全 文 ：RP-HPLC法对不同产地蝙蝠葛几种主要生物碱的测定
陈淑娟　肖　宙　潘锡平　林辛华＊　刘卓妍＊　曾繁典　胡崇家
(同济医科大学临床药理研究所　武汉　430030)
摘要　目的:研究不同产地蝙蝠葛几种主要生物碱在质与量上的区别。方法:采用有机溶剂提取生
药 , 应用 RP-HPLC 方法对东北产和咸宁产蝙蝠葛根茎中几种主要脂溶性生物碱进行定性定量测
定。结果:东北生药中含量最高的生物碱前 3 位依次是蝙蝠葛苏林碱 、 蝙蝠葛碱和 guattegaumerine
;而咸宁药材则为蝙蝠葛碱 、 蝙蝠葛诺林碱及蝙蝠葛新诺林碱 , 不含蝙蝠葛苏林碱。结论:不同产
地蝙蝠葛药材所含生物碱在质和量两方面均有显著差异。
关键词　蝙蝠葛　RP-HPLC 　蝙蝠葛碱　蝙蝠葛苏林碱　蝙蝠葛新诺林碱　蝙蝠葛诺林碱　
guattegaumerine
＊　武汉市药品检验所
　　防己科植物蝙蝠葛 (Menispermum dau-
ricum D C.)是中药北豆根的茎源植物 , 由
根茎总生物碱制成的北豆根片已载入中国药
典 , 用于咽喉炎的治疗。本单位近年发现 ,
其脂溶性总生物碱显示较好的抗心律失常作
用 , 具备开发前景[ 1] 。方立琼等[ 2] 曾应用薄
层扫描方法对我国北方地区出产的蝙蝠葛脂
溶性生物碱进行了测定 , 认为主成分均为蝙
蝠葛碱 (Dauricine)和蝙蝠葛苏林碱 (Dau-
risoline), 但二者相对含量因产地变化而有较
大变动 , 有的以前者为主 , 有的则以后者为
主。为更全面地了解蝙蝠葛碱脂溶性生物碱
的化学组成并考察湖北咸宁产蝙蝠葛的质量 ,
本文首次报道应用 RP-HPLC 对几种主要生
物碱进行定性和定量分析 , 并对一些次要生
物碱进行了定性及半定量分析 。
1　药品及试剂
1.1　药材及标准品　东北产蝙蝠葛　由辽宁
鞍山制药厂鉴定并提供;咸宁产蝙蝠葛由咸
宁制药厂鉴定并提供;蝙蝠葛碱 、 蝙蝠葛苏
林碱 、 蝙蝠葛诺林碱 (Daurinoline)、 蝙蝠葛
新诺林碱 (Dauricinoline)、 Guattegaumerine 、
蝙蝠葛新苛林碱 (Dauricicoline)均为本单位
化学室自蝙蝠葛中分离并鉴定 , 其中蝙蝠葛
碱对照品含量为99.8 %, 蝙蝠葛苏林碱对照
品含量为 99.0 %。其他对照品纯度均在
96 %以上。
1.2　试剂　乙腈 , 色谱纯 , 上海陆都公司生
产;水为石英亚沸高纯水;磷酸 , 优级纯 ,
武汉制药厂生产;三乙胺 , 分析纯 , 沈阳试
剂厂生产 。
2　仪器
Merck公司生产的 HPLC 仪 , 配有 Shi-
madzu 紫外检测器 , Shimadzu 数据处理仪 ,
Gilson自动进样器 。
3　分析条件的确定
3.1　色谱条件　色谱分析柱:Para-Nova C
-18柱 , 4.6 mm ×150 mm , 粒径 5 μm;流
动相∶乙腈-水 (20∶80 , 含 0.02 mol·L-1磷
酸 , 0.01 mol·L-1三乙胺);流速:1 mL·
min-1;检测波长:284 nm 。在本色谱条件
下 , 对照品与样品色谱图见图 1。
3.2　标准曲线的绘制　精密称取蝙蝠葛碱 、
蝙蝠葛苏林碱对照品各 25 mg , 置于 50 mL
容量瓶中 , 加流动相超声溶解并稀释至刻度 ,
摇匀 。分别精密量取 0.2 、 0.4 、 0.6 、 0.8 、
1.0 mL , 置具塞试管中 , 依次精密加入流动
·79·　19 (2), 1999 　
DOI :10.16155/j.0254-1793.1999.02.002
图 1　色谱图
A.对照品　B.东北产蝙蝠葛　C.咸宁产蝙蝠葛
1.蝙蝠葛苏林碱　2.蝙蝠葛碱　3.蝙蝠葛新苛林碱
4.guat tegaumerine　5.蝙蝠葛诺林碱
6.蝙蝠葛新诺林碱　7.N-去甲基蝙蝠葛碱
