全 文 ：［收稿日期］ 20110128(001)
［第一作者］ 王金香，硕士，副教授，研究方向:药学质量标准与
药学 专 业 教 学、药 学 研 究 与 管 理，Tel:020-
28854915，E-mail:wangjx@ gdyzy． edu． cn
火炭母药材 HPLC指纹图谱研究
王金香
(广东食品药品职业学院，广州 510520)
［摘要］ 目的:建立火炭母药材的 HPLC 指纹图谱分析方法，为火炭母药材质量评价提供参考依据。方法:色谱柱 Platisil
ODS C18(4. 6 mm × 250 mn，5 μm) ，流动相乙腈-0. 05% 磷酸溶液，梯度洗脱进行色谱分离;洗脱时间 60 min，流速
1. 0 mL·min － 1，检测波长 360 nm。结果:确定 17 个共有色谱峰为特征峰构成火炭母药材 HPLC 指纹图谱，相似度评价结果表
明，各产地火炭母药材相似度均在 0. 90 以上。结论:所用方法准确可靠，所得指纹图谱共有模式可作为火炭母药材质量控制
的依据。
［关键词］ 火炭母;高效液相色谱;指纹图谱
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2011)15-0096-03
Study on HPLC-Fingerprint of Polygonum chinense L．
WANG Jin-xiang
(Guangdong Food and Drug Vocational College，Guangzhou 510520，China)
［Abstract］ Objective:To establish the HPLC fingerprint analysis methods for Polygonum chinense L and to
provide the reference for quality evaluation of Polygonum chinense L． Method:Chromatographic separation was
performed on a Platisil ODS C18 column (4. 6 mm × 250 mn，5 μm)with acetonitrile-0. 05% phosphoric acid as a
mobile phase in gradient elution for 60min． The flow rate was 1. 0 mL·min － 1，detected at wavelength of 360 nm．
Result:Seventeen chromatographic peaks were determined for characteristic peak constituted a HPLC fingerprint of
P． chinense Similarity evaluation results showed that all P． chinense were above 0. 90 in similarity． Conclusion:
The method is accurate and reliable;the fingerprints can be used for P． chinense quality control．
［Key words］ Polygonum chinense L．;HPLC，fingerprint
中药火炭母为蓼科植物火炭母草(Polygonum
chinense L．)的地上部分，在广东地区应用广泛，本
品性酸、甘、寒，归肝、脾经，具有清热利湿、凉血解
毒、平肝明目、活血舒筋等功效，用于痢疾，泄泻，咽
喉肿痛，肺热咳嗽，肝炎等，是常用的民间药。现代
药理研究表明，火炭母具有抗菌，抗病毒、降压及抑
制中枢神经的作用，治疗肠炎有较好的疗效［1］。火
炭母主要化学成分槲皮素、木犀草素和丁香酸等［2］。
有文献报道对其槲皮素含量进行测定［3］，但未有对
其指纹图谱研究的报道，本实验通过采用高效液相
色谱法，以槲皮素为对照品，建立了广东地区 12 批
火炭母药材的指纹图谱，为火炭母药材的质量控制
提供依据。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪 (美国 Agilent 1100，配有
DAD) ，Sartorius BP211D 型电子天平(0. 01 mg) ，色
谱柱 Platisil ODS C18(4. 6 mm × 250 mn，5 μm)。乙
腈(色谱纯) ，超纯水(自制) ;其他试剂均为分析纯。
槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所，批号
100081-200406)。12 批火炭母药材产地见表 1。
药材经广东省中药研究所汪小根教授鉴定为火
炭母草 P． chinense。
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第 17 卷第 15 期
2011 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 17，No． 15
Aug．，2011
表 1 火炭母药材来源
No． 样品来源 采集时间 No． 样品来源 采集时间
S1 广州龙洞 2010-07 S7 广东德庆 2010-07
S2 广州从化 2010-07 S8 广东肇庆 2010-07
S3 广东佛冈 2010-05 S9 广东阳春 2010-06
S4 广东清远 2010-05 S10 广东普宁 2010-06
S5 广东博罗 2010-06 S11 广东曲江 市售
S6 广东连州 2010-07 S12 广东翁源 市售
2 方法与结果
2. 1 色 谱 条 件 色 谱 柱 为 Platisil ODS C18
(4. 6 mm × 250 mn，5 μm)。流 动 相 乙 腈 (A)-
0. 05%磷酸溶液(B)梯度洗脱:0 ～ 10 min 15% A，
10 ～ 20 min 15% ～ 25% A，20 ～ 30 min 25% ～ 40%
A，30 ～ 40 min 40% ～ 50% A，40 ～ 50 min 50% ～
5% A，50 ～ 60 min 5% A。记录时间 60 min。体积
流量 1. 0 mL·min － 1，柱温 25 ℃;检测波长 360 nm;
进样体积 10 μL。
2. 2 溶液的制备 精密称取槲皮素对照品 2. 8 mg，
