全 文 ：西藏八角莲的组织培养条件筛选
兰小中1 　李春燕2　鲍隆友1
(1　西藏大学农牧学院动物科技系)
(2　西藏大学农牧学院资源环境系 ,西藏　林芝　860000)
摘　要:本文主要从消毒处理 、激素比例 、是否添加活性炭利组织培养材料选择 4个方面进行西藏八角
莲组织培养条件的筛选 ,最终筛选出:选用已经萌动的芽 ,消毒时采用 70%酒精消毒 1min 后 ,再用
0.1%升汞消毒 2min左右 ,6-BA和NAA的比例控制在1.8/0.2 ,同时加入 5S/L的活性炭为最佳培养条
件。
关键词:西藏八角莲　组织培养　筛选
中图分类号:Q949.95
　　西藏八角莲(DysosmatsayuensisYing)别名八角盘 、
山荷叫 、八角七 、八角金盘 、八两半 、叶下珠。多年生草
本 ,高 50 ～ 90cm;根状茎粗壮 ,横生 。茎高 35 ～ 55cm ,
不分枝 ,无毛 ,基部被棕褐色大鳞片 。茎生 2叶 ,对生 ,
纸质 ,圆形或近圆形 ,几为中心着生的质状 ,直径约
30cm ,叶两面被毛 ,上面尤密 ,叶缘密被毛;叶片 5 ～ 7
深裂 ,几达中部;裂片楔状矩圆形 , K8 ～ 12cm ,宽 4 ～
7cm ,顶端锐尖 ,边缘有针刺状细齿;浆果椭圆形或卵
形 ,2 ～ 4枚簇生于2叶相交义处 ,长约 3cm ,红色 ,宿存
柱头大而呈流梳状 ,果梗长 3 ～ 8cm 。花未见 。果期 7
月 ,7 ～ 9月采挖 。性温 、味苦辛 ,有毒 。西藏八角莲具
有清热解毒 、散结祛瘀 、活血舒筋 、祛风除湿 、水肿止
痛 ,治跌打损伤 、劳伤 、风湿痒痛 、热毒疔疮 、腰腿痛 、毒
蛇咬伤等功效 ,此外 ,由于西藏八角莲含有鬼臼毒素 ,
对治疗肺癌 、白血病以及其他的恶性肿瘤都有特殊疗
效 ,尤其是通过近年来的研究发现 ,鬼臼毒素在治疗尖
锐湿疣等方面还具有极为特殊的作用。随着研究的不
断深入 ,人们对西藏八角莲的资源需求也逐渐加大 ,导
致西藏八角莲目前处于令人十分担忧的濒危境地 ,因
此 ,我们十分有必要通过组织培养的方式来获得西藏
八角莲的无菌苗 ,既可以缓解西藏八角莲的资源压力 ,
同时还可以为西藏八角莲的现代生物技术研究提供理
论基础。
1　材料及方法
1.1　实验材料
西藏八角莲(DysosmatsayuensisYing)隶属小檗科
(Berberidaceae),鲜活外植体(已萌动芽 、未萌动芽)取
农牧学院自藏药材种植基地 ,该物种由鲍隆友副教授
鉴定 。
1.2　实验方法
1.2.1　外植体消毒 。选取西藏八角莲未萌动芽 、已萌
动芽 ,洗净 ,用白米水冲洗较 K时间(浸泡 30min),在
超净:工作台上分别用 70%的乙醇 、0.1%升汞进行消
毒处理 ,用无菌水冲洗 4 ～ 5次 ,放在无菌的培养皿中
备用 。
1.2.2　培养条件。者养温度为22 ～ 25℃,空气相对湿
度为 40%～ 60%, 10 ～ 12h 进行光照培养。基本培养
基为MS ,含糖量为 25g/L ～ 30g/L ,琼脂为5g/L ～ 6g/L ,
pH为 5.8。
1.2.3　筛选方案。本文主要对消毒处理方法 、激素配
比 、添加活性炭以及萌动芽利未萌动芽之间进行比较
实验。消毒处理主要考虑酒精和升汞的不同作用;激
素配比主要是 6—BA与NAA的比例分别为 1.8/0.2(0
号培养基)、1.8/0.6(1号)、2.0/0.6(2号):活性炭实验
主要针对 l号和 2号培养基进行;萌动芽和未萌动芽
之间的比较实验在相同处理方法的条件下进行。具体
方案见结果部分 。
2　结果与分析
2.1　不同消毒处理对萌动芽无菌苗诱导的影响
在组织培养中 ,对无菌苗获得必须对材料进行消
毒处理 ,消毒时间的确定要根据不同的外植体而定。
如果处理时间太长 ,就会杀死外植体组织;但如果时间
