mg·g－1)
GSH-Px /
(U·mg－1)
正常对照组 70．02±10．25 598．85±81．25
模型对照组 32．31±5．03* 1 401．24±55．09* 1
联苯双酯滴丸组 58．75±9．14* 2 537．47±77．89* 2
TTOE
小剂量组 36．29±5．40 489．41±39．84* 3
中剂量组 49．93±6．45* 3 504．77±68．49* 3
大剂量组 60．04±7．98* 2 544．23±80．26* 2
F 10．534 28．996
P ＜0．05 ＜0．05
与正常对照组比较，* 1P＜0．01;与模型对照组比较，* 2P＜
0．01，* 3P＜0．05
Compared with normal control group，* 1 P ＜ 0． 01;Compared
with model control group，* 2P＜0．01，* 3P＜0．05
作用，而且迅速与之化合生成过氧硝酸根离子，而过氧
硝酸根离子与 H+之间可以发生电子重分布，生成比
O2-毒性更强的羟自由基，引起脂质过氧化，导致肝细
胞损伤。
细胞色素 P450酶系在生物体系列反应中发挥重要
作用，它能催化并降解一些诸如环境污染物等外源性
物质，包括动物对外源毒性物质的解毒过程，达到保护
生物有机体的目的。Cyt P450是催化药物代谢的主要
酶系，参与大多数药物和外来化学物质的代谢，在调节
机体与外界环境的相互作用以及保持机体稳态中起着
十分重要的作用。
本实验结果显示，与正常对照组小鼠比较，模型对
照组肝脏、胸腺和脾脏质量明显增加，提示 CCl4不同
程度地引起肝肿胀，激活小鼠机体免疫功能，给药后，
表 5 6组小鼠肝微粒体 Cyt P450和 NO测定结果
Tab．5 Determination results of Cyt P450 and NO in liver
microsome of six groups of mice x±s，n= 10
组别
剂量 /
(g·kg－1)
Cyt P450 /
(nmol·mg－1)
NO /
(μmol·g－1)
正常对照组 0．56±0．08 1．99±0．13
模型对照组 0．21±0．03* 1 4．44±0．55* 1
联苯双酯滴丸组 0．15 0．42±0．04* 2 2．48±0．17* 2
TTOE
小剂量组 15 0．35±0．05* 3 3．06±0．33* 3
中剂量组 30 0．40±0．06* 2 2．91±0．25* 2
大剂量组 60 0．48±0．07* 2 2．24±0．17* 2
F 1．973 3．604
P ＜0．05 ＜0．05
与空白对照组比较，* 1P＜0．01;与模型对照组比较，* 2P＜
0．01，* 3P＜0．05
Compared with normal control group，* 1 P ＜ 0． 01;Compared
with model control group，* 2P＜0．01，* 3P＜0．05
与模型对照组比较，TTOE 各剂量组肝脏指数、脾脏指
数和胸腺指数降低;血清 ALT、AST、LDH 和 ALP 活性
降低;血清 Alb含量及 T-AOC 水平增加;肝微粒体 NO
含量和 MDA 含量降低;肝组织 SOD、GSH-Px 活性和
GSH 含量以及 Cyt P450含量增加。其机制可能与
TTOE抑制脂质过氧化及抗氧自由基作用有关。
参考文献
［1］ KIM T Y，KIM D J．Acute-on-chronic liver failure［J］．Clin
Mol Hepatol，2013，19(4) :349－359．
［2］ 谢蔷，陈思东，张冠群．葫芦茶对 HbsAg 破坏的检测报告
［J］．广东医学院学报，1986，2(1) :78－80．
［3］ BOLL M，WEBER L W，BECKER E，et al．Mechanism of car-
bon tetrachloride-induced hepatotoxicity［J］． Z Naturforch，
2001，56(7－8) :649－659．
［4］ 张光海，王盟，刘亚楠．黄精提取物对急性肝损伤小鼠的
保护作用［J］．医药导报，2013，32(5) :593－595．
［5］ 伍小燕，唐爱存．含羞草总黄酮对四氯化碳致小鼠急性肝
损伤的保护作用［J］．实用临床医药杂志，2010，14(19) :
9－11．
［6］ 田维毅，王庆学，王文佳，等．葛根散对急性酒精性肝损伤
小鼠肝微粒体 CYP450 含量及 CYP2E1 活性的影响［J］．
中国实验方剂学杂志，2012，18(4) :183－186．
［7］ KRISHNAN S，HVASTKOVS E G，BAJRAMI B，et al．Hu-
man cyt P450 mediated metabolic toxicity of 4-(methylnitro-
samino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone(NNK)evaluated using
electrochemiluminescent arrays［J］． Mol Biosyst，2009，5
(2) :163－169．
·542·医药导报 2016年 3月第 35卷第 3期