全 文 ：第 14 期
收稿日期:2015 － 06 － 04
基金项目:广东省自然科学基金课题(编号:S2012010010489)
作者简介:通讯作者:杨安平(1973—)，副教授。
粪箕笃中皂苷的分离纯化
王立志1，杨安平2*
(1． 佛山市仁汇医药科技有限公司，广东 佛山 528000;
2．佛山科学技术学院，广东 佛山，528000)
摘要:目的:研究粪箕笃的皂苷类化学成分，寻找新的活性物质。方法:用硅胶柱色谱进行分离，通过光谱分析(HPLC － MS，
1HNMR，13CNMR)鉴定其化学结构。结果:从粪箕笃提取物中分离得到 1 种皂苷，其化学结构鉴定为 β －谷甾醇 － 3 － O － β － D －
葡萄糖苷(1)。结论 该化合物为从本属植物中分得。
关键词:粪箕笃;皂苷;β －谷甾醇 － 3 － O － β － D －葡萄糖苷
中图分类号:TQ461 文献标识码:A 文章编号:1008 － 021X(2015)14 － 0083 － 03
粪箕笃，为多年生的草本植物，为防己科植物粪箕笃
(Herba Stephaniae Longae Stephania longa Lour．)的全草或根
茎及根，产于我国南部，主要分布于广东、广西等地，为岭南
地区特有药材，具有清热解毒、利湿消肿、祛风活络之功效，
用于热病发狂，泄泻，痢疾，小便淋涩，水肿，黄疸，风湿痹痛，
喉痹，疮痈肿毒，毒蛇咬伤［1］。杨淑君等［2］采用皮下注射丙
酸睾酮制作前列腺增生小鼠模型，观察粪箕笃乙醇提取物的
石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇等各萃取物对前列腺增生小
鼠的前列腺湿重、前列腺体积与前列腺指数的影响，结果显
示粪箕笃乙醇提取物的氯仿萃取物可明显降低前列腺增生
小鼠的前列腺湿重、前列腺体积和前列腺指数。经化学鉴别
粪箕笃乙醇提取物的氯仿萃取物为皂苷类成分，提示粪箕笃
皂苷类成分具有治疗前列腺增生的效果，为了更好地发挥其
效果，本实验以分离粪箕笃单体皂苷为目标，采用硅胶柱色
谱、高效液相色谱等进行分离，通过光谱分析(HPLC － MS，
1HNMR，13CNMR)鉴定化学结构，结果报道如下:
1 仪器与材料
核磁共振仪(瑞士 Bruker 公司产，型号:Bruker AVANCE
500 型);液相 －质谱联用仪(美国安捷伦仪器有限公司产，
型号:LC1200 型);分析型高效液相色谱(北京创新通恒仪器
有限公司产，型号:LC3000 型);半制备液相色谱(北京创新
通恒仪器有限公司产:LC3000 型)。
柱层析用硅胶(200 － 300 目，青岛海洋化工厂产，批号:
0140051)，GF254 薄层层析预制板(青岛海洋化工厂产，批
号:20140808);β －谷甾醇 － 3 － O － β － D －葡萄糖苷对照品
(中山森谱生物科技有限公司产，批号:20141225)，色谱甲醇
(霍尼韦尔贸易(上海)有限公司产，批号:NAAG3H);乙醇、
氯仿等其他试剂均为国产分析纯。
粪箕笃采集于广西，经广西中医药大学李勇华教授鉴别
为防己科千金藤属粪箕笃，批号:20140812。
2 提取与分离
称取 1． 0kg 粪基笃药材经粉碎后，按料液比 1:10 加入
65%乙醇加热浸提，提取 2 次，每次 1 小时，合并提取液，减
压浓缩得到浸膏 158g。用石油醚萃取后，用氯仿进行萃取，
得氯仿萃取物，取氯仿萃取浸膏用水混悬，水混悬液上 D101
大孔树脂，分别采用水、30%乙醇、60%乙醇及 95%的乙醇进
行洗脱，分段收集洗脱液。各取 2mL 上述分段收集液，沸水
浴上蒸干，残留物以几滴醋酐溶解，加入醋酐 －浓硫酸(20:
1)数滴，经过颜色反应确定皂苷成分在 60%乙醇洗脱部分，
浓缩后得到浸膏 5． 79g。取这部分浸膏用少量的甲醇溶解
