全 文 ：收稿日期:2009-04-28;　修订日期:2009-08-12
基金项目:安徽省教育厅青年基金项目(No.2006JQL234)
作者简介:佟　玲(1978-),女(满族),吉林永吉人 ,现任安徽淮南师范学
院讲师 ,硕士学位 ,主要从事药物化学研究工作.
正交实验提取两栖蓼中生物碱的研究
佟　玲 ,汪宇炎
(安徽淮南师范学院 ,安徽 淮南　232001)
摘要:目的 研究利用有机溶剂提取两栖蓼中生物碱的最优条件 。方法 以乙醇的水溶液为提取剂 , 利用正交实验的方法
设计实验条件。结果 溶剂提取法提取两栖蓼中生物碱的最佳条件为:乙醇浓度 75%,提取时间 3h,固液比 1∶12。结论
利用正交实验确定了两栖蓼中生物碱提取的最佳条件:乙醇浓度 75%, 提取时间 3 h, 固液比 1∶12。
关键词:两栖蓼;　乙醇提取;　生物碱;　正交实验
中图分类号:R284.2　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2010)02-0365-01
　　两栖蓼 PolygonumamphibiumL., 生于湖泊 、河流浅水中和水
边湿地 , 分布于吉林 、辽宁 、河北 、山西 、山东 、陕西 、湖北 、云南 、贵
州等地。两栖蓼为蓼科蓼属植物 ,蓼科植物药用历史悠久 , 历代
本草均有收载 , 大多具有清热解毒 、理气止滞 、除湿化滞 、活血化
瘀 、固脱等功效 ,用于痈疖疮毒 、痢疾肠炎 、赤白带下 、跌打损伤 、
月经不调等症 [ 1 ～4] 。
1　仪器与材料
1.1　仪器 水蒸气蒸馏装置;脂肪抽出器(天长市千玻教学仪器有
限公司);HH-S恒温水浴锅(江苏省金坛市正基仪器有限公司)。
1.2　材料 两栖蓼 , 2008-05采自淮南师范学院泉山校区, 经安徽
淮南师范学院生物系谢影老师鉴定为两栖蓼;化学试剂均为分析纯。
2　方法
2.1　材料预处理 新鲜的两栖蓼全草用去离子水洗净切成块盛
在托盘中 , 放入 105℃的电热鼓风干燥箱中杀青 10 min, 然后在
温度为 80℃的电热鼓风干燥箱中烘干约 24 h。将烘干的两栖蓼
在粉碎机中粉碎 , 过 60目筛备用。
2.2　实验设计 乙醇浓度 、提取时间 、固液比是影响生物碱提取
的主要因素 , 选用以上 3个考察因素 , 每个因素设立 3个水平
(表 1)[ 5 ～ 7] 。按照正交实验表以乙醇为浸提液提取干粉中的生
物碱 , 提取完成后过滤 , 弃去残渣。对提取液进行蒸馏回收得到
乙醇和提取物。向提取物中加入适量 1mol/L的硫酸 ,形成酸水
液和沉淀 , 滤去酸水液中的沉淀 ,加入适量的浓氨水调至 pH值 9
～ 10。然后加氯仿萃取 , 生物碱溶在下层的氯仿层中 , 用分液漏
斗分离。对萃取液进行蒸馏回收氯仿和提取物 ,蒸去氯仿后称量
计算提取率 [ 8, 9] 。
表 1　因素水平
水平 A乙醇浓度(%)
B
提取时间 t/h
C
固液比
1 95 2 1∶12
2 85 3 1∶15
3 75 4 1∶18
2.3　实验步骤 取 10 g两栖蓼干粉 , 用滤纸包好放在洁净干燥
的脂肪抽出器中 , 再向脂肪抽出器中按比例加入的不同浓度的乙
醇和几粒沸石 , 用水浴锅加热 ,不断回流 ,按照实验设计回流一定
时间后再将回流后的液体进行恒温蒸馏(要重新加沸石)回收乙
醇 , 直到没有液体蒸出为止 ,此时剩下的即为粗产物 ,含有一定的
杂质 , 下一步将进行提纯。向提取物中加入适量 1 mol/L的硫
酸 , 形成酸水液和沉淀 ,滤去酸水液中的沉淀 ,加入适量的浓氨水
调至 pH值 9 ～ 10。将酸水液倒入分液漏斗中加入 30 ml的氯仿
萃取 3次 , 合并 3次的氯仿层于已加沸石称重的锥形瓶中 , 再将
锥形瓶放入恒温水浴锅蒸馏回收氯仿。 锥形瓶中剩余物即为纯
净的生物碱。
3　结果
3.1　提取率测定 将提取的氯仿层放入已称重质量为 m1的锥形