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西藏植保　　　　　　　　　　　　　　　　　　《西藏科技》2006年 3期(总第 155期)
太短 ,就达不到彻底灭菌的效果。因此 ,灭菌时间的选
择是极其重要的 ,它将直接关系到培养成功与否。实
验说明 ,合适的灭菌时间 ,不仅污染率低 ,生长也良好 ,
见表 1。
表 1 不同灭菌处理对萌动芽无菌苗的诱导
处理酒精(min)升汞(min)接种数(个)污染率(%)褐变牢(%)
1 1 2 50 40 26
2 1 3 50 36 50
3 1 4 50 28 90
4 2 1 50 80 30
5 3 1 50 50 60
6 4 1 50 30 98
　　从表 1看出 ,每个处理水平都有不同程度的褐变 ,
只是不同的消毒处理出现褐变的程度并不一样 ,培养
材料一旦出现褐变 ,最终将会导致植株的死亡 。从表
中还可以看出在相同的酒精处理时间上 ,升汞处理时
间以 2min效果最佳 ,其褐变率仅为 26%,但污染率相
对较高 ,达到40%;而在相同的升汞处理时间上 ,酒精
处理时间以4min的污染率相对较低(30%),但褐变率
却很高(98%)。因此 ,在西藏八角莲的消毒处理时 ,最
好用 70%的酒精消毒 1rain ,然后用 0.1%的升汞消毒
2min最好 。
2.2　培养基激素配比对未萌动芽无菌苗诱导的影响
植物组织培养成功与否 ,一方面取决于培养材料
本身的性质 ,另一方面取决于培养基的种类和成分 ,不
同的植物材料对培养基及其种类的要求不同。因此 ,
必须根据不同的植物材料来选择合适的培养基。经实
验发现 ,激素配比不同对植物的无菌苗诱导有很大的
差异 ,实验结果见表 2。
表 2 培养基激素配比对萌动芽无菌苗的诱导影响
培养基 接种数(个) 褐变率(%) 分化率(%)
0 50 0 90
1 50 32 70
2 50 78 54
　　通过表 2表明 ,在 3 种不同的培养基中由于加入
的6-BA和 NAA的比例不同 ,从而导致实验结果出现
明显的差异 ,其中以 0号培养基为最佳培养基 , 6-BA
和NAA的比例为 1.8/0.2 ,其他两种培养基由于激素
比例发生了变化 ,使得西藏八角莲外植体的分化率出
现极大差异 ,0号培养基分化最为明显 ,效果最佳 。
2.3　添加活性炭对西藏八角莲外植体诱导的影响
因为西藏八角莲其次生代谢产物中含有鬼臼毒
素 ,鬼臼毒素具有很强的毒性 ,为了防止西藏八角莲分
泌出鬼臼毒素而发生褐变将植株杀死 ,本实验采取在
培养基中添加活性炭以吸附其分泌出的鬼臼毒素 ,降
低植株死亡率 ,延长其生命周期 ,见表 3。
表 3 添加活性炭对西藏八角莲外植体诱导的影响
培养基 接种数(个) 分化率(%) 褐变率(%)
1 50 30 35
1+活性炭 50 20 10
2 50 25 72
2+活性炭 50 15 40
　　从表 3中可以看出 ,在无菌苗诱导过程中 ,遇到了
不同程度的褐变现象 ,添加活性炭可以吸附鬼臼毒素 ,
同时减小了外植体在培养过程中的褐变率。虽然减小
褐化可以延长外植体的生长周期 ,但不能抑制其分泌。
因此 ,为了进一步降低褐变率 ,在实验过程中还发现 ,
每隔 10天更换一次培养基 ,也是一种很好地解决办
法。
2.4　对不同外植体诱导的分化情况
在上述的研究中发现 ,制约西藏八角莲外植体生
K的关键因子是实验材料发生了褐变现象 ,针对这一
问题 ,我们对实验材料进行了对比实验 ,结果见表 4。
表 4 对不同外植体诱导的分化情况
外植体 升汞处理(min)接种数(个)萌动时间(d)分化率(%)
已萌动芽 10 50 6 80
未萌动芽 10 50 10 10
　　结果表明 ,升汞处理 10min(此处没有用酒精消
毒),已萌动芽分化率较高(80%),且生长较好 ,但未萌
动芽的分化率则很低(10%),所以 ,在进行西藏八角莲
