全 文 ：基金项目:国家民委(2004年度);西南民族大学教学改革项目
作者简介:尚远宏 ,男 ,蒙古族 ,正攻读民族药物研究专业的硕士学位。
＊通讯作者(Correspondent auther)
RP-HPLC测定扯根菜中槲皮素的含量
尚远宏 ,刘　圆＊ ,彭镰心 ,刘　超
(西南民族大学少数民族药物研究所 , 四川 成都 610041)
摘要:目的　测定扯根菜中槲皮素的含量。方法　采用 RP-HPLC 法 , Aichrom Bond-AQ C18柱(250 mm×4.6 mm , 5μm), 以甲
醇-0.2%磷酸(56∶44)为流动相 , 流速 1.1 ml·min-1 ,柱温 35℃,检测波长 370 nm。结果　槲皮素进样量在 0.0461 ～ 0.9220μg
范围内与峰面积呈很好的线性关系(r=0.9990),平均回收率为 97.6%, RSD =1.86%。6 批样品中槲皮素含量分别为 2.16、
2.25、2.21、2.26 、2.08 、2.05 mg·g-1。结论　所建方法简便 、准确 、重复性好 , 可用于扯根菜中槲皮素的含量测定。
关键词:槲皮素;扯根菜;RP-HPLC;含量测定
中图分类号:R917　 文献标识码:A 　 文章编号:1006-0103(2005)06-0559-02
Determination of quercetin content in Penthorum chinese Pursh.by RP-HPLC
SHANG Yuan-hong ,LIU Yuan＊ ,PENG Lian-xin ,LIU Chao
(Ethnic Pharmaceutical Institute of Southwest University for Nationalities , Chendu 610041 , China)
Abstract:OBJECTIVE　To establish a method to determine quercetin in Penthorum chinese Pursh..METHODS　An HPLC method was
adopted.The column was Aichrom Bond-AQ C18(250 mm×4.6 mm , 5 μm).The mobile phase consisted of methanol-0.2% phosphoric
acid(56∶44), with the flow rate of 1.1 ml·min-1 and the UV detector at 370 nm.RESULTS　The method displayed a good linearity for
quercetin within the range of 0.0461-0.922 μg(r=0.9990).The average recovery was 97.6%.The contents of six batches of sample were
2.16 , 2.25 , 2.21 , 2.26 , 2.08 and 2.05 mg·g-1 , respectively.CONCLUSION　This method is simple , accurate , reproducible and suitable for
the determination of quercetin in Penthorum chinese Pursh..
Key words:Quercetin;Penthorum chinese Pursh.;RP-HPLC;Determination
CLC number:R917 Document code:A Article ID:1006-0103(2005)06-0559-02
　　扯根菜为虎耳草科扯根菜属植物 Penthorum
chinese Pursh.的干燥全草 ,主含黄酮类成分 ,其化学
成分含有槲皮素(quercetin)[ 1] 。全草具有清热 、利
湿 、解毒 、降酶 、保肝 、退黄 、健脾[ 2] 等功效 。槲皮素
的含量测定可采用 HPLC 法[ 3] ,但测定扯根菜中槲
皮素含量的报道较少。因此 ,采用 RP -HPLC 测定
扯根菜中槲皮素的含量 ,可作为控制扯根菜质量的
方法 。
1　实验部分
1.1　仪器与试剂
美国 SSI 液相色谱仪(浙江大学 N2000 色谱工
作站);Sartorius BP211D电子天平(朝阳市吉雅实业
有限公司);JL-180DTH 超声波清洗器(上海波龙电
子仪器有限公司)。槲皮素对照品(中国药品生物制
品检定所 , 0081-9905);甲醇为色谱纯;水为重蒸
水 ,其余试剂为分析纯。
1.2　色谱柱的选择和系统适用性试验
用Aichrom Bond-AQ C18色谱柱(250 mm ×4.6
mm ,5μm),以甲醇 -0.2%磷酸(56∶44)为流动相 ,
流速1.1 ml·min-1 ,柱温35℃,检测波长 370 nm 。在
此色谱条件下 ,槲皮素峰与其他峰达到基线分离 ,峰
形对称 ,与相邻峰分离度大于 1.5 ,按槲皮素峰计
算 ,理论板数均大于 3×103。其色谱图见图 1。
图 1　槲皮素对照品(A)、扯根菜样品(B)和空白溶液(C)的色谱图
Fig 1　HPLC chromatograms of quercetin control solution(A), sample
solution(B)and blank solution(C)
1.3　提取溶剂的选择
取混匀后的扯根菜 0.6 g(2 份),精密称定 ,分
别置两个 100 ml锥形瓶中 ,一瓶加入 2.3%甲醇 40
ml ,另一瓶中加入甲醇-25%盐酸(4∶1)40 ml ,分别