相 0.8 、 0.6 、 0.4 、 0.2 、 0.0 mL , 摇匀 , 即
得对照品溶液系列 。分别取上述溶液 20 μL
注入液相色谱仪 , 以峰面积为纵坐标 , 蝙蝠
葛碱 、 蝙蝠葛苏林碱浓度为横坐标 , 分别绘
制标准曲线 , 得回归方程分别为:
A =11059.46C-57446.40　r=0.9998
A =12658.41C-70424.81　r=0.9998
其线性范围均为 100 ～ 500 μg·mL-1 。
3.3　精密度考察　取同一份对照品溶液 , 连
续进样 5次 (每次 20 μL)进行测定。结果
RSD :蝙蝠葛碱为 3.1 %, 蝙蝠葛苏林碱为
2.8 %。
3.4　重现性考察　精密称取咸宁产及东北产
蝙蝠葛生药1.0 g , 置三角烧瓶中 , 加入氨水
1 mL 及氯仿 30 mL , 浸泡过夜 。再加入氯仿
50 mL , 水浴回流 3 h 。滤去残渣 , 滤过液用
0.1 mol·L-1盐酸 2×10 mL 提取 , 合并 2次
盐酸提取液 , 加浓氨水使 pH 至 8.5 ～ 9.0 ,
用氯仿 3×10 mL 再次提取 , 合并 3次提取
液 , 加入无水硫酸钠干燥。回收氯仿 , 残余
物加流动相使溶解 , 定容至 25 mL 容量瓶
中。分别进样 20 μL 。结果 RSD :东北产蝙
蝠葛碱为 1.8 %, 蝙蝠葛苏林碱为 3.0 %;
咸宁产蝙蝠葛碱为 3.3 %。
3.5　加样回收率的测定　分别取已知含量的
样品各约 0.5 g , 精密称定 , 各加入蝙蝠葛
碱 、 蝙蝠葛苏林碱对照品溶液 5 mL (相当于
含 2.5 mg), 按样品测定方法测定 , 计算回收
率。结果表明:东北产蝙蝠葛中蝙蝠葛碱回
收率±RSD 为 (99.8±0.7)%, 蝙蝠葛苏林
碱为 (100.1±2.7)%;咸宁产蝙蝠葛中蝙蝠
葛碱回收率±RSD 为 (102.5±1.7)%。
4　样品的测定
取生药一定量 , 按上述方法提取后 , 残
余物用流动相定容 、进样。测定结果见表 1。
表 1　样品测定结果 (n=3)。
样品来源 蝙蝠葛碱 蝙蝠葛苏林碱含量/mg·g -1 RSD/ %含量/mg·g -1 RSD/ %
东北产 4.993 0.90 8.763 0.86
咸宁产 10.74 0.78 -
　　东北产蝙蝠葛中 , 每 1 g 生药中含蝙蝠
葛碱 4.993 mg , 约占生药的 0.5 %, 含蝙蝠
葛苏林碱 8.763 mg , 约占 0.88 %;在咸宁
产蝙蝠葛中 , 每 1 g 生药中含蝙蝠葛碱 10.74
mg , 约占 1.07 %, 不含蝙蝠葛苏林碱或极
微量 。
5　几种次要生物碱的 HPLC法测定
取蝙蝠葛新苛林碱 、 Guat tegaumerine 、
蝙蝠葛诺林碱 、 蝙蝠葛新诺林碱 、 N -去甲
基蝙蝠葛碱一定量 , 分别用流动相溶解 , 进
样 , 记录保留时间 。以与对照品保留时间相
对应的蝙蝠葛样品色谱中各组分峰面积与总
峰面积比计算的相对含量见表 2。
6　讨论
本次实验通过摸索并结合文献中有关报
道 , 选择 C18硅胶柱为固定相 , 乙腈-水系
统为流动相 , 达到了满意的分离效果 。
本次实验结果表明 , 蝙蝠葛中主要生物
碱成分因产地的不同 , 不仅含量变化较大 ,
甚至会产生质的变化 。东北产蝙蝠葛中主要
成分为蝙蝠葛碱及蝙蝠葛苏林碱 , 其中蝙蝠
葛苏林碱的含量大于蝙蝠葛碱;而在咸宁产
蝙蝠葛中主要生物碱为蝙蝠葛碱 ,不含或极
·80·　 药物分析杂志　
表 2　不同产地蝙蝠葛中几种生物碱 HPLC
保留时间及其相对含量 (n=3)
名称 保留时间/min
相对含量/ %
东北产 咸宁产
蝙蝠葛碱 9.0 24.7 57.2
蝙蝠葛苏林碱 6.3 48.9 -
蝙蝠葛新苛林碱 3.5 2.9 -
Guat tegaumerine 4.6 5.8 -
蝙蝠葛诺林碱 5.0 - 7.0
