全 文 ：新疆中医药1 9 9 4年第 4 期
天 山 大 黄 有 效 成 分 的 研 究
新疆维吾尔自治区中医医院药剂部 ` 83 0 0 0 0 )阎柏琴
一 、 总述
天山大黄 Rh e om W i t r oe h i i L u n d s t r
(原名新疆大黄 Rh e u m W i t t r oe ki i L u n d -
s t r )为多年生草本 , 高50 一 2 0 0 . 暇 , 喜生于
山坡湿地 , 在天山北坡一带分布广泛 。 药用
其根及根茎 , 性味苦 , 寒 , 具有泻实热 、 通
大便 、 破积行寮 、 消痈肿作用 。 曾一度作为
正品大黄的代用品而采集收购 , 后被北京药
检所等单位鉴定 , 证明其泻下作用 弱而 停
购。 近年来 , 国内外对大黄的化学成分研究
急速发展 , 大黄不仅作为泻下药广泛应用 ,
而且具有抗菌消炎 、 利胆利尿 、 降低血中胆
固醇 、 抗坏血病等作用 , 其中已被证明其泻
下作用的有效成分 , 主要是蕙醒贰类或结合
状态的葱醒类化合物 (结合大黄酸 、 大黄素 、
芦荟大黄素为主 ) ,使我们受到启发 。 我们认
为对天 山大黄与正品大黄 ( R h e u m O f f i e i -
n a le B a il )在 有效成分的差异上进行分析 ,
来判断天山大黄药用价值是一个重要途径 。
因此 , 我们对天山大黄进行了一些初步 的研
究工作。
二 、 实验
(一 ) 成分与试验 :
1
.实验材料 : 天山大黄 ( R . W i t r o e h i i
L u n d s t r )药用大黄 ( R . o f f r e i n o h B a i l l )
均由自治区医药公司提供其干燥根茎 , 分别
研成粗粉过 30 目筛备用 。
2
. 实验 :
( l ) 样品制备:
a : 水提液 : 称取大黄 、 天山大黄粗粉各
5克分别加入 50 m l水 , 室温浸泡过夜或水浴
加热半小时 , 过滤 , 滤液供检识 。
b
: 醇提液 : 称取大黄 、 天山大黄粗粉各
5 克分别加入 35 m 】95 %甲醇溶液 , 水浴回流
10 一 30 分钟 , 乘热过滤 , 滤液供检识 。
( 2 ) 定性实验 : (表 1 )大黄 、 天山大
黄成分与试验 :
(二 ) 葱醒衍生物的色谱层析 :
.1 样品制备:
将大黄和天山大黄粗粉各称取 2克左右 ;
在沙 氏提取器中以氯仿 ( C . P ) 提取至无色
为止 , 时间约 20 小时 , 蒸去氯仿得残余液为
游离状态的葱醒衍生物 (样品 I , I ’ ) 。
将游离状态葱醒提取出的大黄和天山大黄残
渣 , 分别作20 %硫酸溶液和氯仿混合物 ( l
: 4) 在水浴上 回流四小时 , 分出氯仿层 , 重
复以上操作 , 反复用氯仿提取至 氯 仿 层 无
色 , 合并氯仿液 , 水洗氯仿层 , 除去硫酸 ,
蒸去氯仿得残余液为结合状态的 葱 醒 衍 生
物 (样品 1 1 ’ ) 。
再将样品提出后的残渣分别先用浓氢氧
化钾溶液中和硫酸 , 再加入过量 的 5 % 氢氧
化钾溶液呈明显碱性 , 煮沸一刻钟 , 此时溶
液呈红色 , 将液体分出后 , 再用 5 %氢氧化
钾溶液提取 1一 2 次 , 合并提取液加入盐酸
酸化 , 有黄色沉淀产生 , 过滤 , 用水洗涤沉