置水浴上回流 1 h ,冷却至室温 ,转入 50 ml的量瓶
华西药学杂志
W C J · P S 　2005 , 20(6):559～ 560　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
DOI :10.13375/j.cnki.wcjps.2005.06.038
中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,用微孔滤膜(0.45 μm)滤
过 ,按“1.2”项色谱条件测定 ,并计算含量。结果显
示:以甲醇-25%盐酸(4∶1)作为提取溶剂测得的槲
皮素含量(0.224%)较用 2.3%甲醇作提取溶剂测得
的槲皮素含量(0.208%)高。故选用甲醇 -25%盐
酸(4∶1)作为提取溶剂。
1.4　提取方法的考察
精密称取研细后的扯根菜 0.6 g(3份),分别置
3个 100 ml锥形瓶中 ,加提取溶剂 40 ml ,分别超声 、
回流和索氏提取 1 h ,冷却至室温 ,转入 50 ml 量瓶
中 ,用甲醇稀释定容 ,摇匀 ,微孔滤膜(0.45 μm)滤
过 ,再按“1.2”项色谱条件测定。超声提取的槲皮素
含量为 0.142%,加热回流的为 0.225%,索氏提取
的为 0.210%。因此 ,选加热回流作为提取方法。
1.5　溶液的制备
精密称取槲皮素对照品适量 ,用甲醇溶解制成
0.0268 mg·ml-1的溶液 ,作为对照品溶液 。
精密称取扯根菜样品 0.6 g ,置 100 ml锥形瓶
中 ,加提取溶剂 40 ml ,置水浴上回流1 h ,冷却至室
温 ,转入 50 ml量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,用
0.45 μm微孔滤膜滤过 ,即得供试品溶液。同时 ,按
供试品溶液的制备方法制得缺扯根菜的空白溶液 。
1.6　含量测定
精密吸取对照品溶液和供试品溶液 ,注入液相
色谱仪 ,记录峰面积 ,以外标法计算含量 。6批样品
中槲皮素的平均含量分别为 2.16 、2.25 、2.21 、2.26 、
2.08 、2.05 mg·g-1(n=2)。
1.7　方法学考察
1.7.1　线性范围　精取槲皮素对照品适量 ,加甲醇
制成不同浓度的对照品溶液 ,摇匀 ,作为对照品溶
液。分别按“1.2”项色谱条件 , 精密进样 0.0461 、
0.0922 、0.1844 、0.3688 、0.4610 、0.922 μg ,测定峰面
积。以峰面积为纵坐标 ,进样量为横坐标 ,进行线性
回归 ,得回归方程为:Y =2.023×106X -3.279×104
(r=0.9990 , n =6), 槲皮素进样量在 0.0461 ～
0.9220μg范围内与峰面积的线性关系良好 。
1.7.2　精密度试验　精吸对照品溶液(0.0268 mg·
ml
-1)10μl注入液相色谱仪 ,连续进样 5次 ,记录峰
面积 , 其峰面积平均值为 5.8987 ×105 , RSD =
0.79%,表明进样精密度良好。
1.7.3　重复性试验　取扯根菜样品 0.6 g ,共 5份 ,
精密称定 ,按“1.6”项下方法进行测定 ,结果含量平
均值为 0.228%, RSD =1.57%,表明分析方法精密
度良好 。
1.7.4　加样回收实验　精密称取已知含量的样品
定量 ,精密加入槲皮素对照品配制成供试品溶液进
行测定 ,计算回收率。结果见表 1。
表 1　加样回收的测定结果(n=6)
Table 1　Results of recovery test(n=6)
Original/mg Added/mg Detected/mg Recovery% X/ % RSD/ %
0.6341 0.5464 1.1794 99.8 97.6 1.86
0.6313 0.5464 1.1749 99.5
0.6249 0.6830 1.2764 95.4
0.6291 0.6830 1.2888 96.6
0.6386 0.8196 1.4416 98.0
0.6197 0.8196 1.4038 96.2
1.7.5　稳定性试验　供试品溶液及对照品溶液在
室温条件下 ,于配制后 0 、2 、4 、8 、16 h进样 ,对照品溶
液峰面积 RSD=0.89%(n =5),供试品溶液峰面积
RSD=1.14%(n =5)。结果表明 ,供试品溶液及对
照品溶液在配制后 16 h基本稳定。
2　讨论
文中建立的方法简便 、准确 、重复性好 ,适用于
扯根菜中槲皮素的含量测定 。曾分别考察了流动相
为甲醇-0.2%磷酸(56∶44)、甲醇-0.4%磷酸(50∶
50)[ 4] ;流速为 1.1 ml·min-1;柱温 35℃;以 Aichrom
Bond-AQ C18柱(250 mm×4.6 mm , 5 μm)为分析柱
的分离效果 。结果表明 ,采用文中的流动相[甲醇-
0.2%磷酸(56∶44)] ,扯根菜中槲皮素峰可达基线分
离 ,且峰形对称 、分离度较好 。
参考文献:
[ 1] 　何述敏 ,李敏 ,吴众 ,等.扯根菜的研究进展[ J] .中草药 , 2002 ,
33(6):附 5
[ 2] 　四川中药志协作编写组.四川中药志[ M] .第一卷.四川:四川
人民出版社 , 1979.166
[ 3] 　兰轲 ,蒋学华 ,任静.醋柳黄酮缓释胶囊中总黄酮及槲皮素 、异
鼠李素的含量测定[ J] .华西药学杂志 , 2004.19(4):41
[ 4] 　 罗杰 ,贝伟剑 ,徐腾 ,等.脑心清片质量标准的研究[ J] .中国新
药杂志 , 2004 ,13(7):625
收稿日期:2005-04
560　　　 华 西 药 学 杂 志 第 20卷