蝙蝠葛新诺林碱 7.5 - 13.9
N -去甲基蝙蝠葛碱 11.8 2.8 6.9
合　　计 85.1 85.0
少含蝙蝠葛苏林碱。通过 RP-HPLC法 , 对
东北产及咸宁产蝙蝠葛中的几种次要生物碱
进行了鉴定 , 发现二者亦有较大差别 , 咸宁
产蝙蝠葛中主要的副碱成分为蝙蝠葛诺林碱
及蝙蝠葛新诺林碱 , 而东北产蝙蝠葛生药中
主要副碱为 guat teg aumerine 及蝙蝠葛新苛林
碱。
　　据文献记载 , 蝙蝠葛在我国分布较为广
泛 , 主产于东北及华北地区 。其蝙蝠葛酚性
总碱在临床上广泛应用 。本实验通过对蝙蝠
葛中几种生物碱的鉴定及主要生物碱的含量
测定 , 证明了其生药来源对其品质有较大影
响。因而 , 本项结果对于合理选用蝙蝠葛生
药提供了参考 。
上述生物碱均属尾-尾单氧桥双苄基异
喹啉类生物碱 , 结构十分近似 , 总含量占脂
溶性总碱的 85 %以上 , 因此 , 根据化学结构
与生物活性之间相关性的普遍规律 , 将蝙蝠
葛脂溶性总碱作为有效部位进行新药开发有
其化学上的合理性。目前 , 我们正在对各单
体的抗心律失常活性进行测试 , 以期证实它
们在药理活性方面的相似性 , 为该有效部位
的开发提供进一步的依据。
参考文献
1 　龚培力, 杜佐华 , 曾繁典等.蝙蝠葛酚性碱的抗心律
失常作用.中药新药与临床药理 , 1995 , 6 (3):13
2 　方立琼, 郭齐贤 , 郑力行等.中药山豆根与北豆根的
质量评价.上海医科大学学报 , 1992, 19 (2):124
(本文于 1998年 9月 10日修改回)
RP-HPLCAnalysis of Several Alkaloids of
Menispermum dauricum D C.from Different Districts
Chen Shujuan , Xiao Zhou , Pan Xiping , Lin Xinhua , Liu Zhuoyan , Zeng Fandian and Hu Chong jia
(Insti tu te of Clinical Pharmacology , Tongji Med ical Univer si ty , Wuhan 430030)
Abstract　Objective:To study the dif ference between tw o crude drugs of Menispermum dauricum
D C.f rom different dist ricts.Methods:RP -HPLC method w as used to determine the main li-
posoluble alkaloids.Results:The three highest components of northeast China crude drug are dau-
risolin , dauricine and guattegaumerine.Fo r Xianning material , the three major alkaloids are
dauricine , dauricinoline and daurinoline and no daurisoline w as determined.Conclusion:Consider-
able difference w as detected between the crude drugs f rom two different districts.
Key words　Menispermum dauricum D C., RP-HPLC , dauricine , daurisoline , dauricinoline ,
daurinoline , guat teg aumerine
·81·　19 (2), 1999