淀 , 干后则得树脂类结合状态葱醒衍生物 。
(样品 夏 , 贾 )
2
. 色谱分析 :
( z ) 纸层析:
层析结果以下面三种溶液 系 统 为 好 :
苯 : 四氯化碳 : 水 二 1 : 1 , l ;
苯 : 丙酮 : 水 “ 2 , 1 . 5 : 1 ,
甲苯 : 四氯化碳 : 水 = 1 : 1 : 1 ,
见表 2
标准品大黄酚由天津药检所提供 。
表 1
提 {
一—取 } 定性项 目液 } 被 检 品引 : { 一-— 画列亘夔三释 1髯 } “ %三氯化铁乙醇溶液 } 黑绿色 十 1黑绿色 十一竺二[一竺一』- 兰终钠明胶溶液 }桔红色沉淀 【蓝色沉淀检液苯稀释后加 % 1 0氢氧化钠试液 , 再加酸检液在蒸发皿蒸干加入浓硫酸取检液在试管内加入 1% 三氯化铝试剂
取检液滴于滤纸喷1 %硼酸水溶液
取检液加入。 . 5% 醋酸镁甲醇溶液
苯层为黄色 ,
加碱碱化后
红色消失
紫褐色
红色
橙红紫 .
橙红色
水层呈红
色加酸
呈正反应
紫褐色
红色
亮蓝紫 .
红色
蕙醒衍定物生性醇提取液
取检液加硼酸的饱和丙酮溶液及 10 %拘橡酸
溶液各 10 1水溶蒸干取残渣检识
取检液滴于滤纸通过浓氢氧化钱蒸气
取检液加入浓盐酸和少量锌粉
取检液滴于滤纸喷 1%三氯化铝甲醇液
黄棕色 (微
带紫 ) `
黄色加深
反应不明显
粉红紫 .
亮蓝紫色 .
黄色加深
微红色
亮蓝紫 申
黄酮生衍物定性
醇提取液
光灯下观察萤光
表 2 溶剂系统 : 苯 : 丙酮 : 水 = 2 : 1 . 5
O
B 一 0 0 O
I
、 大黄游离蕙醒
n
、 大黄结合葱醒
l
、 大黄树脂类结合蕙醒
I ` 、 天山大黄游离蕙醒
n
产、 天山大黄结合葱醒
1 `天山大黄树脂结合蕙酮
一 A — O - 一 O— O— O— O— O— O— I 标 : 标准品大黄酚
1 1 1 1 产 n
尹 1 产 标
检样: 样品 I , I ’ ; I , l ’ 多 分别
加入少量甲醇溶液备用 。
厂 显色法 : 5 %氢氧化钾溶液 。
根据纸层析显色出现 斑 点 , 按 A 、 B 、
C
、
D点区分其 R t值 , 见表 3 。
( 2 ) 薄层层析:
以苯: 四氯化碳 : 氯仿二 , 15 : 0 . 5 : 1溶剂系
统为好 , 见表 4 。 一 . J . ~
2标准品` 夭津药检所提供大黄珊 。
检 样: 样 品 I , I ’ ; l , l ’ , 工 ,
I
’ ; 分别加入甲醉溶解备用 。
显色剂 : 5 %氢氧化钾溶液 。
根据各溶剂系统层析情 况 。 各 斑 点用
A
,
B
,
C
,
D区分 R t值 , 见表 5 。
(三 ) 天山大黄有效成分的提取 (氯仿
提取法 )
1
. 提取流程 : (收率0 . 3% ) ( 图省略 )
2
. 薄层分析 : 方法 、 步骤同实验 (二 )
皿
表 3 天山大黄在不 同扩展剂体系中纸层析 R犷值
~
~
~ ~ Rf值 刃一万一 }一’J 一…一下一誉析次数 一震赢 ” !瓜厂
O小时
4小时
3小时
3小时
6小时
7小时
1 3小时
8小乐卜
室温
室温
室温
室温
óJ Q曰弓d,J性-O户6cnl.atl只éjo口njn月O口OLJI八úQéOU
.户6
:
. t价
nU八曰UCé内日Où曰
月.
