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薄层色谱斑点面积法测定天山大黄中大黄素的含量

库尔班江 1，阿提开木 2
（1.伊犁师范学院 化学与生物科学学院，新疆 伊宁 835000；2.伊犁州师范学校 化学系，新疆 伊宁 835000）

摘 要：采用薄层色谱斑点面积法测定了天山大黄中大黄素的含量. 样品以乙醇为溶剂，利
用索氏提取器提取；在硅胶 G 薄层板上点样，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸（15∶2∶0.98）为展开
剂展开. 在紫外 365nm 下检测斑点位置，Rf＝0.54，测薄层色谱斑点面积. 根据点样量与斑点面
积进行线性回归，其回归方程为 Y＝35.179X＋17.65，相关系数 R＝0.9998；测定出样品中大黄
素的含量为 1.65％、RSD＝0.68％、（n＝4）. 此法所用仪器操作简便、快速、重现性好，为基层
单位对该药材的质量评估和药物质量检控提供了快捷方法和依据.
关键词：天山大黄；大黄素；含量测定；薄层色谱斑点面积法
中图分类号：O658 文献标识码：A 文章编号：1673—999X（2008）01—0021—04

大黄（Rheum officinale）为蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatum L.）、唐古特大黄（Rheum tanguticum
Maxim.ex Balf.）或药用大黄（Rheum officinale Baill.）的干燥根及根茎. 大黄（Rheum officinale）为多年生
高大草本，多生于排水良好的山地，分布在我国湖北、四川、陕西、云南等地区，有“马蹄大黄”、“四川
大黄”、“南大黄”之称. 据《药典》记载，大黄的原植物有 3种：分为掌叶大黄（Rheum palmatum L.）、唐
古特大黄（Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.）或药用大黄（Rheum officinale Baill.）. 前两者称“北大黄”、
后一种称“南大黄”. 为常见中药材，被称为中药“四大金刚”之一. 美国学者诺尔曼·泰勒在《改变世
界的植物》一书中，将大黄列为“有全球影响”的十几种传统药物之一. 特别是在治疗现代疑难病症方面，
大黄显示了非凡功能，有利胆止咳、泄火解毒、行淤通经、抗癌、外敷可治烫伤等药理作用. 在其临床应
用方面有治疗高脂血症、“超重”症、肝脾虚综合症、急性肝炎、急性糜烂性胃炎、急性菌痢、急性肠炎
等，其效果显著[1，2，3].
天山大黄（Rheum wittrockii Lundstr.），又称新疆大黄，系蓼科大黄属植物天山大黄的干燥根和根茎，
属药用大黄，主要生长在天山山脉，其资源较为丰富，为新疆特有的大黄品种，主要有效成分有大黄素
（emodin）、大黄酚（chrysophanol）、大黄酸（rhein）、大黄素甲醚（physcion）、芦荟大黄素（aloeemodin）
等[4，5]. 维吾尔族民间用于治疗血小板减少症、闭经、痢疾，通淋不利等症. 有关天山大黄化学成分的研究
及含量测定已有报道[6，7]. 但尚未见适合于仪器设备条件有限的一般基层单位的快速简易测定方法. 薄层色
谱斑点面积法测定天山大黄中大黄素的含量，建立了不需要贵重仪器的快速简易测定方法. 此法所用仪器
操作简便、快速、重现性好，为基层单位对该药材的质量评估和药物质量检控提供了快捷方法和依据.
1 仪器与试样
1.1 仪器 ZF-1 型三用紫外分光光度仪（上海顾村电光仪器厂）、分析天平、定量点样毛细管（美国
Drumnond厂）、索氏提取器、烘箱、植物粉碎机.
1.2 样品与试剂 天山大黄（2005 年 9 月采自于新疆伊犁察布查尔县，并通过伊犁师范学院化学与生物
科学学院有关专家鉴定为天山大黄）；大黄素对照品（中国药品生物制品鉴定所）、硅胶 G（青岛海洋化工
2008年 3月 伊犁师范学院学报（自然科学版） Mar.2008
第 1期 Journal of Yili Normal University（Natural Science Edition） No.1
收稿日期：2007－04－08
作者简介：库尔班江·巴拉提（1962—），男（维吾尔族），副教授，研究方向为中草药及天然药物研究.
22 伊犁师范学院学报（自然科学版） 2008年