后，按照样品:硅胶 = 1:1 的比例拌样，待样品干后加入到硅
胶柱的最上端，以氯仿:甲醇进行梯度洗脱，梯度浓度由 20:1
到 1:1，并采用醋酐 －浓硫酸方法进行鉴别，筛选出含皂苷类
成分的洗脱液进行合并，并进行分析型 HPLC 液相分析、半
制备型 HPLC液相分离、液质联用仪、核磁共振仪分析分离
得到一皂苷类化合物。
3 化合物鉴定
化合物:白色粉末，mp:293 ～ 295℃。溶于吡啶，不溶于
甲醇、水、丙酮、醋酸。紫外 365nm 下可见紫色荧光。
Liebermann － Burchard 反应和 Molish 反应均为阳性，提示为
三萜皂苷类化合物。ESI － MS m/z:599［M + Na］+，575［M －
H］－，推导其分子量为 576，ESI － MS图谱见图 1。
1H － NMR(DMSO － d6，400MHz)谱显示并根据文献［3］
归属 δ0． 65(3H，s，18 － CH3)，0． 79(3H，m，27 － CH3)，0．
81(3H，m，26 － CH3)，0． 82(3H，m，29 － CH3)，0． 90(3H，
d，J = 5． 6 Hz，21 － CH3)，0． 96(3H，m，19 － CH3)共 6 个甲
基质子信号。δ 5． 33(1H，s，6 － H)为一个双键氢信号，δ3．
64(1H，m，3 － H)为一个连氧碳上的氢信号，表明其具有甾
体化合物的氢谱特征峰。δ4． 22(1H，d，J = 7． 6 Hz)，从偶
合常数得知这个糖苷键类型为 β 构型，1H － NMR 图谱见图
2。
·38·王立志，等:粪箕笃中皂苷的分离纯化
山 东 化 工
图 1 化合物 1 的 ESI － MS图谱
图 2 化合物 1 的 1H － NMR图谱
在 13C － NMR(DMSO － d6，400MHz)谱中，位于低场的
δ140． 42(C － 5)和 δ121． 14(C － 6)为两个烯碳信号，且
δ140． 42、121． 14 提示为角甲基双键特征峰信号。在 δ100． 79
处给出一个葡萄糖端基 C － 1＇信号，根据其化学位移得知糖
苷键为 β构型，并在 δ 61． 06 ～ 76． 73 出现了与 β － D －吡喃
葡萄糖苷一致的 5 个碳信号(Glc － C － 2＇～ C － 6＇:73． 5，76． 9，
70． 1，76． 7，61． 1)，确定分子结构中存在一个葡萄糖基，13C －
NMR数据详见表 1，13C － NMR图谱见图 3。
·48· SHANDONG CHEMICAL INDUSTRY 2015 年第 44 卷
第 14 期
图 3 化合物 1 的 13C － NMR图谱
经 TLC分析，在三个不同展开系统中展开，Rf 值均与对
照品一致，且混合测定熔点不下降，故鉴定化合物为 β －谷
甾醇 － 3 － O － β － D －葡萄糖苷，分子结构图见图 4。
表 1 化合物 1 13C － NMR数据
No． δNo． δNo． δ
1 36． 8 13 41． 8 25 28． 7
2 29． 3 14 56． 2 26 19． 7
3 76． 7 15 23． 9 27 19． 1
4 38． 9 16 27． 8 28 22． 6
5 140． 4 17 55． 4 29 11． 8
6 121． 2 18 11． 7 1＇ 100． 8
7 31． 4 19 18． 9 2＇ 73． 5
8 31． 4 20 35． 5 3＇ 76． 9
9 49． 6 21 18． 6 4＇ 70． 1
10 36． 2 22 33． 3 5＇ 76． 7
11 20． 6 23 25． 4 6＇ 61． 1
12 40． 1 24 45． 1
图 4 化合物 1 的结构图
4 讨论
前列腺增生肥大，属祖国医学“癃闭”范畴。有急慢性之