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,
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l
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O
。
2 9
l勺八bn曰OU九J h气OJ一公一八口U
. t…né门八曰凸é西U
溶剂系统 一一苯 : 四氯化碳 : 水 = 1 : 1 : 3
甲苯 : 四氯化碳 : 水 = 1 : 1 :
甲苯 : 水
苯 : 水
苯 : 丙酮 : 水 二 2 : 1 。 5 : 1
丙酮 : 石油醚 : 水 = 1 : 1 : 3
苯 : 95 % 乙醇 : 水
石油醚 : 甲醇
0
。
0 0
0
。
0 0
O
,
0 0
0
.
0 0
0
.
0 0
0
。
0 0
0
。
1 2
0
.
5 : …0 . 0 0
0
.
2 6
,
O
0
.
0 0 10
.
2 0
`
o
。
5 6
.
SG
. . . . . . . . . , . . . . . . . . . . …… 曰 ” . . 日. . . . ~ . , . . . . 尸 . . . . . . . . 口 . . . , . .曰.侧 , . . . .- .一 户 . . 侧 . . , . . . . . . 叨 . . ~一~ . . 州. . ~ , , ~ . . . . 门叨 . . ~ .表 4
0
O O
O
- -
-
-
-一 O— O 一—1 1 1 尸 0 -一 -— O 一一一1 产 标
工、 大黄游离蕙醒
。 、 大簧结合。 ,
I 尹
、 天山大黄游离葱醒
n 产
、 天山大黄游离蕙醒
标 : 标准品大黄酚
表 5 天 山大黄在不同溶剂系统中薄层析 R f
Rf值 …·招炙系统
烧一凸了丹0自0八Uù fl材,上
.…n.八U曰n八Un.nu八UC甘nùn.…Oùn材nUō1苯 : 四氯化碳 = 20 : 1 . 5苯 : 四氯化碳二 10 : O。 5苯 : 四氯化碳 = 15 : 。 。 5
苯 : 四氯化碳 “ 12 : 0 . 5
0
。
1 8
0
。
1
0
。
1 9
0
。
9 4
O
。
2 9
0
。
1 8
0
。
8 8
未活化硅胶 G 板
活化的硅胶 G 板
活化的硅胶 G 板
活化的硅胶 G 板
薄层析部分 。
溶剂系统 : 苯 : 四氯化碳 二 12 : 0 . 5 ,
层析结果见表 6 , 各斑点R t值见表 7 。
( 四 ) 大黄与天山大黄葱醒衍生物的含
量测定 :
1
.实验方法: 比色法 ( 72 型 分 光光 度
计 ) 。
2
. 试剂 : 1 . 8一 经基慈酿作为标准品 ,
1 05 ℃干燥 2小时 (由北京医学院药学系植化
教研组提供 ) 。 、
5 %氢氧化钠 一 2 %氢氧化按溶液作为
显色用 。
3
.样品 : 大黄粗粉 (过 40 目筛 ) 。
4
.标准曲线的制备 : 精密称 取 53 . 30 m g ,
1 : 。一经基葱配于 2 50 m l容量瓶中 用 乙 醚稀释至刻度 。
精密量取上述标准液 ZOOm i放入 25 lm 容
量瓶中 , 水浴燕千 , 加 5%氮氧化钠一 2%氮氧
化钱混合溶液至刻度 , 摇匀 , 30 分钟后在 72
型分光光度计下选择最大吸收峰以 m a X) 。
表 6
二0 0 0
.
-
-一一 . -一 , O - -一O— O— . — . — 人
1
. 氯仿析出物 氯仿重结晶
2
. 氯仿析出物 乙醚重结晶
3
. 氨仿 / N o H C O :提取物
4 几氯仿 / N a : C O 。提取物
5
. 氯仿 / N a 0 H提取物
6
.
