全 文 ：HPLC法测定杠板归中绿原酸的含量＊＊
茅向军＊＊ , 鲍家科 , 许乾丽 , 左　鼎 , 王德甫
(贵州省药品检验所 , 贵州 贵阳　550004)
[摘　要 ] 目的:建立用高效液相色谱法测定杠板归中绿原酸的含量的方法。方法:采用高效液相色谱法 ,
HypersilODS2C18柱 ,流动相为乙腈 -0.4%磷酸(10∶90), 检测波长为 327nm。结果:绿原酸在 0.042 ～ 1.14μg
范围内线性关系良好 , 平均回收率为 99.19%, RSD为 1.7%。结论:本分析方法简便 、准确 ,可作为该药材质量
控制的定量分析方法。
[关键词 ] 杠板归;绿原酸;色谱法 ,高压液相
[中图分类号 ] R284.1　　 [文献标识码 ] A　　 [文章编号 ] 1000-2707(2010)06-0567-03
DeterminationofChlorogenicAcidinPolygonumperfoliatumL.
withHighPerformanceLiquidChromatography
MAOXiangjun, BAOJiake, XUQianli, ZUODing, WANGDefu
(GuizhouProvincialInstituteforDrugControl, Guiyang550004 , Guizhou, China)
[ Abstract] Objective:ToestablishamethodfordeterminatingchlorogenicacidinPolygonumperfoli-
atumL.withhighperformanceliquidchromatography(HPLC).Methods:TheHPLCmethodwas
carriedoutonC18(250 mm×4.6mm, 5 μm)columnusingacetonitrile-0.4% phosphoricacid(10∶
90 , v∶v)asmobilephase, andtheflowratewas1.0ml· min-1.Detectionwavelengthwas327nm.
Result:Thecalibrationcurveforchlorogenicacidwaslinearintherangeof0.042 ～ 1.14 μg.The
averagerecoverywas99.19%(n=6), andPSDwas1.7%.Conclusion:Themethodisconvenient
andaccurateforquantitativedeterminationofchlorogenicacidinP.perfoliatumL.
[ Keywords] Polygonumperfoltiarum;chlorogenicacid;chromatography, highpressureliquid
　　杠板归又名贯叶蓼 、蛇牙草等 ,为蓼科植物杠
板归(PolygonumperfoliatumL.)的干燥地上部分 ,
亦为贵州省少数民族用药 ,具有利水消肿 ,清解热
毒 ,止咳的功效 ,用于肾炎水肿 ,上呼吸道感染 ,百
日咳 ,泻痢 ,湿疹 ,疖肿 ,毒蛇咬伤 [ 1] 。根据文献报
道 ,杠板归有抗癌活性 ,对实验性动物移植肿瘤有
抵制作用 [ 2, 3] 。杠板归中主要含黄酮类 、苯丙酸
类 、苦木素类 、蒽醌类和新苯丙素蔗糠酯类等成分。
苯丙酸类有咖啡酸 、绿原酸[ 4] ,黄酮类化合物 [ 5]有
山萘酚 、槲皮素 、蓄苷 、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛
酸甲酯 、槲皮素 -3-O-β -D-葡萄糖醛酸正丁酯 、山萘
酚 -3-O-芸香糖苷及芦丁等 。杠板归中化学成分的
含量测定 ,文献报道较少 ,有报道对其所含的槲皮
素含量采用薄层扫描法进行测定[ 6] 。目前未见到
对杠板归中绿原酸的含量测定报道 ,本实验参考
《中国药典 》2005年版一部及有关文献资料 ,采用
高效液相色谱法对杠板归中所含的绿原酸含量进
行测定 ,并对测定的方法学进行了研究。
1　仪器与试药
TU-1901紫外分光光度计(北京普析通用通用
仪器公司),岛津 LC-20A液相色谱仪 , LCsolution
色谱工作站 ,恒温柱箱 ,自动进样器。 TCQ-250超
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第 35卷　第 6期
2010年 12月 　　　 贵 阳 医 学 院 学 报JOURNALOFGUIYANGMEDICALCOLLEGE　　　Vol.35　No.62010.12
＊ ＊ [基金项目 ]贵州省中药现代化科技产业研究开发专项 [黔科合社字(2008)5002号 ] 。
＊＊通讯作者 E-mail:mxjun108@sina.com
声波清洗器(北京医疗设备二厂)。绿原酸对照品
由中国药品生物制品检定所提供(批号:110753-
200413),乙腈为色谱纯 ,水为重蒸馏水 ,其余试剂
均为分析纯 。收集到 16批杠板归样品 ,原植物由
贵阳中医学院陈德媛研究员鉴定。
2　方法与结果
2.1　测定波长的选择　用紫外分光光度计测得绿
原酸对照品溶液在 203.0nm、244.0nm及328.0nm
处均有最大吸收 , 结合文献及实验结果选择了
327 nm作为检测波长。
2.2　色谱条件　色谱柱:HypersilODS2(4.6 mm
×250 mm, 5 μm, 大连伊利特),柱号:E1916542;
流动相:乙腈 -0.4%磷酸溶液 (10∶90);检测波
长:327nm;流速:1ml/min;进样量:10μl。
2.3　系统适用性试验　分别取绿原酸对照品溶
液 、供试品溶液注入液相色谱仪 ,记录色谱 (见图
1)。从图中可见 ,绿原酸的保留时间约为 13 min,
绿原酸和其相近的其它峰分离完全 (分离度 >
1.5),即本试验条件下绿原酸与其他组分分离完
全。理论板数以绿原酸计算为 2 500。
A为对照品 , B为杠板归药材样品 ,图中 1为绿原酸