分，其原因多由湿热之邪蕴结下焦，使得肾和膀胱气化失司，
进而尿量减少，排尿困难，甚则小便不通［4］。粪箕笃
(Stephania longa Lour．)为防己科植物，主产广东、广西(特别
是桂西北大量出产)等地，粪箕笃味辛，性平，具有清热解毒、
利湿通便、消疮肿等功效［5］，民间常用其煎剂作清热消毒、利
尿消肿，治疗前列腺肥大。粪箕笃为防己科植物，防己科植
物主要含有生物碱类成分，部分含有非生物碱类成分，劳爱
娜在粪箕笃生物碱化学成分系列研究［6 － 8］中先后发现五种
莲花氏烷型生物碱，分别为 stephaboline(Ⅰ)、longanine(Ⅱ)、
longanone(Ⅲ)、stephabyssine(Ⅳ)、prostephabyssine(Ⅴ)等，
邓京振等［9］在粪箕笃地上部分非碱性成分的分离和鉴定研
究中分离得到 5 个非碱性成分，分别鉴定为阿魏酸 －对羟基
苯乙醇酯、对 －香豆酸 －对羟基苯乙醇酯、桂皮酸、β －谷甾
醇及 β －谷甾醇 － D －葡萄糖苷。林启云等［10］通过观察粪
箕笃各提取物的利尿实验实验证实粪箕笃醇提物有利于排
尿效果，进一步研究证实非生物碱有明显有利于排尿作用，
生物碱部分不但没有有利于排尿效果，反而有抑制排尿作
用。提示非生物碱是粪箕笃治疗前列腺肥大的有效成分之
一。杨淑君等［2］观察粪箕笃乙醇提取物的石油醚、氯仿、乙
酸乙酯、正丁醇等各萃取物对前列腺增生小鼠的前列腺湿
重、前列腺体积与前列腺指数的影响，结果显示粪箕笃乙醇
提取物的氯仿萃取物可明显降低前列腺增生小鼠的前列腺
湿重、前列腺体积和前列腺指数，经化学鉴别粪箕笃乙醇提
取物的氯仿萃取物为皂苷类成分，提示粪箕笃皂苷类成分具
有治疗前列腺增生的效果。本实验对从粪箕笃乙醇提取物
的氯仿萃取物中分离皂苷单体成分，从中分离纯化出 β －谷
甾醇 － 3 － O － β － D －葡萄糖苷，与邓京振等［9］在粪箕笃地
上部分非碱性成分的分离和鉴定研究中分离得到 β －谷甾
醇 － D －葡萄糖苷成分为同一化合物。下一步可对该化合物
进行进一步治疗前列腺增生药效学的研究。
( 下转第 87 页)
·58·王立志，等:粪箕笃中皂苷的分离纯化
第 14 期
检测器温度的设置原则是保证流出色谱柱的组分不会
冷凝，同时满足检测器灵敏度的要求。大部分检测器的灵敏
度受温度影响不大，故检测器温度可参照色谱柱的最高温度
设定。PLOT － Q毛细管色谱柱的最高使用温度为 270℃，因
此，试验选择检测温度为 250℃。
2． 3 色谱柱温度的选择
色谱柱温度是影响分离效率并决定分析时间的主要因
素之一，柱温的确定主要由样品的复杂程度和汽化温度决
定。原则在要保证所有组分能流出色谱柱的前提下分析时
间越短越好。因为糠醛的高沸点在色谱柱保留时间较长，为
不给后续进样带来影响，所以采用程序升温，开始较低温度
运行至水完全出峰后，逐渐升高温度使试样较快出峰。分流
比越大，水峰型越尖锐，基线越平稳，而且色谱柱的耐受性也
越好，但分流比太大会影响灵敏度，故分流比选择 15:1。工
业糠醛样品色谱图见图 1。
从色谱图可以看出，水与空气峰能完全分离从而不影响
水分的测定，在最佳色谱条件下，水在 1． 2min 左右出峰，样
品在 10min内全部出峰。
图 1 工业糠醛样品色谱图(1 －空气;2 －水;3 －糠醛)
2． 4 结果计算
样品中的水分含量按下式计算:ω水 =
A1
A2 － A1
× 100
式中:ω水———样品中水的质量分数，以%表示;
A1———样品中水的峰面积;
A2———加水标样中水的峰面积。
2． 5 方法的精密度和回收率试验
分别测定 3 个水分含量不相同的糠醛产品取 3 种不同
厂家生产的工业糠醛，编号分别为 1#、2#、3#，按照 1． 4 所述
的方法进行气相色谱测定，根据色谱图中水的峰面积和样品
中加水量，按照 2． 4 的公式计算样品中水的百分含量。每种
