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参考文献:
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(收稿日期:2010-08-26)
正交实验法提取网果酸模中大黄素
和大黄酚的工艺研究
杨振涛 ,陈　霞 ,李黎明 ,陈　纯 ,卡米拉 ,李维凤＊
(西安交通大学医学院 , 陕西 西安 710061)
摘要:目的　探索从网果酸模中提取大黄酚 、大黄素的最佳工
艺。方法　采用 L9(34)正交实验 , 以大黄素和大黄酚为检测指
标,考察提取时间、乙醇体积分数 、料液比3 个因素对提取率的影
响。HPLC采用 Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm , 5 μm);
流动相:甲醇-10 g· L-1磷酸(85∶15);流速:1.0 mL·min-1 ;
检测波长:254 nm。结果　优选出的最佳工艺条件为:乙醇体
积分数 80%,回流提取时间 90 min , 料液比 1∶7。结论　实
验将为网果酸模中大黄素 、大黄酚的提取提供技术参数。
关键词:网果酸模;大黄素;大黄酚;正交实验
doi:10.3969/ j.issn.1004-2407.2011.01.014
中图分类号:R284　　　文献标志码:A　　　
文章编号:1004-2407(2011)01-0024-02
基金项目:2009“国家级大学生创新性实验计划”项目(第 3批)
作者简介:杨振涛 ,男 , 2007 级制药工程专业本科生
＊通信作者:李维凤 ,女 , 讲师
　　蓼科植物网果酸模 Rumex dictyacorp us Boisset
Buhse在《本草经集注》[ 1] 中有记载 , 又名:须 、蕵芜
(《尔雅》),山大黄 、当药(《本草拾遗》),山羊蹄 、酸母
(《本草纲目》),牛耳大黄 、酸汤菜 、黄根根(《贵州民间
方药集》),酸姜 、酸不溜 、酸溜溜(《东北药植志》),酸
木通(《中国土农药志》), 鸡爪黄连(《浙江民间草
药》),田鸡脚 、水牛舌头 、大山七(《湖南药物志》)[ 2] 。
网果酸模生长于路边 、山坡及湿地 ,全国大部分地区
有分布;味酸 、性寒 ,具有清热 、利尿 、凉血 、杀虫的功
效;用于治疗热痢 、淋病 、小便不通 、吐血 、恶疮 、疥癣
等症 。其根含大黄酚苷 、鞣质和金丝桃苷等。酸模中
含有的蒽醌类物质外敷有消肿止痛的作用。酸模中
含有的蒽醌类物质大黄素 、大黄酚占很大的比例[ 3] 。
因此 ,对网果酸模中的有效成分进行研究 ,有极其重
要的理论意义和实际应用价值。笔者通过正交实验
设计考察了乙醇体积分数 、提取时间 、料液比对网果
酸模中总蒽醌和其中的大黄素 、大黄酚提取的影响 ,
为充分地开发和利用网果酸模提供实验依据。
1　仪器与试药
1.1　仪器　Shimadzu LC-2010A 型高效液相色谱
仪(日本岛津),包括 SPD-10AV P 型紫外检测器 , LC-
10AVP 输液泵;SHZ(Ⅲ)型循环水真空泵(河南巩
义市英峪予华仪器厂);RE-52型旋转蒸发仪(上海亚
荣生化仪器厂);HH-4型数显恒温水浴锅(国华电器
有限公司);SUIMADZU AUY220 型电子分析天平
(日本岛津);ANKE TDL-4型离心机(深圳市铭科化
工有限公司)。
1.2　试药　网果酸模根(采于西安交通大学医学院药
圃 ,由牛晓峰副教授鉴定);大黄素和大黄酚对照品(中
国药品生物制品检定所 ,批号 0756-200110和 110796-
200716);甲醇为色谱纯 ,水为超纯水 ,其他试剂均为
分析纯 。
2　方法与结果
2.1　因素水平的确定　影响网果酸模中蒽醌类物质
提取的因素主要为乙醇体积分数 、提取时间和提取的
料液比 ,选择相关的水平 ,见表 1。
表 1　正交实验法提取网果酸模中大黄素和
大黄酚因素与水平表
水平 因素
A ,乙醇体积分数/ % B,时间/min C ,料液比
1 70 30 1∶5
2 80 60 1∶6
3 90 90 1∶7
2.2　提取工艺　称取干燥后的网果酸模根 9 份 ,每
份 20 g ,按 1 ～ 9进行实验编号 。按 L9(34)正交实验
操作[ 4] , 100 ℃水浴回流提取 ,每组提取 2次 ,合并滤
液并定容。
2.3　大黄素 、大黄酚的 HPLC法测定
2.3.1　色谱条件[ 5-7] 　Kromasil C18色谱柱(150 mm×
4.6 mm ,5μm);柱温:室温;流动相:甲醇-10 g ·L-1磷
酸(85∶15);流速:1.0 mL·min-1 ;检测波长:254 nm;
理论板数按大黄素 、大黄酚计不低于 2 500。
2.3.2　溶液的制备　
对照品溶液　分别取适量的大黄素 、大黄酚对照
品 ,精密称定 ,加甲醇制成 0.13 g · L-1的大黄素对
照品溶液和 0.105 8 g ·L-1的大黄酚对照品溶液。
供试品溶液　精密吸取每组提取液 25 mL ,分别
加 80 mL·L -1的盐酸 25 mL ,超声 5 min;再加氯仿
25 mL ,加热回流 1 h ,冷却 。用适量氯仿提取 3次 ,
合并氯仿液 ,蒸去氯仿 ,分别用甲醇溶解残渣并定容
至 10 mL 。
2.3.3　结果　见表 2 ～ 表 6。
24 西北药学杂志　2011 年 2 月　第 26 卷　第 1 期
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表 2　正交实验法提取网果酸模中大黄素和大黄酚的结果