N
a O H提取物毗咙重结晶物
7
。标准品大黄酚
!谨工J |月|份 匀 … C
2 3 5 6 7
表 7
斑点
R f值
表 8书…毛于…、 离蕙 , …大黄酸 、“ ’ { “ 量一一石孔% 10 . 15 %” · 3 8环 } ” · 5 4%· 含量为四次侧定平均值
精密量取上 述 标准 液 : 0 . 5 0 , 1 . 0 0 ,
2
.
0 0 , 3
.
o o m l
, 分别放入 2 5m l容量瓶 中 ,水
浴上蒸去 乙醚 , 加 5 %氢氧化钠 一 2 %氢氧
化按棍合碱液至刻度 , 摇匀 , 30 分钟后 在入
m a X5 20 m件下比色 , 绘标准曲线图 。
5
. 含量测定计算 :
E x D x V
W
一 X 1 0 0% = 葱酿%
E
: l m l标准溶液所含 1 . 8一经恭葱酿的m l数 。
D
: 比色计读得消光值 。
V : 检液体积 ( m l)
W
: 称样重量 ( m l )
6
. 含量测定:
a : 总葱醒的含量测定 .
称取大黄 、 天山大黄 1 克左右 , 加 30 m l
,
5
「
N硫酸 , 溶于 10 0m l三角碱中回流水解 2
小时 , 稍冷后加入 30 m l氯仿继续 回流 1 小
时 , 用吸管吸出氯仿撮取液 , 再加入新氯仿
10 耐 , 反复提取至氯仿层无 色 。 合并 氯仿
液 , 用少量氯仿洗涤 , 氯仿弃去 , 碱液调整
至一定体积 , 若不澄清可过滤 , 滤液在沸水
浴上加热 4 分钟 , 冷水冷却至室温 , 30 分钟
后测光密度 , 以碱液为空白对照 , 根据标准
曲线计算含量 。
b: 游离葱醒的含量测定: `
称取大黄、 天山大黄 1 克左右在沙氏提
取器以氯仿回流提取室无色 , 将氯仿液移人
分液漏斗 , 用碱液萃取至无色 , 合并碱液 ,
同上法处理 , 测光密度 , 根据标准曲线计算
含量 。
c : 结合蕙醒的含量测定 :
总蕙配含量 一 游离慈醒的含量 = 结合慈
配量 。
d :葱醒衍生物中大黄酚含量测定 :
按总葱醒含量测定法得到 的 氯 仿 液 ,
用 5 %碳酸氢钠溶液分次振摇萃取至无色 ,
合并碳酸氢钠液 , 加入稀盐酸酸化 , 再用 乙
醚分次提取至 乙醚层无色 。 合并 乙醚液 , 用
5 %氢氧化钠 一 2 %氢氧化钱混合碱液反复
萃取 , 碱液同上处理 , 测光密度 , 根据标准
曲线计算含量 。
总醒衍生物含量测定结果见表 8 。
三 、 讨论
1
. 成分与试验表明 : 天山大 黄含 有 蹂
质 、 葱醒 、 黄酮类化合 , 其中蹂质和黄酮类
成分 的含量高于大黄 。
2
. 从色谱分析结果 : 天山大黄和大黄的
成分类似 , 但从斑点显色深浅度表明 , 天山
大黄中各成份尤以大黄酸含量低于大黄 。 由
于实验条件有限 , 仅可证明在天山大黄中含
有游离型 、 结合型及树脂结合型的大黄酸和
大黄酸类 以及微量大黄素和芦荟大黄素化合
物 , 其它成分尚待进一步充实实验条件给予
证明 。
3
.氯仿提取天山大黄葱酿类衍生物 , 从
薄层析结果表的A点可能是大黄酚 , D点为
大黄酸或大黄酚与大黄素甲醚的混合物 , B点
则为大黄素或芦荟大黄素的可能性为大 (实