瓶中 ,蒸去氯仿即得纯净的生物碱, 再次称重得锥形瓶质量 m
2
。
生物碱提取率 =(m2 -m1)/两栖蓼干粉质量。结果见表 2。
表 2　正交实验结果
实验号 m1 /g m2 /g 干粉质量 m/g 提取率(%)
1 41.527 3 42.018 2 10.738 1 4.572
2 47.970 3 48.365 5 10.076 8 3.922
3 41.444 6 42.252 9 10.140 7 8.083
4 40.155 0 40.658 0 9.765 2 5.030
5 39.928 3 40.533 6 10.129 3 5.976
6 39.637 3 40.150 2 10.062 1 5.129
7 39.717 9 40.825 7 10.159 5 10.904
8 57.501 4 58.060 0 10.069 5 5.547
9 39.625 3 40.202 8 9.754 2 6.175
3.2　极差分析法对总生物碱提取工艺的影响 经对比实验最后
确定出最优工艺条件通过表 3正交实验结果方差分析表明 , 3个
因素均显著影响两栖蓼生物碱的提取率。由极差分析可知影响
因素:乙醇浓度 >固液比 >提取时间 ,两栖蓼生物碱提取的最佳
条件为固液比 1∶12,提取时间 3 h,乙醇浓度 75%。
表 3　L9(33)的正交实验结果
实验号 A B C 提取率(%)
1 1 1 1
2 1 2 2 3.922
3 1 3 3 8.083
4 2 1 2 5.976
5 2 2 3 5.129
6 2 3 1 5.030
7 3 1 3 6.175
8 3 2 1 10.904
9 3 3 2 5.547
K1 16.577 16.723 20.506K2 16.135 19.955 15.445K3 22.626 18.660 19.387k1 5.527 5.574 6.835k2 5.378 6.652 5.148k
3 7.542 6.220 6.462R 2.164 1.078 1.687
3.3　最佳工艺条件确定 优选出最佳工艺后 , 进行验证实验 , 以
确保重复性和正确性。按 A3B2C1即用两栖蓼干粉 10 g, 1∶ 12
的固液比 , 75%的乙醇浓度 , 每次提取 3 h的条件下进行 3次平
行实验 。结果见表 4。
表 4　A3B2C1 下总碱的提取量
实验次数 提取率(%)
1 10.237
2 10.512
3 10.651
平均 10.467
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.2 时珍国医国药 2010年第 21卷第 2期
由表 4可知 , 在 A3B2C1条件下两栖蓼总生物碱提取率高于
表 3中的实验结果 , 总生物碱得率为 10.467%, 在本实验的范围
内 , A3B2C1为最佳的工艺选择。通过重复验证得知 , 该条件确实
为最佳条件。
4　讨论
该实验就是研究利用有机溶剂提取两栖蓼中活性成分生物
碱 [ 10, 11]。正交实验结果表明 ,在以乙醇为浸提液提取两栖蓼内生
物碱的过程中各因素对提取率的影响程度为:乙醇浓度 >固液比
>提取时间, 最佳的提取条件为乙醇浓度 75 %, 固液比 1∶12, 提
取时间 3h,并且估算出两栖蓼中生物碱的含量为 10.467%。
参考文献:
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人民卫生出版社 , 1972:12.
收稿日期:2009-04-21;　修订日期:2009-10-28
基金项目:河南省科技厅科技攻关项目(No.0624410021)
作者简介:李翠萍(1955-),女(维吾尔族),河南渑池人 ,现任河南中医学院教授 ,博士研究生导师 ,学士学位 ,主要从事中医药防治女性生殖内分泌疾
病的研究工作.