样品平行测定 5 次，计算标准偏差(方法精密度)，计算结果
见表 1。
表 1 样品测定及精密度结果(n = 5)
样品 样品含量 /% 平均值 /% RSD /%
1# 0． 031 0． 032 0． 033 0． 031 0． 030 0． 031 0． 1
2# 0． 10 0． 10 0． 11 0． 12 0． 11 0． 11 0． 8
3# 0． 18 0． 18 0． 20 0． 19 0． 17 0． 18 1． 1
2． 6 加标回收率及精密度测定
取 2#样品进行加标回收试验，分别准确加入 0． 0035，0．
0068，0． 0151，0． 0250，0． 0508g 水于样品中，按照 1． 4 所述方
法进行气相色谱测定。
表 2 2#样品加标回收率测定结果
加标量 / g 测定量 / g 回收率 /%
0． 0035 0． 0034 97． 1
0． 0068 0． 0069 101． 5
0． 0151 0． 0150 99． 3
0． 0250 0． 0248 99． 2
0． 0508 0． 0510 100． 4
从表 1 和表 2 的测定结果可以看出，加标回收率在 97．
1% ～ 101． 5%，相对标准偏差小于 5%，表明所建立的分析方
法结果准确、可靠，可以满足日常分析检测的要求。
参考文献
［1］齐景杰．醛、酮类有机溶剂中国水分的测定［J］． 山东化
工，2011，40(7):52，69．
［2］姚 斐．卡尔费休法测定丁醛中微量水分［J］．化学分析
计量，2006，15(3):61 － 62．
［3］刘卫东，赵雪蓉，徐 伟，等． 气相色谱反吹法测定糠醛
中水分含量［J］．辽宁化工，1999，28(6):360 － 361．
(本文文献格式:李世慧，赵玉美，于朋玲，等．色谱法测定醛、
酮产品中水分［J］．山东化工，2015，44(14):86 － 87．
檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯
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参考文献
［1］广西壮族自治区食品药品监督管理局． 广西壮族自治
区壮药质量标准(第二卷)［M］．广西:广西科学技术出
版社，2011:290 － 291．
［2］杨淑君，蔡小连，杨安平． 粪箕笃治疗前列腺增生小鼠有
效部位的筛选［J］．医药前沿，2013(25):214 － 215．
［3］郑 蕾． 紫花地丁有效成分的提取及质量标准的研究
［D］．吉林大学，2009:26 － 28．
［4］侯风东，冯连川． 中药内服及外用治疗前列腺增生效果
观察［J］．齐齐哈尔医学院学报，2009，30(15):1885．
［5］江苏新医院编． 中药大辞典(下册) ［M］．上海:上海人
民出版社，1977:2421．
［6］劳爱娜，高耀良，唐宗俭，等． 粪箕笃生物碱化学成分的
研究［J］．化学学报，1982，40(11):1038 － 1043．
［7］劳爱娜，唐宗俭，徐任生． 防己科植物粪箕笃化学成分研
究(Ⅱ)［J］．药学学报，1981，16(12):940 － 942．
［8］劳爱娜，高耀良，唐宗俭，等． 防己科植物粪箕笃化学成
分研究［J］．药学学报，1980，15(11):696 － 698．
［9］邓京振，赵守训． 粪箕笃地上部分非碱性成分的分离和
鉴定［J］．中国药科大学学报，1993，24(2):73 － 75．
［10］林启云，谢金鲜． 粪箕笃利尿、镇静及镇痛作用研究
［J］．广西中医药，2001，24(3):43 － 45．
(本文文献格式:王立志，杨安平． 粪箕笃中皂苷的分离纯化
［J］．山东化工，2015，44(14):83 － 85，87．)
·78·李世慧，等:气相色谱法测定醛、酮产品中水分