验条件未能有标准品对照 ) 。
氯仿提取物 , 收率较低 , 这可能与碱液
萃取过程中没有控制避光及时间有关。 文献
报导 , 大黄葱醒衍生物在碱性条件下对光极
不稳定 , 以大黄 酸 为 例 , P H 12 时 , 室 温
(2 5℃ ) 露光一天损失 43 % , 阳光照射一小
时损失 10 % , 故氯仿提取液在不同程度 碱
萃取过程中应避光并尽量缩短萃取时间 , 或
及时加入酸进行酸化 。
4
. 从色谱分析 , 有效成分提取 的含量测
定的结果一致表明 , 天山大黄中总葱醒衍生
物含量及结合型葱醒衍生物含量均低于大黄
中之含量 , 而游离葱酿衍生物含量则高于大
黄 。 从大量文献报道中我们知道 , 大黄具有
较强的泻下抗菌消炎等药理作用 , 与其结合
型葱醒衍生物 、 葱醒贰 (其中尤为结合型大
黄酸 、 大黄素 、 芦荟大黄素 ) 有着密切的关
系 。 也有文献报导 : 游离的葱醒衍生物实际
上没有泻下作用 , 但是否没有呢 ? 仅发现当
它和蕃泻昔 A 的配比时是 49 : 1时协同作用最
强 , 比例过大过小协 同作用都随之减弱 。 这
样就进一步提示我们 , 为什么天山大黄泻下
作用差的根本原因可能就是在于总葱醒衍生
物和结合型葱醒衍生物 , 其中尤为大黄酸 、
大黄素 、 芦荟大黄素的含量低而致 。
5
. 游离葱酿衍生物泻下等药理作用较差
是否 一与其在水中溶解度有关 。 因 其 不 溶 于
水 , 常不被水煎液提出 , 所以药 理 作 用 不
强 。 对于这个间题我们认为还可 进 一 步 探
讨 。 能否将其游离型葱酿衍生物通过化学手
段制备成水溶性成分 , 通过药理实验证明其
药理作用 ? 或者通过大量药理实验来探讨天
山大黄在其它方面的药用价值? 还有待今后
进行大量工作 。
6
,总之 , 在 50 年代搞中草药开发 , 60 年
代在药材供应不足时 , 70 年代大搞中草药运
动时 , 我区将天山大黄作药用 , 使用一段时
间 , 被 《新疆中草药》 收载。
大黄 (天山大黄 ) 我区曾用于主治 :
( 1 ) 急性盲肠炎 : 丹皮 、 桃仁 、 黄连
各三钱 , 大黄 、 银花各二钱 , 水煎服 。
( 2 ) 吐鲤血 : 仙鹤 草五 钱 , 大黄 二
钱 , 水煎服 。
( 3 ) 湿热黄疽 : 板蓝 根 、 茵 陈各 五
钱 , 大黄 、 黄芬 、 葺蒲各二钱 , 水煎服 。
( 4 ) 火盛 、 大便秘结 : 大黄 、 黄琴 、
麦冬各三钱 , 水煎服 。
( 5 ) 疮疖痈肿 : 生地 、 天冬 、 天花粉
各三钱 , 大黄 、 甘草各二钱 , 水煎服 。
( 6 ) 烫火伤 : 大黄研为细末 , 以蛋清
或香油调敷患处 。
常用量 1一 2 钱 。
在正品大黄满足供应以后 , 新疆大黄的
新疆中医药 19 9 4年第 4期
钻一06 辐射灭菌在中成药中的应用
湖南医科大学附二院药剂科 ( 41 0 0 11 ) 向大雄 赵绪 元 陈孝治
。 “ C。辐射灭菌于1 89 6年由 M in k最早 提
出 , 并于本世纪三十年代开始取得广泛应用
和发展 。 1 98 。年 12 月 4日联 合 国 粮 食 组 织
( F A O )