图 1　绿原酸对照品和杠板归药材 HPLC色谱图
Fig.1　HPLCchromatogramsofchlorogenicacidstandardandP.perfoliatumL.sample
2.4　对照品溶液与供试品溶液的制备　对照品溶
液:精密称取绿原酸对照品 ,加 70%甲醇制成每
1 ml含绿原酸 0.02 mg的溶液 ,即得。供试品溶
液:取本品粉末(过 3号筛 ,同时测定水分)2 g,精
密称定 ,置 100 ml具塞锥形瓶中 ,精密加 70%甲醇
50 ml,称定重量 , 置水浴中加热回流提取 1 h,取
下 ,放冷 ,再称定重量 ,用 70%甲醇补足减失的重
量 ,摇匀 ,滤过 ,精密吸取续滤液 25ml,置水浴上挥
至近干 ,用流动相溶解并转移至 10 ml量瓶中 ,用
微孔滤膜(0.45 μm)滤过 ,即得。
2.5　线性关系考察　按上述色谱条件 ,分别精密
吸取绿原酸对照品(0.042 04g/L)溶液 1、3、9、15、
21、27 μl,注入液相色谱仪 ,以峰面积为纵坐标 ,进
样量为横坐标绘制工作曲线 ,计算线性回归方程为
A=2.698×106C+2.533×103 , r=1.000,线性范
围 0.042 ～ 1.14 μg。
2.6　仪器精密度试验　精密吸取绿原酸对照品
(0.021 02 g/L)溶液 10 μl,注入高效液相色谱仪 ,
重复进样 6次 ,测定绿原酸的峰面积 ,测定结果的
平均值的 RSD为 0.28%。
2.7　稳定性试验 　精密吸取同一供试品溶液
10μl,分别于 0, 1, 3, 5 , 7, 9 h进样测定。其峰面积
平均值的 RSD为 2.5%,结果表明 ,供试液在 9 h
内稳定性良好。
2.8　重复性试验 　精密称取同一批号杠板归 6
份 ,按供试品溶液制备方法制备 ,测定。结果绿原
酸平均含量为 0.240 0 mg/g, RSD为 2.7%。
2.9　回收率试验　采用加样回收法 ,分别取已测
定含量的样品(绿原酸含量 0.240 0 mg/g)6份 ,约
1g,精密加入用 70%甲醇配制的绿原酸对照品溶
液(0.021 02 g/L)10 ml, 再精密加入 70%甲醇
40ml,按 “2.5”项下制备供试品溶液 ,测定 ,结果见
表 1。
2.10　样品测定　分别称取不同来源的杠板归适
量 ,按上述 “2.4”项下制备供试品溶液 ,分别精密
吸取对照品溶液与供试品溶液各 10 μl,注入液相
色谱仪 ,按上述色谱条件测定 ,结果见表 2。
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贵 阳 医 学 院 学 报　 35卷　
表 1　回收率试验结果
Tab.1　Testresultsofrecovery
试验次数 样品量(g) 含绿原酸(mg)加入绿原酸(mg)测得量(mg) 回收率(%)平均回收率(%) RSD(%)
1 1.001 2 0.240 3 0.210 2 0.453 4 101.2 99.19 1.7
2 0.993 4 0.238 4 0.210 2 0.443 6 97.90
3 0.996 2 0.239 1 0.210 2 0.441 2 96.16
4 1.000 6 0.240 1 0.210 2 0.448 3 99.17
5 1.011 4 0.242 7 0.210 2 0.454 8 100.8
6 1.012 8 0.243 1 0.210 2 0.452 0 99.47
表 2　16批样品中绿原酸含量测定结果(n=2)
Tab.2　Chlorogenicacidcontentstested
in16 batchesofsamples
杠板归产地 批号 绿原酸含量 /%(以干燥品计)
贵州平坝 20070801 0.001 1
贵州开阳 0.033
贵州贵阳 20080801 0.009 8
山西广生 47 0.029
贵州平坝 20080801 0.034
贵州毕节 20080814 0.020
贵州毕节 200801008 0.013
贵阳花溪区 0.021
佳程药业贵州有限公司样品 0.009 3
四川绵阳 0.015
福建福州 0.010
贵阳济仁堂药业公司样品 0.007 3
贵州同济堂药业公司样品 0.021
贵州大方 GBG01 0.036
贵州大方 GBG02 0.018
贵州大方 GBG03 0.027
3　讨论
本实验的提取条件是通过采用加热回流和超
声处理两种提取方法对比后 ,确定采用加热回流提
取的方法。比较了不同提取溶剂体积和不同加热
回流提取时间及不同的药材取样量 ,最终确定了样
品的制备方法。通过 HPLC方法学验证试验 ,证实
该方法简便易行 ,准确度高 ,可为杠板归药材的质
量控制和品质评价提供依据。
测定了不同产地和不同来源的 16批杠板归药
材的绿原酸含量 ,其含量范围基本在 0.001 1% ～
0.036%之间 ,差别较大 ,可能与采收季节 、采收时
间 、保存方式等原因有关 ,有待进行深入的研究。
致谢:感谢四川 、福建 、山西等兄弟省药检所 ,
贵州毕节地区药检所及贵州同济堂制药有限公司 、
贵阳济仁堂药业有限公司 、佳程药业(贵州)有限
公司等生产企业提供药材样品 。
4　参考文献
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京:人民卫生出版社 , 1978:284.
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学技术出版社 , 2000:869.
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物科学 , 2004(2):10-12.
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(2010-06-21收稿 , 2010-08-11修回)
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　6期 茅向军等　HPLC法测定杠板归中绿原酸的含量