厂生产）、羧甲基纤维素钠；乙醇（95%）、甲苯（AR）、乙酸乙酯（AR）、甲酸（AR）；其余试剂均为分
析纯.
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 样品溶液的制备 取干燥的天山大黄适量，用植物粉碎机粉碎，精密称取 0.3000g，置于索氏提取
器中，加入 95%乙醇提取至提取液无色为止（约 6h）. 浓缩至约 5mL，移至 10mL容量瓶中，加 95%乙醇
稀释至刻度，即得浓度为 30mg/mL的天山大黄样品溶液，备用.
2.2 对照品溶液的制备
2.2.1 对照品溶液标准的制备 精密称取大黄素对照品 1.4mg，置于 5mL容量瓶中，加入 95%乙醇溶解，
并稀释至刻度，即得浓度为 0.28mg/mL对照品溶液标准，备用.
2.2.2 对照品稀释标准溶液的制备 精密吸取浓度为 0.28mg/mL 的对照品标准溶液 1.0mL，放入 5mL 的
容量瓶中，加 95%乙醇稀释至刻度，制成浓度为 0.056mg/mL的对照品稀释标准溶液，备用.
2.3 薄层色谱与检测条件
2.3.1 薄层板的制备 取硅胶 G适量，加入 0.3%羧甲基纤维素钠溶液适量，慢慢搅动均匀至糊状. 将其均
匀的涂布在洗净干燥的玻璃板（规格 3×8cm，10×12cm）上，在室温下自然晾干，将晾干后的薄层板置
于烘箱内 105℃活化 30min，厚约为 0.25mm，置于干燥器内，备用.
2.3.2 展开条件 经不同展开系统进行展开探索，得出展开剂采用甲苯—乙酸乙酯—甲酸（15∶2∶0.98）
进行上行展开，取出，室温晾干，在紫外 365nm下检视大黄素的斑点位置，其 Rf﹦0.54. 见图-1.

1.大黄素对照品 2. 天山大黄
图-1 供试品及大黄素 TLC
2.4 测定原理
将供试品和对照品溶液定量点于同一块薄层板上，用展开系统展开，取出、晾干，在紫外 365nm下检
视大黄素的斑点位置，用铅笔轻轻描出斑点后，将其斑点移至标准坐标纸上，扫描斑点面积. 根据供试品
和对照品斑点面积，用以下公式计算其含量.
logm＝logms－ s
d s
A A
A A
⎡ ⎤−⎢ ⎥⎢ ⎥−⎣ ⎦
logd
其中：A——未知浓度样品的相对斑点面积；AS——标准样品的相对斑点面积；Ad——标准样品稀释一定
倍数后的相对斑点面积；d——标准样品稀释倍数的倒数；ms——标准样品质量；m——所求未知物质量；
则百分含量为：所求未知物质量
样品的总质量
×100%= m
m总
×100%
2.5 标准曲线的绘制（线性关系的考察）
精密吸取大黄素对照品标准溶液 1µL、3µL、5µL、7µL、9µL，点于同一块薄层板上，以展开系统展
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开，取出，晾干后，用紫外检测仪上在 365nm下观察大黄素的荧光斑点，描出斑点面积，其斑点移至标准
坐标纸上. 以点样量为（标准品浓度）为横坐标，斑点面积为纵坐标，进行线性回归. 结果：得到回归方
程为 Y＝35.179X＋17.65；R=0.9998；结果表明待测物的点样量在 0.28µg—2.52µg的范围内呈现良好的线
性关系，见图-2.
表-1 大黄素点样量与斑点面积
点样体积 1µL 3µL 5µL 7µL 9µL
点样量（µg） 0.28 0.84 1.4 1.96 2.52
斑点面积(mm2） 27 48 65 87 105
0
20
40
60
80
100
120
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3
对照品点样量(μg)
斑
点
面
积
(A
)

图-2 大黄素标准品的回归曲线
2.6 精密度
分别取 4支定量点样毛细管，各精密吸取对照品标准溶液 1µL，在同一薄层板上分别点 4个点，以展
开系统展开；取出薄层板；晾干后，在紫外 365nm下检视大黄素的荧光斑点，描出斑点面积. 结果：得斑
点面积依次为：34mm2、35mm2、35mm2、36mm2，斑点平均面积为 35mm2，RSD＝0.82%，（n=4）.
2.7 稳定性
精密吸取样品溶液 1µL，点于同一薄层板上，以展开系统展开，取出，晾干，在紫外 365nm下每隔 1
小时检视大黄素的荧光斑点一次；结果表明：在 12小时内大黄素的斑点面积稳定.
2.8 重现性
精密吸取大黄素标准溶液 1µL，分别点于 6块薄层板上，展开，取出薄层板，晾干后，在紫外 365nm
下检视荧光斑点，描出斑点面积. 结果：斑点面积分别为 28mm2、27mm2、27mm2、26mm2、27mm2、27mm2，
斑点平均面积为 27mm2，RSD＝0.63%，（n＝6）.
2.9 样品含量测定
精密吸取浓度为 0.28mg/mL的大黄素对照品溶液 1µL、2µL、3µL、4µL、5µL，稀释 5倍后的对照品
溶液（C＝0.056mg/mL）1µL和样品溶液（C＝30mg/mL）1µL，分别点于同一块薄层板上，各 4个点，以
甲苯—乙酸乙酯—甲酸（15∶2∶0.98）进行上行展开，取出，晾干，用 ZF-1型三用紫外检测仪在 365nm
紫外灯下检测荧光斑点，描出斑点面积，其斑点移至标准坐标纸上，测量斑点面积，用前所述 2.4 中公式
算出天山大黄中大黄素的含量.
表-2 天山大黄中大黄素的含量
序号 1 2 3 4
斑点面积（mm2） 34 35 35 36
含量（％） 1.54% 1.64% 1.64% 1.76%