、世界卫生组织 (W H O ) 和 国 际
原子能机构 (I A E A ) 正式宣布 : “ 为了 保
护食品 , 在 10 千格雷 ( 1 0 0万拉德 ) 剂 量 以
内辐射任何食品不会引起毒理学的危害 。 因
此 , 用这种方法处理的食品已不 需 作 毒 理
学检查 。 ” 〔` ’
我国自七十年代开始对中药及中成药的
辐射灭菌进行广泛研究 , 并 已取得 很 大 进
展 。 本文对 “ “ C 。一T射线灭菌方法作一简短
回顾 , 以引起多方注意 , 推动辐射灭菌在中
成药灭菌中的应用 。
一 、 灭菌原理 〔 Z J
。 “ C 。辐射灭菌的机理主要是 利用 。 ” C 。
一T射线能量传递过程 , 破坏细菌细胞 中的
D N A
, 使其失去合成蛋白质和遗 传 功能 ,
使细菌细胞增殖停止而死亡 。 也有人认为是
由于射线间接作用于细菌细胞内的水分子 ,
产生了有活性的自由基 , 从而破 坏 了 细 胞
体 , 达到灭菌效用 。
二 、 。 “ C 。辐射灭菌的特点
(一 ) 辐射穿透力强 , 一般可达 40 一60
c m
。 因此中成药可以选包装后 灭 菌 , 而 无
须拆包 , 这样就可 以避免灭菌后重新污染 。
这是该法的一大优点 。
(二 ) 对温度 、 压力要求低 , 常温常压
下即可进行 , 也不会引起温度大幅度上升 ,
因而尤适合于含挥发性和热敏性成分的中成
药灭菌。
(三 ) 经研究发现 ,在 1 0 万拉德剂量下
辐射 , 对中成药色 、 香 、 味及化学成分等影
响甚微 。
( 四 ) 该方法工艺简单 , 适合于工业化
大生产 , 且节约能源 , 经济合算 。
(五 ) 不会发生放射性污染或残 留 , 不
污染环境 , 一般也不会引起药理和毒理的显
著变化 , 因而是一种安全有效的灭菌方法 。
三 、 “ 。 C O辐射对中成药的灭菌效果
。 “ C 。辐射灭菌效果可以按公式 S D · D , 。
`
N
。 _ _ _
.
_
二 、 . _ 、 。 . , _ . ~` 19资求得最佳灭菌剂量 ( S D .) 。 其中D : 。为使细菌被杀灭 90 %所需剂 量 , N 。为 原始菌
数 , N为辐射后要求达到的残留菌数 。 上 述
公式是一个初步的估算公式 。 下表为近十年
来国内部分中成药辐射灭菌实验资料 〔 2 ’ ” ’ ,
以供参考。
由下表可 以看出 , 蜜丸所需的灭菌辐射
剂量大 , 为 50 一10 0万拉德 , 而其它剂型 ,一
般 50 万拉德以下即可获得满意的灭菌效果 ,
符合国家卫生标准 。
四 、 “ “ C 。辐射灭菌对中成药有 效 成分
及药理 、 毒理的影响
. “ C 。灭菌的效果是肯定的 , 但灭 菌 后
使用自然消失 。 据反映 : 医者认为泻下作用
不明显 , 患者反映服用后肚子痛。 医院不再
购进 , 医药公司在 1 9 8 5年药政法 颁 布 施 行
后 , 将库存新疆大黄全部消毁烧掉。
据了解 , 在牧区仍有用新疆大黄作为兽
用泻下药 。 天山大黄沿天山阴坡林带下大量
分布 , 储藏量很大。 此项研究为开发天山大
黄提供参考 。
( 本文感谢指导教师李阿峰以 及 自治 区
中医 .医院副主任药师李永和指导修正 )