加甲醇溶解定容于 10 mL 量瓶中，制成每 1 mL 中含
槲皮素 0. 28 mg 溶液作为对照品溶液。称取火炭母
药材粉末 5 g (粗粉) ，加 60%乙醇 40 mL 回流 1. 5 h
共 2 次，放冷，滤过，合并滤液蒸干，残渣用甲醇溶解
并定容于 10 mL 量瓶中。临用前过 0. 45 μm 微孔滤
膜滤过，作为供试品溶液。
2. 3 专性试验 精密吸取供试品溶液 10 μL 注入
高效液相色谱仪，记录 70 min 色谱图，发现 50 min
后无色谱峰，故把分析时间定为 60 min。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 精密度试验 取 S1 供试品溶液，连续进样 6
次，分别对共有峰的相对保留时间和相对峰面积进
行考察。结果表明，各共有峰的相对保留时间
RSD ＜ 0. 4%;相对峰面积 RSD ＜ 2. 0%，符合指纹图
谱分析要求。
2. 4. 2 稳定性试验 取 S1 供试品溶液，分别于 0，
2，4，6，12 h 进样分析，考察共有峰的相对保留时间
和相对峰面积。结果表明，各共有峰相对保留时间
RSD ＜ 0. 4%，相对峰面积 RSD ＜ 2. 0%，表明供试品
溶液在 12 h 内基本稳定。
2. 4. 3 重复性试验 取 S1 供试品药材粉末 5 份，
按已确定指纹图谱方法制备供试品溶液，分别对共
有峰的相对保留时间和相对峰面积进行考察。结果
表明，各共有峰相对保留时间 RSD ＜ 0. 4%，相对峰
面积 RSD ＜ 2. 0%，符合指纹图谱分析要求。
2. 4. 4 指纹图谱建立及相似度分析 取不同产地
的火炭母药材，按 2. 2 项下方法制备供试品溶液，各
取 10 μL 分别进样，按 2. 1 的色谱条件进行 HPLC
分析，建立指纹图谱。以峰 12 为内参比峰标示出火
炭母的 HPLC 指纹图谱中 17 个共有峰作为构成指
纹图谱稳定的特征峰，同时将所得到的色谱图数据
导入指纹图谱评价系统，进行色谱峰匹配，建立火炭
母指纹图谱共有模式，并计算相似度。按上述色谱
条件分别将 12 批供试品进样分析，记录色谱图
(图 1)。经统计共有峰面积占总峰面积百分比为
90% ～ 95%，非共有峰面积与总峰面积的百分比
为 ＜ 10%。符合指纹图谱研究的非共有峰占总峰面
积百分比 ＜ 10%的技术要求。
图 1 12 批火炭母药材指纹图谱
将 12 批药材图谱数据导入中药色谱指纹图谱
相似度评价系统软件，自动匹配后生成对照图谱，以
此作为火炭母药材的对照指纹图谱，进行相似度评
价，其计算结果见表 2，生成的共有模式对照指纹图
谱见图 2。12 批样品的相似度计算结果均 ＞ 0. 9，说
明各产地的药材有较好的一致性。
表 2 相似度分析
No． 相似度 No． 相似度
S1 0. 964 S7 0. 973
S2 0. 951 S8 0. 954
S3 0. 992 S9 0. 995
S4 0. 927 S10 0. 915
S5 0. 916 S11 0. 982
S6 0. 922 S12 0. 921
3 讨论
3. 1 波长的选择 采用 DAD 全波长扫描，并采集
其三维色谱图，通过综合考虑该三维色谱图在所有
波长下出峰的多少，和各成分的分离情况以及各色
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王金香:火炭母药材 HPLC 指纹图谱研究
12. 槲皮素
图 2 火炭母药材共有模式
谱峰的丰度，最后选定检测波长为 360 nm。
3. 2 流动相的确定 选择了 3 种流动相系统及其
不同流动相比例进行比较，包括甲醇-水、乙腈-水以
及乙腈-0. 05%磷酸。结果表明，各种流动相中以乙
腈-0. 05%磷酸系统为最佳，其图谱上各个色谱峰的
分离度较好，保留时间适中，因此选此流动相系统作
为火炭母 HPLC 指纹图谱检测的流动相。
3. 3 色谱柱的考察 选择了 3 种不同填料、规格及
厂家的色谱柱进行比较，包括 Platisil C18(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm) ，Shim-pack VP ODS(4. 6 mm × 250
mm，5 μm)以及 Agilent Zorbax SB (4. 6 mm × 250
mm，5 μm)。结果表明，各种色谱柱中以 Platisil C18
为最佳，所得色谱图峰数目较多，峰面积较大，分离
度良好，因此选此色谱柱作为火炭母 HPLC 指纹图
谱检测的色谱柱。
3. 4 提取方法的考察 选择了超声提取和回流提
取进行比较，结果表明回流提取色谱峰较多。对提
取溶剂和提取时间进行考察，结果表明以 80%乙醇
提取 2 次色谱峰较多，干扰较少，基线稳定。
3. 5 与对照药材的比对 根据所得的共有模式，将
火炭母对照药材色谱图与共有模式进行相似度计
算，以检查共有模式是否正确。经过同样的谱图处
理后，计算了其与共有模式的相似度。结果显示，各
产地火炭母药材之间相似度均在 0. 90 以上，说明该
共有模式可用于火炭母药材的检测。
4 结论
对不同产地火炭母的 HPLC 指纹图谱进行比较
分析，各产地火炭母的 HPLC 图谱中均有此 17 个共
有峰，各峰的相对保留时间比较一致，并且这 17 个
峰占总峰面积的 90%以上，故规定不同产地的火炭
母均应检出这 17 个共有峰。经中药色谱指纹图谱
相似度评价软件处理结果表明，12 批火炭母的相似
度为 0. 90 以上。同时，所获得的指纹图谱共有模式
与火炭母对照药材相似度为 0. 90。因此，此方法所
得指纹图谱可用于火炭母药材的检测。
［参考文献］
［1］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会 ． 中华本草:第 2
册［M］．上海:上海科学技术出版社，1999:648．
［2］ 林焕泽，吴秀荣 ．高效液相色谱法测定火炭母中槲皮苷
的含量［J］．中国医院药学杂志，2006，26(8) :1032．
［3］ 谢贤强，吴萍，林立东，等 ． 火炭母化学成分的研究
［J］． 热带亚热带植物学报，2007，15(5) :450．
［责任编辑 蔡仲德］
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第 17 卷第 15 期
2011 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 17，No． 15
Aug．，2011