x＝1.645％，RSD＝0.68％，（n=4）

2.10 加样回收率的测定
24 伊犁师范学院学报（自然科学版） 2008年

精密称取样品粉末5份，分别加葛根素标准溶液1mL，按2.1样品溶液的制备同法处理，分别精密吸取
其溶液2µL，点于同一板上各5个点，展开，取出，晾干，扫描，测定，计算平均回收率为99.32%，RSD=1.36%
（n=5），结果见表-3.
表-3 大黄素加样回收率
序号 样品大黄素量（µg） 加入大黄素量（µg） 测得量（µg） 回收率（%）
1 242.25 280 219.49 98.76
2 248.1 280 226.23 99.18
3 252.75 280 235.17 101.04
4 257.3 280 234.10 98.65
5 263.36 280 242.22 99.53
3 结果与讨论
3.1 由于天山大黄由多种成分组成，故可在薄层板上观察到多个斑点，经过对展开体系的反复试验探
索，结果表明天山大黄各组分在展开剂甲苯－乙酸乙酯－甲酸（15∶2∶0.98）下，可使大黄素斑点与上下
其他成分斑点的距离较远，其清晰完善，无拖尾，分离效果最佳.
3.2 经实验，大黄素在乙醇中溶解较好，且乙醇价格便宜、无毒、利于环保，故采用 95%的乙醇为溶
剂在索氏提取器进行提取，提取时间短，提取效果好.
3.3 天山大黄中主要含有蒽醌类化合物，大黄素为主要成分，本文采用薄层色谱斑点面积法测定了大
黄素的含量，建立了不需要贵重仪器的快速简易测定方法. 此法所用仪器操作简便、快速、重现性好，为
基层单位对该药材的质量评估和药物质量检控提供了快捷方法和依据.
参考文献：
[1]杨云，冯卫生，主编. 中药化学成分提取分离手册[M]. 北京:中国中医药出版社，1998.18-22.
[2]肖崇厚. 中药化学[M]. 上海：上海科学技术出版社，1987.151.
[3]国家药典委员会．中华人民共和国药典F[S]·一部．北京：化学工业出版社，2000.l8-l9．
[4]丁敬敏，赵连俊，主编. 有机分析[M]. 北京；化学工业出版社，2004.152-165.
[5]张炬，常军民，刘 涛.HPLC法测定天山大黄中大黄酚和大黄素含量[J]. 新疆医科大学学报，2003，
26（6）：603
[6]库尔班江，张尊新. 高效薄层双波长扫描法测定牛黄解毒丸中大黄素的含量[J]. 西北药学杂志，
2000（5）：198-199
[7]敏德，徐丽萍，张治针，等.天山大黄的化学成分研究（1）[J].中国中药杂志，1998，23（7）：
116-118.
[8]中国医药科学院药物研究所，等编.中药志[M].北京：人民卫生出版社，1979.441.
[责任编辑：何苗苗]
The Method of the Content of Emodin in Rheum Wittrockii Lundstr. By TLC Spot Planimetry
Korbanjhon1, Atikem2
(1.School of Biochemistry and Environmental Science, Yili Normal University, Yining 835000, Xinjiang; 2.Department of Chemistry,
Yili Teachers School, Yining 835000, Xinjiang)
Abtract: In this paper, the content of emodin in Rheum wittrockii Lundstr. was determined with TLC spot
planimetry. The sample was extracted in ethanol with Soxhlets apparatus; Used silgel G-thin layer plate as the
stationary phase, toluene-ethyl acetate-formic acid (15∶2∶0.98) as the mobil phase. The spot was detected at
365nm ultraviolet, with the Rf of 0.54, then the scope was detected. Linear regression was done between the
quatity of the sample and the spot scope, with the equation of Y=35.179X+17.65, relevant factor R=0.9998. As a
result, the content of emodin in Rheum wittrockii Lundstr is 1.65％ and RSD 0.68％、（n＝4）.This method has
the advantage of convenient, fast, good recurrence, which provides a simple method and a reliable proof to quality
evaluation and examination for the primary level medication department.
Key words: Rheum wittrockii Lundstr; emodin; content determination; TLC spot planimetry