的外植体诱导培养时最好选用萌动芽。
3　讨论
植物组织培养受多种因素的影响 ,每种植物都有
它自身的生长条件和营养需求 ,所以在进行植物组织
培养时要筛选合理的培养方案 ,以便提高组织培养的
效率 ,药用植物由于在培养过程中会产生一些次生代
谢产物 ,其组织培养的难度更大。通过我们的不同消
毒处理来看 ,酒精消毒的时间延长会导致外植体的褐
变率增加 ,但时间缩短又会由于消毒不彻底而致使污
染率增加 ,这主要是应为酒精对鲜活组织有一定的刺
激作用 ,甚至破坏外植体组织 ,但我们不能一味的使用
升汞进行消毒 ,因为升汞对环境的污染严重 ,我们可以
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将二者结合使用 ,同时还可以采用 NaCIO 进行消毒处
理 ,同样可以取得很好的效果 。
培养基中激素的比例不同 ,通常会使外植体发生
分化的效果产生极大的差异 ,这主要因为每种激素在
外植体生长的过程所起的作用各不相同 ,有的是诱导
根分化 ,有的是诱导芽分化 ,所以在进行外植体诱导
时 ,我们要根据实验目的选择不同的激素比例 。
加入活性炭主要起到吸附的作用 ,它并不会对外
植体的生长产生直接的积极作用 ,它可以通过吸附培
养基中的分泌物产生间接的作用。
已经萌动的芽进行诱导时其分化率明显高于未萌
动的芽 ,主要是因为萌动芽的生理活性明显要高于未
萌动的芽 ,并且萌动芽生活力旺盛分生能力强 ,因此 ,
在进行组织培养时最好选用已经萌动的芽。
综上所述 ,通过我们的实验证明:在进行西藏八角
莲的组织培养时 ,材料最好选用已经萌动的芽 ,消毒时
采用 70%酒精消毒 1min后 ,再用 0.1%升汞消毒 2min
左右 ,6-BA利 NAA的比例控制在 1.8/0.2 ,同时加入
5g/L的活性炭为最佳培养条件 。
参考文献
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lumhexandrum.Plant Cell Rep.9:382 ～ 385
编校　陈莎莎
(上接 51页)
3.2　加强鼠害防治队伍建设
西藏牧区由于缺乏相应专业的草原保护人才和和
各级技术人员 ,因此举办各级各类培训班 ,对技术人员
进行培训 ,增强对鼠害的认识 ,提高防治技术水平 ,逐
步建立—支整体素质较高的草原保护和建设队伍 。
3.3　合理 、正确使用化学农药
在采用化学毒饵灭鼠时 ,根据具体隋况 ,选择氯敌
鼠钠盐等高效低毒的农药 ,尽量减少其使用量和使用
面积 。结合生态 、C型肉毒素等生物防治措施 ,预防二
次中毒 ,保护和利用现有天敌 。
3.4　制定灭鼠规划 ,走综合防治之路
各级政府应提前计划和统筹 ,调拨药品和灭鼠工
具等物资 ,安排好人员。组织牧户 、牧民 ,有组织 、有纪
律 、统一进行灭鼠活动 。可以同时采用化学灭鼠和物
理灭鼠法 ,结合生物灭鼠法进行综合防治 。适合当地
的物理法是水淹法 。利用当地比较充足的水源条件 ,
在春季或夏季进行草地大面积漫灌 ,对灭杀高原鼠兔
有较好的效果。或以 C型肉毒梭菌毒素为毒饵 ,以青
稞 、胡萝卜为诱饵 ,在 4 ～ 5月进行生物灭鼠 ,有同样好
的效果。
3.5　改良草地
利用草原上的小溪和河流 ,建议在溪流的不同部
位修建水闸 ,建设必要的灌水设施 ,疏通河道 ,利用草
地天然的坡度 ,截水灌溉 。或建立科学合理的放牧制
度 ,给草地休养生息的机会。促进植被恢复过程 ,提高
草地盖度 ,破坏高原鼠兔生境 。同时 ,适当补播适应当
地的禾本科植物 ,如早熟禾属的早熟禾 SP 、藏北早熟
禾和冷地早熟禾等 ,羊茅属的弱须羊茅和羊茅 SP.等 ,
对改良草地 、恢复植被 、消灭鼠害 ,具有重要的意义 。
参考文献
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