组别 A B C D(空白) 大黄素含量/mg· g -1
大黄酚含量
/mg· g -1
1 1 1 1 1 0.096 8 0.566 9
2 1 2 2 2 0.795 2 1.123 3
3 1 3 3 3 1.692 3 1.804 6
4 2 1 2 3 0.346 3 1.425 6
5 2 2 3 1 0.896 5 1.095 8
6 2 3 1 2 1.367 7 1.947 9
7 3 1 3 2 0.191 6 0.451 9
8 3 2 1 3 0.180 7 0.314 7
9 3 3 2 1 0.906 9 0.458 3
表 3　正交实验法提取网果酸模中大黄素的
结果和极差分析
A B C D
K 1 0.861 4 0.211 1 0.548 4 0.633 4
K 2 0.870 2 0.624 1 0.682 8 0.784 8
K 3 0.426 4 1.322 3 0.926 8 0.739 8
极差 R 0.443 8 1.110 7 0.378 4 0.151 4
表 4　正交实验法提取网果酸模中大黄酚的
结果和极差分析
A B C D
K 1 1.164 9 0.814 8 0.943 2 0.707 0
K 2 1.489 8 0.844 6 1.002 4 1.174 4
K 3 0.408 3 1.403 6 1.117 4 1.181 6
极差 R 1.081 5 0.588 8 0.174 3 0.474 6
表 5　以大黄素为指标的方差分析
因素　　　 偏差平方和 自由度 F比 F临界值 P值
A ,乙醇体积分数/ % 0.386 259 2 10.647 5 19.00
B ,时间/min　　　 1.891 376 2 52.137 2 19.00 <0.05
C ,料液比　　　　 0.220 786 2 6.086 1 19.00
误差　　　　 　 0.036 277 2
表 6　以大黄酚为指标的方差分析
因素 偏差平方和 自由度 F比 F临界值 P值
A ,乙醇体积分数/ %1.847 581 2 39.218 3 19.00
B ,时间/min　　　 0.660 054 2 14.010 9 19.00
C ,料液比　　　　 0.047 110 2 1.000 0 19.00 <0.05
D　　　　　　 　 0.443 761 2 9.414 7 19.00
误差　　　　　　 0.047 110 2
　　极差分析表明 , 3 个因素对提取率影响的顺序
为:以大黄素为评价指标 ,B>A>C ,以 A 2 B3C3 为最
佳;以大黄酚为评价指标:A>B>C ,以 A 2 B3C3 为最
佳。对上述指标进行方差分析 ,结果表明 ,以大黄素
为评价指标 ,B因素具有统计学意义 , A 和 C 因素的
影响均不具有统计学意义;以大黄酚为评价指标 ,A
因素具有统计学意义 ,B和 C 因素的影响均不具有统
计学意义 。经综合考虑 ,结合实际生产 ,选择最佳工
艺为 A 2B3C3 ,即药材提取 2 次 ,乙醇体积分数 80%,
回流提取时间 90 min ,料液比 1∶7。
3　讨论
分析可知 ,当以大黄素为主提取物时 ,乙醇体积
分数的影响无统计学意义;以大黄酚为主提取物时 ,
乙醇体积分数的影响有统计学意义 。综合考量分析
乙醇的最适体积分数为 80%。而提取时间对单个物
质的影响并不是很大 ,在实际的生产过程中 ,如需要
可以适当缩短。料液比对大黄素和大黄酚的影响均
无统计学意义 ,生产中也可以做适当的调整 ,选 1∶5
或 1∶6均可。
参考文献:
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(收稿日期:2010-05-25)
差示分光光度法测定决明子中 8种
必需氨基酸
周菊峰1 ,彭爱姣2(1.湘南学院化学与生命科学系 , 湖南
郴州 423000;2.湘南学院图书馆 , 湖南 郴州 423000)
摘要:目的　用差示分光光度法测定决明子中的 8 种必需氨
基酸。方法　在 pH 8 的缓冲溶液中 , 氨基酸与茚三酮生成蓝
紫色配合物 , 在 8 种必需氨基酸最大吸收波长处分别测定吸
光度 , 回归 ,求出氨基酸含量。结果　决明子中 8 种必需氨基
酸的含量为 0.127%～ 1.423%, 总含量为 3.36%。结论该法
简便 、准确 ,结果可靠 , 适用于中药等生物试样中常量特别是
含量较高的各类氨基酸的测定。
关键词:决明子;差示分光光度法;必需氨基酸
doi:10.3969/ j.issn.1004-2407.2011.01.015
中图分类号:R927.2　　　文献标志码:A　　　
文章编号:1004-2407(2011)01-0025-03
基金项目:湘南学院科研立项课题(编号:09Y028)
　　决明子为豆科植物小决明 Cassia tora L.及决明
Cassia Obtusi folia L.的干燥成熟种子[ 1] ,最早载于
《神农本草经》 。决明子主要含大黄酚 、大黄素 、黄酮 、
蛋白质 、糖类 、决明素 、人体必需的微量元素等 。现代
药理学研究表明 ,决明子具有降血压 、明目 、降血脂 、
保肝 、抑菌 、利尿 、抑制血小板聚集 、抗肿瘤 、减肥 、增
强免疫力及抗衰老等作用[ 2] ,无毒副作用。该药既可
作为方剂中的组成成分 ,亦可单味服用 ,是保健饮料
25西北药学杂志　2011 年 2 月　第 26 卷　第 1 期