补肾调周法对多囊卵巢大鼠性激素和
胰岛素样生长因子 -1的影响
李翠萍 1 ,黄　霞2 ,陈　杨 3 , 范晓丽 3 ,孙　为2 ,刘惠霞 2
(1.河南中医学院附属第三医院 ,河南 郑州　450008 ;　2.河南省中医药研究院 ,河南 郑州　450004;　
3.河南中医学院 2007级研究生 ,河南 郑州　450008)
摘要:目的 观察补肾调周法对造模大鼠性激素和胰岛素样生长因子 -1(IGF-1)的影响。方法 将 60只大鼠随机分为
6组 ,即空白组 , 模型组 ,补肾调周低 、中 、高剂量组 ,阳性对照组 , 每组各 10只。除空白组外其余各组采用 HCG+胰岛素
(INS)建立多囊卵巢(PolycysticOvary, PCO)动物模型 。补肾调周法序贯治疗 16 d后测定血清 T、LH、E2 、INS含量 ,免疫
组化法检测胰岛素样生长因子 -1(IGF-1)在卵巢组织的表达 ,并在光镜下观察卵巢组织形态。结果 补肾调周法能显
著降低 PCO模型大鼠血清 T, LH, E2 , INS含量 ,减少 IGF-1在卵巢组织的表达 ,增加卵巢颗粒细胞层数 , 增加黄体组织
数量。结论 补肾调周法可改善多囊卵巢综合征高胰岛素血症和高雄激素血症 , 且具有多途径 、多环节 、多靶点的特点。
关键词:多囊卵巢综合征;　高雄激素血症;　高胰岛素血症;　补肾调周法;　胰岛素样生长因子
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2010)02-0366-02
EffectsofMethodofInvigoratingKidneyandRegulatingMenstruationonSexHormone
andInsulin-likeGrowthFactor-1 LevelsinRatswithPolycysticOvary
LICui-ping1 , HUANGXia2 ,CHENYang3 , FANXiao-li3 ,SUNWei2 ,LIUHui-xia2
(1.TheThirdHospitalofHenanUniversityofTCM, Zhengzhou450008, China;2.HenanInstituteofTCM,
Zhengzhou450004, China;3.Postgraduates2007 HenanUniversityofTCM, Zhengzhou450008, China)
Abstract:ObjectiveToobservetheeffectsofmethodofinvigoratingkidneyandregulatingmenstruationonsexhormoneandin-
sulin-likegrowthfactor-1(IGF-1)levelsinratswithpolycysticovary.Methods 60ratswererandomlydividedinto6 groups
(n=10):blankgroup, modelgroup, lowdoseofinvigoratingkidneygroup, middledoseofinvigoratingkidneygroup, highdose
ofinvigoratingkidneygroup, masculinecontrolgroup.Inadditiontotheblankgroup, theothergroupswereinducedasPCOmod-
elbyinsulinandHCG.After16daystreatmentwiththemethodofinvigoratingkidneyandregulatingmenstruation, theserumlev-
elsoftestosterone(T), luteinizinghormonl(LH), estradiol(E2)andinsulin(INS)weredetermined, theexpressionofIGF-1intheovarywasdetectedwithimmunohistochemicalmethod, andorganizationshapeofowarywasobservedunderthelightmicro-
scope.ResultsThemethodofinvigoratingkidneyandregulatingmenstruationcouldobviouslyreducetheserumlevelsofT, LH,
E2, andINScontentinPCOmodelrats, inhibittheexpressionofIGF-1intheovaryandincreasethegranularcellayerandthe
quantityoftheyelowbodyorganizationofovary.Conclusion Themethodofinvigoratingkidneyandregulatingmenstruationmay
improvethehyperinsulinemiaandhyperandrogenismofPCOSwiththecharacteristicsofmulti-ways, multi-linksandthemulti
-target.
Keywords:PolycysticOvarySyndrome(PCOS);　Hyperandrogenism;　Hyperinsulinemia;　Methodofinvigoratingkidney
andregulatingmenstruation;　IGF-1
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时珍国医国药 2010年第 21卷第 2期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.2